作为AXL抑制剂的三唑并吡啶化合物的制作方法

作为axl抑制剂的三唑并吡啶化合物
技术领域
1.本发明属于药物化学领域，具体涉及作为axl抑制剂的三唑并吡啶化合物，这些化合物可用于治疗axl介导的疾病和病况。


背景技术：

2.axl(也称为ufo、ark和tyro7或jtk11)，是受体酪氨酸激酶(rtks)中的tam家族成员之一。axl由胞外区、跨膜区和胞内区组成。胞外配体结合区域包括两个免疫球蛋白(ig)样重复序列和两个纤维连接蛋白iii型(fro iii)样重复序列。胞内段对于自身磷酸化和随后的激酶活性至关重要(zhu c,wei y,wei x.mol cancer.2019 nov 4；18(1):153.)。axl和其他tma家族成员一样，通过与维生素k依赖性蛋白配体生长停滞特异性蛋白6((gas6))的相互作用而被部分激活。axl蛋白在正常组织中表达，特别是在骨髓基质和骨髓细胞，以及肿瘤细胞和肿瘤血管系统(gay cm,balaji k,byers la.br j cancer.2017 feb14；116(4):415-423.)。
3.axl信号刺激细胞反应，包括磷酸肌醇3-激酶-akt的激活、细胞外信号调节激酶(erk)和p38丝裂原活化蛋白激酶级联、nf-κb通路以及信号转导和转录激活因子(stat)信号传导(3).此外，axl信号传导是驱动入侵、迁移、存活信号传导、血管生成、对化疗和靶向药物的抗性、细胞转化和增殖的重要途径。在许多人类肿瘤中观察到高axl表达，并且该表达与癌症患者的肿瘤进展相关。因此，axl可以作为癌症治疗的潜在靶点。第一个针对axl激酶的选择性抑制剂是化合物r428(bgb-324)。其作用机制是抑制axl的磷酸化，打破膜上axl激酶的稳态调控，从而下调axl膜上的表达量。(apatira a,chua j,等.cancer res.2010 feb 15；70(4):1544-54.)。bgb-324是bergenbio公司研发的同类首创、高选择性、生物可用的口服axl小分子抑制剂，其结构如下：
[0004][0005]
此外，专利文献wo2009047514a1也披露了作为axl抑制剂的化合物。


技术实现要素：

[0006]
一方面，本发明提供化合物i或其药学上可接受的盐:
[0007][0008]
其中，环a选自苯基或5～10元杂芳基，任选地被一个或多个r1取代基取代，r1选自下列基团：-so2nr2r3、卤素、c1-c6烷基、(c1-c6烷基)-o-、(5～10元杂环基)-o-、苯基-o-、(5～6元杂芳基)-o-、氰基或硝基，其中(5～10元杂环基)-o-、苯基-o-、和(5～6元杂芳基)-o-任选地被一个或多个r4取代基取代，r4选自c1-c3烷基、卤素、氰基或硝基，r2和r3各自独立地选自氢或c1-c6烷基。
[0009]
在一些实施方案中，环a选自苯基或5～6元杂芳基，任选地被一个或多个r1取代基取代，r1定义如上。
[0010]
在一些实施方案中，环a选自苯基、咪唑基、恶唑基、异恶唑基、噻唑基、异噻唑基、三唑基、恶二唑基、噻二唑基、四唑基、恶三唑基、噻三唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、1,2,3-三嗪基、1,2,4-三嗪基或1,3,5-三嗪基，任选地被一个或多个r1取代基取代，r1定义如上；优选地，环a选自苯基、咪唑基、恶唑、噻唑基、吡啶基或嘧啶基，任选地被一个或多个r1取代基取代，r1定义如上；更优选地，环a选自苯基或吡啶基，任选地被一个或多个r1取代基取代，r1定义如上。
[0011]
在一些实施方案中，环a选自任选地被一个或多个r1取代基取代，r1选自下列基团：-so2nr2r3、卤素、c1-c6烷基、(c1-c6烷基)-o-、(5～10元杂环基)-o-或苯基-o-，其中(5～10元杂环基)-o-和苯基-o-任选地被一个或多个r4取代基取代，r2、r3和r4定义如上。
[0012]
在一些实施方案中，环a选自任选地被一个或多个r1取代基取代，r1选自下列基团：-so2n(ch3)2、-so2n(ch2ch3)2、卤素、甲基、乙基、ipr-o-、ch3o-、ch3ch2o-、哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、1,3-二氧戊环基、四氢呋喃基、四
氢噻吩基、四氢噻喃基、四氢吡啶基、二氢吡啶基、其中哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、1,3-二氧戊环基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢噻喃基、四氢吡啶基、二氢吡啶基、任选地被一个或多个r4取代基取代，r4定义如上；优选地，在一些实施方案中，环a选自任选地被一个或多个r1取代基取代，r1选自下列基团：-so2n(ch3)2、-so2n(ch2ch3)2、卤素、甲基、乙基、ipr-o-、ch3o-、ch3ch2o-、哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、1,3-二氧戊环基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢噻喃基、四氢吡啶基、二氢吡啶基、喃基、四氢噻吩基、四氢噻喃基、四氢吡啶基、二氢吡啶基、其中哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、1,3-二氧戊环基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢噻喃基、四氢吡啶基、二氢吡啶基、任选地被一个或多个r4取代基取代，r4定义如上。
[0013]
在一些实施方案中，环a选自任选地被一个或多个r1取代基
取代，r1选自下列基团：-cl、ipr-o-、-so2n(ch3)2或其中，其中，任选地被一个或多个r4取代基取代，r4为甲基；优选地，r1选自下列基团：ipr-o-、-so2n(ch3)2或
[0014]
在一些实施方案中，环a为其被ipr-o-取代；优选地，环a为
[0015]
另一方面，本发明提供下列化合物或其药学上可接受的盐：
[0016][0017]
在一些实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的化合物i或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
[0018]
在一些实施方案中，本发明提供了化合物i或其药学上可接受的盐用于制备治疗和/或预防axl受体酪氨酸激酶诱发的病症的药物。
[0019]
在一些实施方案中，所述axl受体酪氨酸激酶诱发的病症是由axl激酶功能亢进引起、与axl激酶功能亢进相关和/或伴随axl激酶功能亢进的病症。
[0020]
在一些实施方案中，所述axl受体酪氨酸激酶诱发的病症选自乳癌、结肠癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、子宫内膜癌、肾癌、肝细胞癌、甲状腺癌、子宫癌、食道癌、鳞状细胞癌、骨肉瘤、黑素瘤、成胶质细胞瘤及成神经细胞瘤。
[0021]
另一方面，本发明提供一种制备化合物i的方法，包括将化合物i-1与化合物i-2在一定碱、催化剂和溶剂的条件下反应，得到化合物i，
[0022][0023]
相关定义
[0024]
除非有特定说明，下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义：
[0025]
本发明“化合物”可以是不对称的，例如，具有一个或多个手性中心。除非另有说明，本发明的“化合物”指的是任意一种立体异构体或两种以上的立体异构体的混合物。立体异构体包括但不限于对映异构体和非对映异构体。本发明的含有不对称碳原子的化合物可以以光学活性纯的形式或两种以上的立体异体的混合物的形式被分离得到。光学活性纯的形式可以从两种以上的立体异构体的混合物中进行拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。
[0026]
术语“氰基”是指-cn基团。
[0027]
术语“硝基”是指-no2基团。
[0028]
术语“卤素”指氟、氯、溴和碘。
[0029]
术语“烷基”指饱和的脂族烃基团，包括直链的或支链的饱和烃基，所述烃基具有所示出的碳原子数。如术语“c1-c6烷基”包括c1烷基、c2烷基、c3烷基、c4烷基、c5烷基、c6烷基，实例包括，但不限于，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、正己基、2-己基和3-己基等。
[0030]
术语“(c1-c3烷基)-o
‑”
指具有烷基-o-结构的基团，烷基为包括直链的或支链的饱和一价烃基。包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基或异丙氧基。
[0031]
术语“元”是指组成环的骨架原子或原子团的数目。例如，“5-6元”是指组成环的骨架原子或原子团的数目为5个或6个。因此，举例而言，吡啶、哌啶、哌嗪和苯为六元环，而噻吩、吡咯为五元环。
[0032]
术语“杂芳基”是指芳族碳环基，其中至少一个环原子是独立地选自氮、氧和硫的杂原子，其它环原子为碳。杂芳基可任选地被一个或多个本技术所述的取代基独立地取代。在一个实例中，所述杂芳基是5元～10元杂芳基；在另一个实例中，所述杂芳基是5元～6元杂芳基。杂芳基的实例包括但不限于，苯基、咪唑基、恶唑基、异恶唑基、噻唑基、异噻唑基、三唑基、恶二唑基、噻二唑基、四唑基、恶三唑基、噻三唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、1,2,3-三嗪基、1,2,4-三嗪基或1,3,5-三嗪基。
[0033]
术语“杂环基”指饱和的环基团或部分不饱和的环基团，其中至少一个环原子是独立地选自氮、氧、磷和硫的杂原子，其余环原子为c。在一实施方案中，杂环基包括具有5～10元的单环或二环。杂环基的实例包括但不限于哌啶基、吡咯烷基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、1,3-二氧戊环基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢噻喃基、四氢吡啶基、二氢吡啶基。所述杂环基团可被任选地取代，除非特别禁止。
[0034]
术语“任选”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可能发生或可能不发生，该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。
[0035]
本文中的数字范围，是指给定范围中的各个整数。例如，“c1-c3”是指该基团可具有1个碳原子、2个碳原子或3个碳原子；“c1-c6”是指该基团可具有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子或6个碳原子。
[0036]
术语“被取代”是指特定基团上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，只要特定基团的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。例如，“被卤素取代”是指特定基团上的任意一个或多个氢原子被卤素取代，只要特定基团的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。
[0037]
中的是指化学键连接处。
[0038]
术语“药学上可接受的盐”是指保留了特定化合物的游离酸和碱的生物学效力而没有生物学不良作用的盐。例如酸(包括有机酸和无机酸)加成盐或碱加成盐(包括有机碱和无机碱)。
[0039]
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
[0040]
术语“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。
[0041]
术语“药学上可接受的载体”是指对机体无明显刺激作用，而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些载体。包括但不限于国家食品药品监督管理局许可的可用于人或动物的任何稀释剂、崩解剂、粘合剂、助流剂和润湿剂。
[0042]
权利要求书和说明书中所使用的简称其含义如下：
[0043]“v/v”是指重量比；
[0044]
m:mol/l；
[0045]
mm：mmol/l；
[0046]
μm：μmol/l；
[0047]
nm：nmol/l；
[0048]
dmso：二甲基亚砜。
具体实施方式
[0049]
下面更具体地描述本发明的化合物的制备方法，但这些具体的制备方法不对本发明的范围构成任何限制。此外，反应条件如反应物、溶剂、碱、所用化合物的量、反应温度、反应时间等不限于下面的实施例。
[0050]
本发明的化合物还可以任选地将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而方便制得，这样的组合可由本领域的技术人员容易地进行。
[0051]
实施例1：(s)-5-(4-氯-2-异丙氧基苯基)-n-(7-(吡咯烷-1-基)-6,7,8,9-四氢-5h-苯并[7]轮烯-2-基)-[1,2,4]三唑[1,5-a]吡啶-2-胺
[0052][0053]
a)2-(4-氯-2-异丙氧基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷
[0054]
将1-溴-4-氯-2-异丙氧基苯(32.1mmol)，双联频哪醇硼酸酯(38.5mmol)，1,1
’‑
双二苯基膦二茂铁二氯化钯(3.21mmol)，乙酸钾(128.4mmol)及1,4-二氧六环(40ml)放入100ml三口瓶中，并用氮气保护。接着于85℃油浴下反应15h。停止反应。向反应液中加入水(50ml)，乙酸乙酯萃取(50mlx2)萃取。合并有机层，依次用水洗、饱和氯化钠洗，有机层减压浓缩至干，所得残余物经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10：1v/v)得到标题产物(12.6mmol)。
[0055]
b)5-(4-氯-2-异丙氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-胺
[0056]
将2-(4-氯-2-异丙氧基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(1.13mmol)，5-溴-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-胺(1.47mmol)，1,1
’‑
双二苯基膦二茂铁二氯化钯(0.12mmol)，碳酸钾(2.26mmol)，1,4-二氧六环(10ml)及水(2ml)放入50ml三口瓶中，并用氮气保护。接着于100℃油浴下反应5h。之后停止反应，反应液减压浓缩至干，所得残余物经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10：1v/v)得到标题产物(0.66mmol)。ms(esi+):303.1(m+h)。
[0057]
c)5-(4-氯-2-异丙氧基苯基)-2-碘-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶
[0058]
将5-(4-氯-2-异丙氧基苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-胺(0.67mmol,)，一水合对甲苯磺酸(3.4mmol)及乙腈(20ml)加入到100ml单口瓶，搅拌并降温至-20℃。接着将亚硝酸钠(1.68mmol)及碘化钾(1.34mmol)用水(1ml)溶解，并滴加到反应液中。保温搅拌30min,之后移至室温搅拌2h。当原料反应完全后，停止反应。乙酸乙酯(30ml)及水(30ml)加入到反应液中，之后加入过硫酸钠饱和溶液(30ml)，搅拌，萃取。水层用乙酸乙酯(30ml)再次萃取。合并有机相，依次用水洗，饱和食盐水洗，以及无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩至干，所得残余物经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝10：1v/v)得到标题产物(0.48mmol)。ms(esi+):414.2(m+h)。
[0059]
d)(s)-5-(4-氯-2-异丙氧基苯基)-n-(7-(吡咯烷-1-基)-6,7,8,9-四氢-5h-苯并[7]轮烯-2-基)-[1,2,4]三唑[1,5-a]吡啶-2-胺
[0060]
将5-(4-氯-2-异丙氧基苯基)-2-碘-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶(0.68mmol)，(s)-7-(吡咯烷-1-基)-6,7,8,9-四氢-5h-苯并[7]轮烯-2-胺(0.57mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0.07mmol)，叔丁醇钠(1.36mmol)，4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽(0.17mmol)及1,4-二氧六环置于100ml单口瓶中，氮气保护。将反应液置于100℃油浴中搅拌5h。当反应完全后，将反应液减压浓缩至干，所得残余物经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝
10：1v/v)得到标题产物(0.06mmol)。
[0061]1h nmr(400mhz,dmso-d6,ppm)δ9.44(s,1h),7.63-7.53(m,3h),7.42(d,j＝2.1hz,1h),7.38(dd,j＝8.1,2.2hz,1h),7.31(d,j＝1.9hz,1h),7.15(dd,j＝8.2,1.9hz,1h),7.02
–
6.97(m,2h),4.67(dt,j＝12.1,6.0hz,1h),3.18-3.04(m,4h),2.82
–
2.54(m,5h),2.28-2.14(m,2h),1.85(br,4h),1.49-1.34(m,2h),1.10(s,3h),1.08(s,3h).ms(esi+):516.3(m+h).
[0062]
实施例2(s)-5-(3-异丙氧基苯基)-n-(7-(吡咯烷-1-基)-6,7,8,9-四氢-5h-苯并[7]轮烯-2-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-胺
[0063][0064]
参考实施例1步骤b)～d)，将实施例1中步骤b)的2-(4-氯-2-异丙氧基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷替换为(3-异丙氧基苯基)硼酸。
[0065]1h nmr(400mhz,dmso-d6,ppm)δ9.46(s,1h),8.03
–
7.99(m,1h),7.89
–
7.78(m,2h),7.67
–
7.59(m,3h),7.39
–
7.31(m,2h),7.05
–
7.00(m,1h),6.95(d,j＝8.1hz,1h),3.6-3.23(m,6h),3.15-2.92(m,6h),2.81
–
2.57(m,4h),2.20-2.05(m,2h),1.82(s,4h),1.48-1.32(m,2h).ms(esi+):482.3(m+h).
[0066]
实施例3(s)-n,n-二甲基-3-(2-((7-(吡咯烷-1-基)-6,7,8,9-四氢-5h-苯并[7]轮烯-2-基]氨基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-基)苯磺酰胺
[0067][0068]
参考实施例1步骤b)～d)，将实施例1中步骤b)的2-(4-氯-2-异丙氧基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷替换为(3-(n,n-二甲基氨磺酰基)苯基)硼酸。
[0069]1h nmr(400mhz,dmso-d6,ppm)δ9.49(s,1h),8.51(s,1h),8.35(d,j＝7.7hz,1h),7.96-7.85(m,2h),7.71
–
7.59(m,2h),7.46(dd,j＝8.0,2.1hz,1h),7.38(d,j＝1.9hz,1h),7.30(dd,j＝7.1,1.1hz,1h),7.02(d,j＝8.2hz,1h),3.12-2.94(br,5h),2.86-2.74(m,2h),2.68(s,6h),2.66-2.54(m,2h),2.22-2.06(m,2h),1.82(br,4h),1.52-1.36(m,2h).ms(esi+):531.3(m+h).
[0070]
实施例4：(s)-n,n-二甲基-2-(2-((7-(吡咯烷-1-基)-6,7,8,9-四氢-5h-苯并[7]轮烯-2-基)氨基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-基)苯磺酰胺
[0071][0072]
参考实施例1步骤b)～d)，将实施例1中步骤b)的2-(4-氯-2-异丙氧基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷替换为(2-(n,n-二甲基氨磺酰基)苯基)硼酸。
[0073]1h nmr(400mhz,dmso-d6,ppm)δ9.46(s,1h),8.03
–
7.99(m,1h),7.89
–
7.78(m,2h),7.67
–
7.59(m,3h),7.39
–
7.31(m,2h),7.05
–
7.00(m,1h),6.95(d,j＝8.1hz,1h),3.6-3.23(m,5h),3.15-2.92(m,6h),2.81
–
2.57(m,4h),2.20-2.05(m,2h),1.82(s,4h),1.48-1.32(m,2h).ms(esi+):531.3(m+h).
[0074]
实施例5(s)-5-(4-异丙氧基苯基)-n-(7-(吡咯烷基-1-基)-6,7,8,9-四氢-5h-苯并[7]轮烯-2-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-胺
[0075][0076]
参考实施例1步骤b)～d)，将实施例1中步骤b)的2-(4-氯-2-异丙氧基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷替换为(4-异丙氧基苯基)硼酸。
[0077]1h nmr(400mhz,dmso-d6,ppm)δ9.46(s,1h),8.05(d,j＝8.8hz,2h),7.68
–
7.57(m,1h),7.58
–
7.45(m,2h),7.39(dd,j＝8.1,2.1hz,1h),7.22
–
7.07(m,3h),7.03(d,j＝8.2hz,1h),4.77(dt,j＝12.0,6.0hz,1h),3.01(br,5h),2.88-2.74(m,2h),2.75
–
2.59(m,2h),2.48-2.06(m,2h),1.82(s,4h),1.57
–
1.40(m,2h),1.34(s,3h),1.33(s,3h).ms(esi+):482.3(m+h).
[0078]
实施例6(s)-n,n-二甲基-4-(2-(((7-(吡咯烷-1-基)-6,7,8,9-四氢-5h-苯并[7]轮烯-2-基]氨基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-5-基)苯磺酰胺
[0079][0080]
参考实施例1步骤b)～d)，将实施例1中步骤b)的2-(4-氯-2-异丙氧基苯基)-4,4,
5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷替换为(4-(n,n-二甲基氨磺酰基)苯基)硼酸。
[0081]1h nmr(400mhz,dmso-d6,ppm)δ9.54(s,1h),8.35(d,j＝8.5hz,2h),7.96(d,j＝8.5hz,2h),7.72-7.63(m,2h),7.56(d,j＝2.2hz,1h),7.38
–
7.28(m,2h),7.02(d,j＝8.2hz,1h),3.13-2.93(m,5h),2.86
–
2.74(m,2h),2.72(s,6h),2.68-2.55(m,2h),2.12(br,2h),1.82(s,4h),1.45(br,2h).ms(esi+):531.3(m+h).
[0082]
实施例7(s)-5-(4-苯氧基苯基)-n-(7-(吡咯烷-1-基)-6,7,8,9-四氢-5h-苯并[7]轮烯-2-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-胺
[0083][0084]
参考实施例1步骤b)～d)，将实施例1中步骤b)的2-(4-氯-2-异丙氧基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷替换为(4-苯氧基苯基)硼酸。
[0085]1h nmr(400mhz,dmso-d6,ppm)δ9.48(s,1h),8.13(d,j＝8.8hz,2h),7.64(dd,j＝8.7,7.4hz,1h),7.58-7.52(m,2h),7.51
–
7.44(m,2h),7.35(dd,j＝8.1,2.1hz,1h),7.24(t,j＝7.4hz,1h),7.20-7.13(m,5h),7.01(d,j＝8.2hz,1h),2.93(br,5h),2.90-2.72(m,2h),2.67
–
2.57(m,2h),2.07(br,2h),1.80(s,4h),1.45(br,2h).ms(esi+):516.3(m+h).
[0086]
实施例8(s)-5-(2-苯氧基苯基)-n-(7-(吡咯烷-1-基)-6,7,8,9-四氢-5h-苯并[7]轮烯-2-基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-2-胺
[0087][0088]
参考实施例1步骤b)～d)，将实施例1中步骤b)的2-(4-氯-2-异丙氧基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷替换为(2-苯氧基苯基)硼酸。
[0089]1h nmr(400mhz,dmso-d6,ppm)δ9.44(s,1h),7.68(dd,j＝7.6,1.6hz,1h),7.59
–
7.51(m,3h),7.43(s,1h),7.38(d,j＝8.0hz,1h),7.32(t,j＝7.5hz,1h),7.28
–
7.22(m,2h),7.08
–
7.03(m,2h),7.02
–
6.94(m,4h),2.86(br,7h),2.58(br,2h),2.05(br,2h),1.78(s,4h),1.45(br,2h).ms(esi+):516.3(m+h).
[0090]
实施例9(s)-n-(7-(吡咯烷-1-基)-6,7,8,9-四氢-5h-苯并[7]轮烯-2-基)-5-(3-(邻甲苯基氧基)苯基)-[1,2,4]三唑[1,5-a]吡啶-2-胺
[0091][0092]
参考实施例1，将实施例1中步骤a)的1-溴-4-氯-2-异丙氧基苯替换为1-(3-溴苯氧基)-2-甲苯。
[0093]1h nmr(400mhz,dmso-d6,ppm)(s,1h),7.81(s,1h),7.76(d,j＝7.8hz,1h),7.66
–
7.60(m,1h),7.59
–
7.54(m,2h),7.51(s,1h),7.35(t,j＝6.3hz,2h),7.21(d,j＝7.2hz,2h),7.12(t,j＝7.2hz,1h),7.03
–
6.95(m,3h),2.80(s,7h),2.65-2.55(m,2h),2.51(s,3h),2.05
–
1.97(m,2h),1.75(br,4h),1.46(br,2h).ms(esi+):530.3(m+h).
[0094]
实施例10(s)-n-(7-(吡咯烷-1-基)-6,7,8,9-四氢-5h-苯并[7]轮烯-2-基)-5-(6-((四氢-2h-吡喃-4-基)氧基)吡啶-3-基)-[1,2,4]三唑[1,5-a]吡啶-2-胺
[0095][0096]
参考实施例1步骤b)～d)，将实施例1中步骤b)的2-(4-氯-2-异丙氧基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷替换为2-((四氢-2h-吡喃-4-基)氧基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)吡啶。
[0097]1h nmr(400mhz,dmso-d6,ppm)δ9.54(s,1h),8.85(d,j＝2.4hz,1h),8.46(dd,j＝8.7,2.5hz,1h),7.65(dd,j＝8.8,7.3hz,1h),7.61
–
7.50(m,2h),7.40(dd,j＝8.2,2.3hz,1h),7.24(dd,j＝7.2,1.3hz,1h),7.04(t,j＝8.2hz,2h),5.31(tt,j＝8.8,4.1hz,1h),3.91(dt,j＝11.6,4.3hz,2h),3.54(ddd,j＝12.0,9.7,2.7hz,2h),3.22(s,5h),2.87
–
2.60(m,4h),2.26(s,2h),2.14
–
2.01(m,2h),1.89(s,4h),1.71(dtd,j＝13.3,9.4,4.2hz,2h),1.41(s,2h).ms(esi+):525.3(m+h).
[0098]
实施例11(s)-5-(6-异丙氧基吡啶-3-基)-n-(7-(吡咯烷-1-基)-6,7,8,9-四氢-5h-苯并[7]轮烯-2-基)-[1,2,4]三唑[1,5-a]吡啶-2-胺
kinease detection buffer(cisbio)从16.67μm稀释到250nm(4
×
)，终浓度为62.5nm；tk antibody-cryptate(cisbio)用htrf kinease detection buffer(cisbio)从100
×
稀释到5
×
，终浓度为1
×
；xl665同antibody等体积混合，使用biotek自动分液仪10μl加入每孔，2500rpm离心30s，25℃反应1小时。反应结束后，用多功能读板仪htrf进行检测。
[0112]
2.数据分析
[0113]
使用graphpad prism 5软件log(inhibitor)vs.response-variable slope拟合量效曲线，得到化合物对axl激酶抑制的ic
50
值。
[0114]
抑制率计算公式如下：
[0115][0116]
conversion％_sample：是样品的转化率读数；
[0117]
conversion％_min：代表没有酶活孔的转化率读数；
[0118]
conversion％_max：代表没有化合物抑制孔的转化率读数。
[0119]
3.实验结果
[0120]
实验结果如表1所示，其中化合物的axl的ic
50
有a、b、c三个等级，其中a表示《10nm；b表示10～50nm；c表示》50nm。
[0121]
表1.axl ic
50
数据
[0122][0123]
二、化合物对细胞增殖抑制检测
[0124]
1.实验流程
[0125]
mv-4-11(人髓性单核细胞白血病细胞株，培养基：imdm+10％胎牛血清)购自南京科佰生物科技有限公司，置于37℃,5％co2的培养箱中培养。取对数生长期的细胞分别以8000个/孔、6000个/孔、2000个/孔、2000个/孔和3000个/孔的细胞密度铺在96孔板中，并同时设置空白对照组。
[0126]
将待测化合物以及阳性药溶解在二甲基亚砜中以制备10mm的储液，并置于-80℃冰箱中长期保存。细胞铺板24h后，用二甲基亚砜稀释10mm的化合物储液得到200倍浓度的工作液(最高浓度200或2000μm，3倍梯度，共10个浓度)，每个浓度各取3μl加入到197μl的完全培养基中，稀释得到3倍浓度的工作液，然后取50μl加入到100μl的细胞培养液中(二甲基
亚砜终浓度为0.5％,v/v)，每个浓度设置两个复孔。加药处理72h后，每孔加入50μl的(购自promega)，按照说明书的操作流程在envision(perkinelmer)上测定荧光信号，使用graphpad prism 5软件log(inhibitor)vs.response-variable slope拟合量效曲线，得到化合物对细胞增殖抑制的ic
50
值。抑制率计算公式：
[0127][0128]
其中：
[0129]
受试物信号值：细胞+培养基+化合物组荧光信号均值；
[0130]
空白组信号值：培养基组(含0.5％dmso)荧光信号均值；
[0131]
阴性对照组信号值：细胞+培养基组(含0.5％dmso)荧光信号均值。
[0132]
2.实验结果
[0133]
实验结果如表2所示，其中化合物对细胞增殖抑制的ic
50
值分为a、b、c三个等级，其中a表示《100nm；b表示100～200nm；c表示》200nm。
[0134]
表2化合物对mv4-11细胞的抗增殖活性
[0135]
实施例标题化合物ic
50
(mv4-11,nm)实施例3a实施例5a阳性药(bgb-324)208.1