技术特征：
1.一种液相捕获文库构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)获取进行了5’端接头连接的双链dna片段，双链dna片段的长度为100
‑
300bp；(2)加入探针到步骤(1)的体系中捕获目标区域；(3)捕获到的目标区域dna单链或者cdna，经过5’端磷酸化和3’端羟基化处理，进行3’端辅助连接，延伸成dna双链；(4)对于步骤(3)获得的延伸产物采用通用引物直接进行扩增，得到目标区域文库。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，对于多个样本在同一个探针体系中进行杂交反应，在5’端加上含标签的接头，包括用来区分不同样本的标签，或者用来区分不同分子的标签，或者两者都含有。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，对于长链双链dna分子使用tn5转座酶进行片段化并且在5’端添加接头，或者含标签的接头。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，5’端接头的长度范围19
‑
100bp，优选19
‑
90bp，进一步优选19
‑
80bp。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，使用tn5转座酶进行片段化时，5’端接头必须至少要含有tn5转座酶的识别核心序列，其余序列只能加在该识别核心序列的5’端。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中3’端辅助连接，延伸成dna双链的过程具体如下：体系中使用一种人工合成的核苷酸片段辅助子，以及dntp，且dntp是普通的dntp和热启动dntp的混合物，普通dntp选用四种dntp中的任一种、两种或者三种，热启动的dntp为选用的普通dntp对应剩余的三种、两种或者一种；在较低温度条件下利用所述的普通dntp进行dna片段的加尾反应；然后给体系一个较高的温度，使热启动的dntp进入到激活工作的状态；再给一个相对较低的温度，使辅助子与dna片段3’端加尾序列互补结合，最后由dna聚合酶分别以辅助子和dna片段为模板向前延伸，直至以辅助子为模板延伸出辅助子的互补链，并且以dna片段为模板延伸出dna片段的互补链，辅助子3’端含有与dna片段加尾互补的序列，且3’末端需要进行封闭，以防止体系中的加尾酶对辅助子进行3’加尾，延伸时解除3’末端的封闭。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(3)中：辅助子长度15nt
‑
120nt，优选30nt
‑
60nt，辅助子3’端至少第1个碱基采用rna碱基进行封闭；所述的rna碱基为ra、rg、rc或ru。8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(3)中：dna片段3’端加尾序列长度范围1
‑
20个碱基，优选3
‑
10个碱基，辅助子3’端与dna片段加尾序列互补结合的碱基序列在辅助子3’端rna碱基之后直到第14个碱基中的任意部分。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，通过限制普通dntp的量和/或增加辅助子的量来控制dna片段3’端加尾碱基数目，随着普通dntp的浓度降低，则dna片段3’端加尾碱基数目会减少；随着辅助子的浓度增加，则dna片段3’端加尾碱基数目会减少。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，体系中辅助子浓度为10nm
‑
20um之间，优选50nm
‑
10um之间，进一步优选100nm
‑
5um。11.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，反应体系中捕获到的目标区域dna单链或者cdna浓度为1fmol
‑
1nmol/50ul。
12.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，体系中普通dntp的浓度为2um
‑
2mm，优选10um
‑
1mm之间，进一步优选30um
‑
0.5mm之间；体系中普通dntp浓度是每一种热启动dntp的1倍
‑
3倍。13.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(3)中：首先在20℃
‑
37℃条件下进行dna片段的加尾反应5
‑
30分钟；然后在90℃
‑
95℃反应1
‑
5分钟，使热启动的dntp进入到激活工作的状态,同时使辅助子3’端的rna碱基从辅助子上掉下来，激活辅助子的延伸功能；再在45℃
‑
72℃反应2
‑
30分钟，使辅助子与dna片段3’端加尾序列互补结合，之后由dna聚合酶分别以辅助子和dna片段为模板向前延伸，直至以辅助子为模板延伸出辅助子的互补链，并且以dna片段为模板延伸出dna片段的互补链。14.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，体系中对于dna片段加尾实现方式，包括：使用加尾酶，以体系中加入的普通datp、dttp、dgtp和dctp，4种dntp中的任一种、两种或三种为材料进行dna片段的3’端加尾；优选：体系中加尾酶的浓度为0.15u/ul
‑
15u/ul，优选0.4u/ul
‑
5u/ul，进一步优选0.6u/ul
‑
3u/ul。15.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，体系中用于聚合的聚合酶包括taq聚合酶中的至少一种，或者高保真聚合酶中的至少一种；taq聚合酶包括：2g robust dna聚合酶、rtaq dna聚合酶、taqb dna聚合酶中的一种或几种，高保真聚合酶包括：kapa hifi热启动高保真聚合酶、pfu dna聚合酶、phusion dna聚合酶中的一种或几种；优选taq dna聚合酶；优选：体系中聚合酶的浓度为0.01u/ul
‑
2u/ul；优选0.05u/ul
‑
1u/ul，进一步优选0.08u/ul
‑
0.5u/ul。
技术总结
本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种液相捕获文库构建方法。(1)获取进行了5’端接头连接的双链DNA片段，双链DNA片段的长度为100
技术研发人员：王永利 贺田芬 鞠巍 汤链 徐根明 胡桑
受保护的技术使用者：湖南大地同年生物科技有限公司
技术研发日：2021.10.11
技术公布日：2021/12/10