技术特征：
1.一种研究淡水超微真核藻群落结构多样性的固定方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤1：按区域将水体划分为上、中和下游三个采样区域，且分别对每个区域分为上中下层的水样，等分区域并设置采样点，在不同采样点通过采水器每隔两小时取样一次，并将所有采集的水体混合，得到待固定水样；步骤2：将步骤1获得的待固定水样置于离心管中，加入体积占比为0.01%
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0.05%的泊洛沙姆溶液作为固定剂，进行混匀并静置，得到混合样品；步骤3：将步骤2中得到的混合样品置于液氮中进行速冻；步骤4：将速冻好的混合样品拿出，放入超低温冰箱冷藏，得到保藏样品；步骤5：拿出保藏样品解冻，得到固定后样品。2.根据权利要求1所述的研究淡水超微真核藻群落结构多样性的固定方法，其特征在于：所述步骤2中加入的泊洛沙姆的体积占比为0.01%。3.根据权利要求1所述的研究淡水超微真核藻群落结构多样性的固定方法，其特征在于：所述步骤3中的液氮速冻温度为
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200~
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100℃，所述步骤4中的超低温冰箱冷藏的温度为
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90~
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70℃。4.根据权利要求3所述的研究淡水超微真核藻群落结构多样性的固定方法，其特征在于：所述步骤3中的液氮速冻温度为
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196℃，所述步骤4中的超低温冰箱冷藏的温度为
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80℃。5.根据权利要求1所述的研究淡水超微真核藻群落结构多样性的固定方法，其特征在于：将步骤5得到的固定后样品，提取dna后，再使用磁珠法浓缩，磁珠法具体步骤为：将磁珠液和磁珠加入解冻后的保藏样品中获得混合溶液并孵育，dna结合到磁珠上，待混合溶液澄清后移除上清液，加入无核酸酶水，静置后得到浓缩，得到浓缩dna。6.根据权利要求5所述的研究淡水超微真核藻群落结构多样性的固定方法，其特征在于：所述磁珠法中磁珠液使用前提前取出，静置至室温，充分混匀后将磁珠液加入解冻后的保藏样品中，使用移液器吸打混匀，将保藏样品置于磁力架上，通过室温孵育将保藏样品中dna结合至磁珠上，移去上清液后，加入100~300 μl新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，再室温孵育并移去上清液，保藏样品仍置于磁力架上，重复漂洗步骤1~2次，在室温下干燥5~10min，将处理后的保藏样品取下，加入无核酸酶水，混合均匀后静置吸取上清液。
技术总结
本发明涉及一种研究淡水超微真核藻群落结构多样性的固定方法，属于环境科学超微真核藻细胞数和群落结构监测和研究技术领域。按区域将水体划分为上、中和下游三个采样区域，且分别对每个区域分为上中下层的水样，等分区域并设置采样点，在不同采样点通过采水器每隔两小时取样一次，并将所有采集的水体混合，得到待固定水样置于离心管中，加入泊洛沙姆溶液作为固定剂，进行混匀并静置，得到混合样品。将混合样品置于液氮中进行速冻。将速冻好的混合样品拿出，放入超低温冰箱冷藏，得到保藏样品。拿出保藏样品解冻，得到固定后样品。本发明不仅能保持超微真核藻丰度一致，更能维持超微真核群落多样性和群落结构稳定，并且适用于各湖泊样品。样品。样品。
技术研发人员：史小丽 雷瑾 刘常清 张民 阳振 陈开宁
受保护的技术使用者：中国科学院南京地理与湖泊研究所
技术研发日：2021.06.16
技术公布日：2021/10/23