技术特征:
1.一种用于检测固执腐霉的lamp引物组合物,其特征在于,该引物组合物由以下引物组成:如seq id no.1所示的正向内引物fip,如seq id no.2所示的反向内引物bip,如seq id no.3所示的正向外引物f3,如seq id no.4所示的反向外引物b3,如seq id no.5所示的正向环引物lf,如seq id no.6所示的反向环引物lb。2.权利要求1所述的lamp引物组合物在检测固执腐霉中的应用,所述的检测为非疾病诊断为目的的检测。3.权利要求1所述的lamp引物组合物在制备用于检测固执腐霉试剂盒中的应用。4.一种用于检测固执腐霉的lamp试剂盒,其特征在于,该试剂盒中包含权利要求1所述的lamp引物组合物。5.根据权利要求4所述的用于检测固执腐霉的lamp试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒还包含thermopol buffer,mgs04,dntps,甜菜碱,bst dna polymerase,羟基萘酚蓝。6.权利要求4或5所述的lamp试剂盒在检测固执腐霉中的应用,所述的检测为非疾病诊断为目的的检测。7.一种固执腐霉的lamp检测方法,其特征在于提取待检微生物dna,取dna溶液作为反应模板,以权利要求1所述的引物组合物进行lamp反应,然后观察扩增产物的颜色变化,若呈天蓝色表示检测结果为阳性,存在固执腐霉,若呈紫色表示检测结果为阴性,不存在固执腐霉。8.根据权利要求7所述的lamp检测方法,其特征在于所述的lamp反应体系:2.5μl 10
×
thermopol buffer,8mmol
·
l-1
mgs04,1.2mmol
·
l-1
dntps,内引物fip和bip各1.6μmol
·
l-1
,外引物f3和b3各0.4μmol
·
l-1
,环引物lf和lb各0.8μmol
·
l-1
,0.8μmol
·
l-1
甜菜碱,8u
·
μl-1
bst dna polymerase,180mmol
·
l-1
羟基萘酚蓝,2μl模板dna,体系共计26μl。9.根据权利要求7或8所述的lamp检测方法,其特征在于所述lamp反应的程序为:63℃反应扩增60min。
技术总结
本发明公开了一种用于检测固执腐霉的LAMP引物组合物及其检测方法。用于检测固执腐霉的引物组合物是由正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向外引物F3、反向外引物B3、环引物LF和LB组成。LAMP反应程序为:63℃等温条件扩增60min,能快速、方便、高效、高特异、高灵敏地检测到待检样品中存在的固执腐霉,不需要复杂仪器,能较好满足对固执腐霉的现场检测。能较好满足对固执腐霉的现场检测。能较好满足对固执腐霉的现场检测。
技术研发人员:陈佳佳 于健 简祖平 张圆圆 熊伟 徐翔 王剑 芮婷
受保护的技术使用者:江苏农林职业技术学院
技术研发日:2021.10.26
技术公布日:2022/4/12