一种鼠去氧胆酸的制备方法与流程

1.本发明属于有机化学合成领域，具体是指一种鼠去氧胆酸的制备方法。


背景技术：

2.胆汁酸是胆汁的重要成分，胆汁酸主要存在于肠肝循环系统并通过再循环起一定的保护作用；胆汁酸是与无数生物学功能相关的重要内源性分子，包括胆固醇的吸收和排泄，在代谢中起到了促进脂类乳化、增强胰腺脂解的作用，直接参与了脂质和葡萄糖代谢，与肥胖和免疫应道存在着极其密切的关系；而在临床和疾病诊断方面，胆汁酸在研究肝胆胃肠疾病上起到了重要的作用。
3.鼠去氧胆酸是啮齿动物代谢过程中的一种重要次级胆汁酸，对于研究啮齿动物的胆汁酸代谢过程有一定的意义。
4.目前鼠去氧胆酸制备方法的报导尚未出现，故有必要研究一种简单、方便，适合大量生产的鼠去氧胆酸制备方法，为后续研究提供数据支持和标样。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于：提供一种鼠去氧胆酸的制备方法，该制备方法以猪去氧胆酸为原料，原料易得，且反应简单，副反应少，转化率高，适合大量生产。
6.为了实现上述目的，本发明采取以下技术方案：
7.一种鼠去氧胆酸(3α，6β
‑
二羟基
‑
5β
‑
胆烷酸)的制备方法，以猪去氧胆酸(3α，6α
‑
二羟基
‑
5β
‑
胆烷酸)为原料合成鼠去氧胆酸，反应过程包括，3、7位羟基氧化，3位羰基还原，7位羰基还原，提纯；具体步骤如下：
[0008][0009]
本发明中，所述步骤a包括：将化合物a(3α，6α
‑
二羟基
‑
5β
‑
胆烷酸)，即猪去氧胆酸，悬浮于丙酮中，降温至0℃以下，缓慢加入氧化剂，反应完成后，加入还原剂终止反应，蒸馏除去丙酮，加水结晶，过滤洗涤，得到化合物b(3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸)。
[0010]
所述丙酮与所述化合物a的体积质量比为5.0
‑
10.0ml:1g；
[0011]
所述氧化剂为次氯酸、琼斯试剂或高锰酸钾溶液中的任一种；
[0012]
所述次氯酸与所述化合物a的体积质量比为4.0
‑
5.0ml:1g；
[0013]
所述琼斯试剂与所述化合物a的体积质量比为1.2
‑
1.5ml:1g；
[0014]
所述高锰酸钾溶液与所述化合物a的体积质量比为4.0
‑
5.0ml:1g；
[0015]
所述还原剂为亚硫酸氢钠；
[0016]
所述亚硫酸氢钠与所述化合物a的质量比为0.02
‑
0.04:1。
[0017]
本发明中，所述步骤b包括：将化合物b溶解于氢氧化钠溶液中，磷酸二氢钠调节溶液ph至7.0
‑
7.5，加入葡萄糖、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad+)、葡萄糖脱氢酶(gdh)、3
‑
α类固醇脱氢酶(3
‑
αhsdh)，维持溶液ph为7.0
‑
7.5反应4h，反应完成后，升温至70
‑
75℃，搅拌2h，降温至常温，加酸调节溶液ph至3
‑
4结晶，过滤，洗涤至洗水ph试纸检测中性。滤饼加入甲醇溶解，过滤除去甲醇不溶物，得到化合物c(3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸甲醇)。
[0018]
所述氢氧化钠溶液和所述化合物a的体积质量比为10
‑
11ml:1g；
[0019]
所述葡萄糖和所述化合物a的质量比0.5
‑
0.6:1；
[0020]
所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和所述化合物a的质量比为0.001
‑
0.002:1；
[0021]
所述葡萄糖脱氢酶和所述化合物a的质量比0.01
‑
0.02:1；
[0022]
所述3
‑
α类固醇脱氢酶和所述化合物a质量比为0.01
‑
0.02:1。
[0023]
所述氢氧化钠溶液的含量为1％；所述酸为浓度5mol/l的盐酸。
[0024]
本发明中，所述步骤c包括：在化合物c的溶液中，加入硼氢化钠还原反应1h，在7位羰基还原反应中加入与化合物c的溶液等体积的水，搅拌均匀后加酸调节溶液ph至3
‑
4结晶，过滤洗涤，干燥，得到3α，6β
‑
二羟基
‑
5β
‑
胆烷酸。
[0025]
所述硼氢化钠和所述化合物a的质量比为0.10
‑
0.15:1；
[0026]
所述步骤c中的酸为浓度为5mol/l的盐酸；
[0027]
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0028]
(1)本发明以猪去氧胆酸(3α，6α
‑
二羟基
‑
5β
‑
胆烷酸)为原料合成鼠去氧胆酸(3α，6β
‑
二羟基
‑
5β
‑
胆烷酸)的方法，原料来源广泛，价格低廉；
[0029]
(2)本发明的合成路线，反应简单，副反应少，转化率高，适合大量生产；
[0030]
(3)本发明得到的鼠去氧胆酸纯度高，杂质少，可为后续研究提供数据及标样。
具体实施方式
[0031]
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
[0032]
实施例1
[0033]
本实施例的鼠去氧胆酸的制备方法，包括如下步骤：
[0034]
a.制备3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸
[0035]
在500ml反应瓶中加入10g猪去氧胆酸,50ml丙酮，降温至0℃以下，缓慢加入46ml含量为10％的次氯酸，加完后继续反应30min，取样hplc检测猪去氧胆酸残留为0.237％，加入0.3g亚硫酸氢钠终止反应；蒸馏除去丙酮，加200ml水搅拌30min结晶完全，过滤，2*250ml水洗涤滤饼，至洗水用ph试纸检测为中性，得到3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸湿品约12.5g，hplc检测纯度为98.352％。
[0036]
b.制备3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸
[0037]
将上步的3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸溶解于100ml浓度为1％的氢氧化钠溶液中，并调节溶液ph至7.0
‑
7.5，加入5g葡萄糖、10mg烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad+)、100mg葡萄糖脱氢
酶(gdh)、100mg3
‑
α类固醇脱氢酶(3
‑
αhsdh)，维持溶液ph为7.0
‑
7.5反应4h，取样hplc检测3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸残留为0.221％。升温至70
‑
75℃搅拌2h，降温至常温，加浓度为5mol/l的盐酸调节溶液ph＝3.84结晶，过滤，3*500ml水洗涤至洗水ph试纸检测中性。滤饼用40ml甲醇溶解，过滤除去甲醇不溶物，得到3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸甲醇溶液。
[0038]
c.制备3α，6β
‑
二羟基
‑
5β
‑
胆烷酸
[0039]
在上步的3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸甲醇溶液中，加入1.1g硼氢化钠还原反应1h，取样hplc检测3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸残留为0.426％，加入40ml水，搅拌均匀，加入浓度为5mol/l的盐酸调节溶液ph＝3.62，大量晶体析出。过滤，2*250ml水洗涤滤饼，至洗水ph试纸检测中性，干燥，得到3α，6β
‑
二羟基
‑
5β
‑
胆烷酸7.9g,hplc检测纯度为99.204％。
[0040]
实施例2
[0041]
a.制备3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸
[0042]
在500ml反应瓶中加入10g猪去氧胆酸,80ml丙酮，降温至0℃以下，缓慢加入13.4ml琼斯试剂(三氧化铬和硫酸混合溶液)，加完后继续反应30min，取样hplc检测猪去氧胆酸残留为0.127％，加入0.3g亚硫酸氢钠终止反应。蒸馏除去丙酮，加200ml水搅拌30min结晶完全，过滤，2*250ml水洗涤滤饼，至洗水用ph试纸检测为中性，得到3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸湿品约12.7g，hplc检测纯度为98.257％。
[0043]
b.制备3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸
[0044]
将上步的3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸溶解于105ml浓度为1％的氢氧化钠溶液中，并调节溶液ph至7.0
‑
7.5，加入5.5g葡萄糖、15mg烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad+)、150mg葡萄糖脱氢酶(gdh)、150mg3
‑
α类固醇脱氢酶(3
‑
αhsdh)，维持溶液ph为7.0
‑
7.5反应4h，取样hplc检测3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸残留为0.104％。升温至70
‑
75℃搅拌2h，降温至常温，加入浓度为5mol/l的盐酸调节溶液ph＝3.56结晶，过滤，3*500ml水洗涤至洗水ph试纸检测中性。滤饼用50ml甲醇溶解，过滤除去甲醇不溶物，得到3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸甲醇溶液。
[0045]
c.制备3α，6β
‑
二羟基
‑
5β
‑
胆烷酸
[0046]
在上步的3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸甲醇溶液中，加入1.3g硼氢化钠还原反应1h，取样hplc检测3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸残留为0.133％，加入50ml水，搅拌均匀加入浓度为5mol/l的盐酸调节溶液ph＝3.34，大量晶体析出。过滤，2*250ml水洗涤滤饼，至洗水ph试纸检测中性，干燥，得到3α，6β
‑
二羟基
‑
5β
‑
胆烷酸7.6g,hplc检测纯度为99.325％。
[0047]
实施例3
[0048]
a.制备3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸
[0049]
在500ml反应瓶中加入10g猪去氧胆酸,100ml丙酮，降温至0℃以下，缓慢加入高锰酸钾饱和溶液40ml，加完后继续反应30min，取样hplc检测猪去氧胆酸残留为0.226％，加入0.3g亚硫酸氢钠终止反应。蒸馏除去丙酮，加200ml水搅拌30mon结晶完全，过滤，2*250ml水洗涤滤饼，至洗水用ph试纸检测为中性，得到3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸湿品约13.2g，hplc检测纯度为98.066％。
[0050]
b.制备3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸
[0051]
将上步的3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸溶解于110ml浓度为1％的氢氧化钠溶液中，并调节溶液ph至7.0
‑
7.5，加入6g葡萄糖、20mg烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad+)、200mg葡萄糖脱氢酶(gdh)、200mg3
‑
α类固醇脱氢酶(3
‑
αhsdh)，维持溶液ph为7.0
‑
7.5反应4h，取样hplc检测
3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸残留为0.037％。升温至70
‑
75℃搅拌2小时，降温至常温，加入浓度为5mol/l的盐酸调节溶液ph＝3.41结晶，过滤，3*500ml水洗涤至洗水ph试纸检测中性。滤饼用60ml甲醇溶解，过滤除去甲醇不溶物，得到3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸甲醇溶液。
[0052]
c.制备3α，6β
‑
二羟基
‑
5β
‑
胆烷酸
[0053]
在上步的3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸甲醇溶液中，加入1.5g硼氢化钠还原反应1h，取样hplc检测3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸残留为0.064％，加入50ml水，搅拌均匀加入浓度为5mol/l的盐酸调节溶液ph＝3.78，大量晶体析出。过滤，2*250ml水洗涤滤饼，至洗水ph试纸检测中性，干燥，得到3α，6β
‑
二羟基
‑
5β
‑
胆烷酸7.8g,hplc检测纯度为99.417％。
[0054]
实施例4
[0055]
a.制备3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸
[0056]
在500ml反应瓶中加入10g猪去氧胆酸,60ml丙酮，降温至0℃以下，缓慢加入40ml含量为10％的次氯酸，加完后继续反应30min，取样hplc检测猪去氧胆酸残留为0.252％，加入0.4g亚硫酸氢钠终止反应；蒸馏除去丙酮，加200ml水搅拌30min结晶完全，过滤，2*250ml水洗涤滤饼，至洗水用ph试纸检测为中性，得到3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸湿品约12.8g，hplc检测纯度为98.130％。
[0057]
b.制备3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸
[0058]
将上步的3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸溶解于105ml浓度为1％的氢氧化钠溶液中，并调节溶液ph至7.0
‑
7.5，加入5.5g葡萄糖、15mg烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad+)、150mg葡萄糖脱氢酶(gdh)、150mg3
‑
α类固醇脱氢酶(3
‑
αhsdh)，维持溶液ph为7.0
‑
7.5反应4h，取样hplc检测3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸残留为0.208％。升温至70
‑
75℃搅拌2h，降温至常温，加浓度为5mol/l的盐酸调节溶液ph＝3.76结晶，过滤，3*500ml水洗涤至洗水ph试纸检测中性。滤饼用50ml甲醇溶解，过滤除去甲醇不溶物，得到3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸甲醇溶液。
[0059]
c.制备3α，6β
‑
二羟基
‑
5β
‑
胆烷酸
[0060]
在上步的3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸甲醇溶液中，加入1.5g硼氢化钠还原反应1h，取样hplc检测3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸残留为0.418％，加入40ml水，搅拌均匀，加入浓度为5mol/l的盐酸调节溶液ph＝3.67，大量晶体析出。过滤，2*250ml水洗涤滤饼，至洗水ph试纸检测中性，干燥，得到3α，6β
‑
二羟基
‑
5β
‑
胆烷酸8.15g,hplc检测纯度为98.974％。
[0061]
实施例5
[0062]
a.制备3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸
[0063]
在500ml反应瓶中加入10g猪去氧胆酸,100ml丙酮，降温至0℃以下，缓慢加入15.0ml琼斯试剂(三氧化铬和硫酸混合溶液)，加完后继续反应30min，取样hplc检测猪去氧胆酸残留为0.116％，加入0.4g亚硫酸氢钠终止反应。蒸馏除去丙酮，加200ml水搅拌30min结晶完全，过滤，2*250ml水洗涤滤饼，至洗水用ph试纸检测为中性，得到3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸湿品约12.8g，hplc检测纯度为98.148％。
[0064]
b.制备3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸
[0065]
将上步的3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸溶解于110ml浓度为1％的氢氧化钠溶液中，并调节溶液ph至7.0
‑
7.5，加入5g葡萄糖、15mg烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad+)、200mg葡萄糖脱氢酶(gdh)、100mg3
‑
α类固醇脱氢酶(3
‑
αhsdh)，维持溶液ph为7.0
‑
7.5反应4h，取样hplc检测3，6
‑
二羰基
‑
5β
‑
胆烷酸残留为0.098％。升温至70
‑
75℃搅拌2h，降温至常温，加入浓度为
5mol/l的盐酸调节溶液ph＝3.65结晶，过滤，3*500ml水洗涤至洗水ph试纸检测中性。滤饼用50ml甲醇溶解，过滤除去甲醇不溶物，得到3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸甲醇溶液。
[0066]
c.制备3α，6β
‑
二羟基
‑
5β
‑
胆烷酸
[0067]
在上步的3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸甲醇溶液中，加入1.2g硼氢化钠还原反应1h，取样hplc检测3α
‑
羟基，6
‑
羰基
‑
5β
‑
胆烷酸残留为0.129％，加入50ml水，搅拌均匀加入浓度为5mol/l的盐酸调节溶液ph＝3.41，大量晶体析出。过滤，2*250ml水洗涤滤饼，至洗水ph试纸检测中性，干燥，得到3α，6β
‑
二羟基
‑
5β
‑
胆烷酸7.9g,hplc检测纯度为99.256％。