技术特征：
1.一种融合基因，其特征在于，所述融合基因的核苷酸序列选自以下序列中的任意一种：(1)、第一序列，其核苷酸序列如seq id no：1所示；(2)、第二序列，其核苷酸序列与如seq id no：1所示的第一序列至少具有95％的相似度。2.根据权利要求1所述的融合基因，其特征在于，所述第二序列相对于所述第一序列而言存在一个或多个核苷酸的替换、删除或插入。3.一种质粒载体，其特征在于，所述质粒载体包括：puc质粒；以及插入该puc质粒中的如权利要求1或2所述的融合基因；所述puc质粒选自puc17质粒、puc18质粒和puc19质粒中的任意一种。4.一种转移载体，其特征在于，所述转移载体包括：杆状病毒转移质粒；以及插入该杆状病毒转移质粒中的如权利要求1或2所述的融合基因；所述杆状病毒转移质粒选自pfastbac 1、pvl1393、pfastbac dual中的任意一种。5.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒包括：杆状病毒载体bacmid；以及插入该杆状病毒载体bacmid中的如权利要求1或2所述的融合基因。6.一种受转染细胞，其特征在于，所述受转染细胞由如权利要求5所述的重组质粒在转染体系的作用下转染宿主细胞而形成；所述宿主细胞选自sf9细胞、high five细胞或sf21细胞中的任意一种。7.一种融合蛋白，其特征在于，由如权利要求6所述的受转染细胞表达融合基因而形成；所述融合基因的核苷酸序列选自以下序列中的任意一种：(1)、第一序列，其核苷酸序列如seq id no：1所示；(2)、第二序列，其核苷酸序列与如seq id no：1所示的第一序列至少具有95％的相似度。8.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列选自以下序列中的任意一种：(1)、第三序列，其氨基酸序列如seq id no：2所示；(2)、第四序列，其氨基酸序列与如seq id no：2所示的第三序列至少具有95％的相似度。9.一种如权利要求8或9所述的融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：制备融合基因；所述融合基因的核苷酸序列选自第一序列或第二序列，所述第一序列的核苷酸序列如seq id no：1所示，所述第二序列的核苷酸序列与如seq id no：1所示的第一序列至少具有95％的相似度；将所述融合基因克隆入杆状病毒转移质粒中，得到转移载体；采用所述转移载体转化dh10bac菌株，筛选出重组菌株，抽提出含有所述融合基因的重组质粒，并转染宿主细胞，获得受转染细胞；收集所述受转染细胞的细胞培养物，提纯后得到融合蛋白。10.如权利要求8或9所述的融合蛋白在制备牛支原体的抗体中的应用。11.一种亚单位疫苗，其特征在于，含有如权利要求8或9所述的融合蛋白和佐剂；所述融合蛋白在所述亚单位疫苗中的浓度为100
±
10μg/ml；
所述佐剂选自montanide isa 206vg、montanide isa 201vg、montanide isa 51vg、液体石蜡、角鲨烷、皂苷、植物油、细胞因子中的任意一种或者两种以上的组合。
技术总结
本申请公开了一种融合基因、融合蛋白及制备方法和牛支原体亚单位疫苗。融合蛋白由第一序列或第二序列表达而成。第一序列的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，第二序列的核苷酸序列与如SEQ ID NO：1所示的第一序列至少具有95％的相似度。疫苗包括融合蛋白和佐剂。本申请的融合蛋白的抗原性、免疫原性、表达水平比天然蛋白质更高，免疫原性更强，对动物安全性高，也能够使用生物反应器大规模无血清悬浮培养制备，故能够实现大规模批量生产，批次间稳定，质控容易，也能大大降低疫苗的生产成本。也能大大降低疫苗的生产成本。也能大大降低疫苗的生产成本。
技术研发人员：方鹏飞 孔迪 曹文龙 滕小锘 张大鹤
受保护的技术使用者：苏州世诺生物技术有限公司
技术研发日：2021.09.10
技术公布日：2021/11/5