技术特征：
1.一种具有乳酸产生能力的重组菌株，所述重组菌株是通过从耐酸酵母ybc菌株(kctc13508bp)中缺失编码丙酮酸脱羧酶的基因，并在编码丙酮酸脱羧酶的基因的位置引入编码源自表皮葡萄球菌(staphylococcus epidermidis)的乳酸脱氢酶的基因构建而成。2.根据权利要求1所述的重组菌株，其中所述编码源自表皮葡萄球菌的乳酸脱氢酶的基因由seq id no:1表示。3.根据权利要求1所述的重组菌株，其中编码醇脱氢酶的基因被进一步缺失或失活。4.根据权利要求1所述的重组菌株，其中编码将磷酸二羟丙酮转化为甘油
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磷酸的酶的基因被进一步缺失或失活。5.根据权利要求1所述的重组菌株，其中编码将乳酸盐转化为丙酮酸盐的酶的基因被进一步缺失或失活。6.一种具有乳酸产生能力的重组菌株，所述重组菌株是通过从耐酸酵母ybc菌株(kctc13508bp)中缺失编码将磷酸二羟丙酮转化为甘油
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磷酸的酶的gpd1基因、编码将乳酸盐转化为丙酮酸盐的酶的cyb2基因、编码醇脱氢酶的adh基因以及编码丙酮酸脱羧酶的pdc基因，并将编码乳酸脱氢酶的基因引入至所述耐酸酵母ybc菌株构建而成，其中所述编码乳酸脱氢酶的基因被引入缺失的adh基因的位置、缺失的pdc基因的位置和缺失的gpd1基因的位置处，并且在所述缺失的pdc基因的位置处引入的所述编码乳酸脱氢酶的基因是编码源自表皮葡萄球菌的乳酸脱氢酶的基因。7.根据权利要求6所述的重组菌株，其中所述编码源自表皮葡萄球菌的乳酸脱氢酶的基因由seq id no:1表示。8.根据权利要求6所述的重组菌株，其中在所述缺失的adh基因和缺失的gpd1基因的位置处引入的所述编码乳酸脱氢酶的基因源自表皮葡萄球菌或植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)。9.一种生产具有提高的乳酸耐受性和提高的乳酸产生能力的重组酵母菌株的方法，所述方法包括：(a)通过从在低浓度乳酸培养基中到在高浓度乳酸培养基中循序地培养具有乳酸产生能力的重组酵母菌株，来诱导所述重组酵母菌株向高乳酸浓度的适应性进化；(b)选择在所述高浓度乳酸培养基中具有提高的乳酸产生能力的重组酵母菌株；以及(c)在所选菌株的基因组的pdc基因的位置处引入编码源自表皮葡萄球菌的乳酸脱氢酶的基因。10.根据权利要求9所述的方法，其中步骤(a)中所述具有乳酸产生能力的重组酵母菌株是通过从耐酸酵母ybc菌株(kctc13508bp)中缺失编码将磷酸二羟丙酮转化为甘油
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磷酸的酶的gpd1基因、编码将乳酸盐转化为丙酮酸盐的酶的cyb2基因、编码醇脱氢酶的adh基因和编码丙酮酸脱羧酶的pdc基因，并将编码乳酸脱氢酶的基因引入至所述耐酸酵母ybc菌株构建而成的ybc5菌株，其中所述编码乳酸脱氢酶的基因被引入缺失的adh基因的位置、缺失的pdc基因的位置和缺失的gpd1基因的位置处。11.一种重组菌株#26
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5(登记号：kctc 14215bp)，其通过具有乳酸产生能力的重组菌株在高乳酸浓度下的适应性进化构建而成，所述具有乳酸产生能力的重组菌株通过从耐酸
酵母ybc菌株(kctc13508bp)中缺失编码将磷酸二羟丙酮转化为甘油
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磷酸的酶的gpd1基因、编码将乳酸盐转化为丙酮酸盐的酶的cyb2基因、编码醇脱氢酶的adh基因和编码丙酮酸脱羧酶的pdc基因，并将编码乳酸脱氢酶的基因引入至所述耐酸酵母ybc菌株构建而成。12.一种重组酵母ybc6菌株，所述重组酵母ybc6菌株通过在重组菌株#26
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5(登记号：kctc 14215bp)的基因组的pdc基因的位置处引入编码源自表皮葡萄球菌的乳酸脱氢酶的基因构建而成，与ybc菌株(kctc13508bp)或ybc5菌株相比，所述重组酵母ybc6菌株具有在高乳酸浓度下提高的乳酸产生能力和被抑制的乙醇和甘油的产生能力。13.一种生产乳酸的方法，所述方法包括：(a)培养根据权利要求1至6、11和12中任一项所述的菌株以产生乳酸；和(b)收集产生的乳酸。
技术总结
本发明公开了一种具有提高的乳酸产生能力的重组耐酸酵母及使用其制备乳酸的方法。当使用根据本发明的重组耐酸酵母生产乳酸时，不仅可以使用比常规细菌发酵情况下明显更少量的中和剂以与细菌发酵相似的乳酸产生能力进行乳酸发酵，而且可以减少副产物乙醇和甘油的产生。因此，发酵成本可以大大降低，后续纯化过程的成本也可以降低。程的成本也可以降低。
技术研发人员：朴宰演 李泰荣 李气成
受保护的技术使用者：SK新技术株式会社
技术研发日：2021.06.24
技术公布日：2021/12/23