技术特征：
1.一种鉴别检测牛结节性皮肤病病毒lsdv、山羊痘病毒gtpv和绵羊痘病毒sppv的引物对和探针组，其特征在于，所述的引物对和探针组的序列信息如下：用于羊痘病毒属capv检测的正向引物，其序列为seq id no：1、用于羊痘病毒属capv检测的反向引物，其序列为seq id no：2；用于检测牛结节性皮肤病病毒lsdv的探针，其序列为seq id no：3；用于检测山羊痘病毒gtpv的探针，其序列为seq id no：4；用于检测绵羊痘病毒sppv的探针，其序列为seq id no：5。2.如权利要求1所述的引物对和探针组，其特征在于，所述的探针的5
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端和3
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端进行了荧光素标记。3.如权利要求1所述的引物对和探针组，其特征在于，所述的探针中，检测牛结节性皮肤病病毒lsdv的探针的5
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端进行羧基荧光素fam标记，检测山羊痘病毒gtpv的探针的5
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端进行六氯荧光素基团hex标记，检测绵羊痘病毒sppv的探针的5
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端进行羧基-x-罗丹明基团rox标记，且探针的3
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端均以淬灭基团mgb标记。4.权利要求1-3任一项所述的引物对和探针组在制备鉴别羊痘病毒属三种病毒的taqman mgb三重荧光pcr检测制品中的应用。5.一种用于检测鉴别羊痘病毒属三种病毒的taqman mgb检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中包含有权利要求1-3任一项所述的引物对和探针组。6.一种鉴别羊痘病毒属三种病毒的taqman mgb三重荧光pcr方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：1)荧光pcr反应体系配制：反应液每管为20μl，含有universal u+probe master mix v2荧光pcr反应液10μl，5μmol/l的capv forward、capv reverse、lsdv probe、gtpv probe和sppv probe各0.8μl，待检测样品的dna模板2μl，双蒸水4μl；2)荧光pcr反应体系扩增：检测反应条件设置为：37℃作用2min；95℃预变性5min；95℃变性10s，58℃退火30s，共40个循环；3)结果的判定：阈值设定原则以阈值线刚好超过阴性对照品扩增曲线的最高点，待检样品无ct值并且无扩增曲线，结果判为阴性；待检样品ct值≤40.0，且出现典型的扩增曲线，结果判为阳性，其中为fam信号时判为lsdv核酸阳性；为hex信号时判为gtpv核酸阳性；为rox信号时判为sppv核酸阳性。
技术总结
本发明提供一种牛结节性皮肤病病毒LSDV、山羊痘病毒GTPV和绵羊痘病毒SPPV的快速检测方法，以及应用于检测方法的Taqman-MGB探针三重荧光PCR引物对和探针组。其中用于羊痘病毒属CaPV检测的正向引物，其序列为SEQ ID NO：1、用于羊痘病毒属CaPV检测的反向引物，其序列为SEQ ID NO：2；用于检测牛结节性皮肤病病毒LSDV的探针，其序列为SEQ ID NO：3；用于检测山羊痘病毒GTPV的探针，其序列为SEQ ID NO：4；用于检测绵羊痘病毒SPPV的探针，其序列为SEQ ID NO：5。本发明的方法检测的灵敏度高、特异性好、快速高通量；且检测方法操作简便。且检测方法操作简便。且检测方法操作简便。
技术研发人员：南文龙 陆游 巩明霞 陈义平 吴晓东 李金明 李林 王喜乐 师丽刚 张永强 赵永刚 屈海龙 邹艳丽 赵晶晶 哈达 特木尔巴根 张雨初 王志亮
受保护的技术使用者：中国动物卫生与流行病学中心
技术研发日：2021.10.28
技术公布日：2022/1/18