技术特征：
1.一种gssr分子标记，其特征是，包括以下步骤：(1)轮叶党参全基因组序列提取；(2)ssr位点分析利用misa软件分析轮叶党参全基因组8条染色体上的ssr位点，软件设置标准为：base pair，bp 1、2、3、4、5、6bp，重复次数依次不少于10、6、5、5、5、5、5次，复合ssr小于100bp；(3)gssr引物设计利用primer 5.0分别进行8条染色体上gssr标记设计，并结合手动设计引物，引物的设计标准为：gc含量在30％～70％，产物的大小为100～250bp，tm值在55℃～65℃之间，上下游引物tm值差异为3～5℃，引物长度为18～25bp，引物gc含量30％～70％；(4)步骤(3)gssr引物分子标记得到6对引物序列如下：2.使用gssr分子标记对党参进行真伪鉴定的方法，其特征是：包括以下步骤：(1)材料的收集和dna提取收集党参、银柴胡和家种防风三种材料，使用ctab提取法提取基因组dna，并用1％琼脂糖凝胶电泳检测dna质量；并且ctab提取法中的提取缓液为85度水浴预热；(2)gssr
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pcr反应gssr
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pcr反应总体系为10μl，包括1
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taq dna聚合酶buffer、25mm mgcl2、1.0u taq酶、15mm dntps、gssr标记上下游引物各0.15μm、dna100 ng，双蒸水补齐到10μl；反应程序为94℃预变性5min，94℃变性1min、55℃复性45s、72℃延伸1.5min，34个循环，最后72℃延伸10min；(3)党参gssr
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pcr反应电泳检测取pcr产物3μl与等量6
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上样液混匀，非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，180v恒压1h，银酸银染色；(4)分析从设计的引物中选取6对引物进行筛选，根据材料间扩增出特异条带的有无对党参及其伪品进行鉴定。3.根据权利要求1所述gssr分子标记在党参真伪鉴定中的应用。
技术总结
本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种gSSR分子标记及其党参真伪鉴定的方法。本发明基于分析轮叶党参全基因组序列设计开发gSSR标记，并公开了6对特异性标记6对党参及其伪品进行快速、准确鉴定的方法。随着党参价格不断上涨，生产中银柴胡和防风常作为党参的伪品使用，而常规真伪鉴定存在对鉴定人员技术要求高、鉴定费时且准确性不高的缺点。使用本发明研发的gSSR分子标记可对党参正品和伪品进行快速、准确的区分。本发明的分子标记与真伪鉴定具有数量多、鉴定准确的优点。鉴定准确的优点。
技术研发人员：詹海仙 张丹 刘晓丽 张月荣
受保护的技术使用者：山西中医药大学
技术研发日：2021.07.27
技术公布日：2021/10/23