技术特征：
1.一种机体保护多肽粗品的纯化方法，包括以下步骤：将机体保护多肽粗品溶解，得到机体保护多肽粗品溶液；对所述机体保护多肽粗品溶液进行高效液相色谱分离纯化，得到机体保护多肽纯品；所述高效液相色谱分离纯化包括依次进行第一高效液相色谱纯化和第二高效液相色谱纯化；所述第一高效液相色谱纯化的参数包括：第一色谱柱：c
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柱；第一流动a相：磷酸二氢钠水溶液，所述磷酸二氢钠水溶液的浓度为3～30g/l；第一流动b相：乙腈；第一流速：1～1000ml/min；第一梯度洗脱程序为：0～60min：n1vol％
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m1vol％第一流动b相；n1为5～10，m1为30～60；第一检测波长：210～260nm；所述第二高效液相色谱纯化的参数包括：第二流动a相：乙酸水溶液，所述乙酸水溶液中乙酸和水的体积比为(0.1～5)：100；第二流动b相：乙腈；第二流速：1～1000ml/min；第二梯度洗脱程序为：0～60min：n2vol％
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m2vol％第二流动b相；n2为5～10，m2为30～60；第二检测波长：210～260nm。2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述机体保护多肽粗品溶解的溶剂为乙酸水溶液；所述乙酸水溶液中乙酸的体积百分含量为5％～15％。3.根据权利要求1或2所述的纯化方法，其特征在于，所述机体保护多肽粗品溶液中机体保护肽的浓度为10～100mg/ml。4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述第一高效液相色谱纯化得到第一纯化机体保护多肽；将所述第一纯化机体保护多肽进行第二高效液相色谱纯化。5.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述第一检测波长和第二检测波长独立地为220～250nm。6.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述第一色谱柱和第二色谱柱的有效长度独立地≥150mm；直径独立地为10～200mm；所述第一色谱柱和第二色谱柱的填充物的粒径独立地为10～30μm。7.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述第一高效液相色谱纯化的参数包括：梯度洗脱程序为：0～60min：5vol％
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55vol％第一流动b相；所述第二高效液相色谱纯化的参数包括：梯度洗脱程序为：0～60min：10vol％
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60vol％第二流动b相。8.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述第一高效液相色谱纯化的参数包括：梯度洗脱程序为：0～60min：10vol％
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30vol％第一流动b相；所述第二高效液相色谱纯化的参数包括：梯度洗脱程序为：0～60min：10vol％
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50vol％第二流动b相。9.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述第一高效液相色谱纯化的参数包括：梯度洗脱程序为：0～60min：5vol％
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55vol％第一流动b相；所述第二高效液相色谱纯
化的参数包括：梯度洗脱程序为：0～60min：10vol％
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40vol％第二流动b相。10.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述第二高效液相色谱纯化后，还包括将所得第二高效液相色谱纯化馏分进行冷冻干燥，得到所述机体保护多肽纯品。
技术总结
本发明属于生物分子分离纯化技术领域，本发明提供了一种机体保护多肽粗品的纯化方法。本发明的第一高效液相色谱纯化能够除去粗品中含有的残留溶剂(包括三氟乙酸、乙二硫醇、甲基叔丁基醚)、残留保护基和大部分杂质；所述第二高效液相色谱纯化能够除去第一高效液相色谱纯化未除去的杂质以及磷酸根离子以及钠离子。本发明提供的纯化方法得到的是机体保护多肽的乙酸盐，利于人体吸收；且所得机体保护多肽纯度高、收率高。实施例的数据表明：机体保护多肽纯品的纯度为99.58％以上，单杂的含量＜0.1％。0.1％。
技术研发人员：罗瑞昌 李雪豪 俞智杰
受保护的技术使用者：杭州信海医药科技有限公司
技术研发日：2021.09.16
技术公布日：2021/11/23