技术特征：
1.一种表达非洲猪瘟病毒b602l-b646l蛋白的重组腺病毒载体，其特征在于，以pad-cmv-3
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flag腺病毒载体为基础，引入b602l-b646l基因以构建重组腺病毒载体pad-cmv-egfp-b602l-b646l；所述b602l-b646l基因具有如seq id no.1所示的核苷酸序列。2.一种权利要求1所述的表达非洲猪瘟病毒b602l-b646l蛋白的重组腺病毒载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)合成b602l-b646l基因，并在b602l-b646l基因的起始密码子前添加cacc四个碱基；(2)将步骤(1)得到的b602l-b646l基因和pentre-egfp-topo载体进行topo克隆，得到pentr-egfp-asfv-b602l-b646l；(3)将步骤(2)得到的pentr-egfp-asfv-b602l-b646l通过lr重组反应于腺病毒骨架载体pad-cmv-3
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flag进行重组，得到重组腺病毒载体pad-cmv-egfp-b602l-b646l。3.一种重组腺病毒包装方法，其特征在于，将权利要求1所述的重组腺病毒载体pad-cmv-egfp-b602l-b646l用pacⅰ进行单酶切，线性化后的质粒用于转染；转染293t细胞，实现重组腺病毒包装。4.根据权利要求3所述的重组腺病毒包装方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将重组腺病毒载体pad-cmv-egfp-b602l-b646l用限制性内切酶pacⅰ进行单酶切，线性化后的质粒用于转染ad293细胞；(2)转染后至细胞脱落、变圆且间隙变大时，收集细胞及上清，即为p1代重组腺病毒；(3)p1代重组腺病毒感染293t细胞，观察细胞状态。5.根据权利要求4所述的重组腺病毒包装方法，其特征在于，所述转染ad293细胞采用的转染试剂为ietprime kit转染试剂。6.根据权利要求4所述的重组腺病毒包装方法，其特征在于，在步骤(2)中，收集细胞及上清后，置于-80℃反复冻融3次，12000
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g离心10min，收集上清。7.权利要求3-6所述的重组腺病毒包装方法制备得到的重组腺病毒。8.包含权利要求7所述的重组腺病毒的疫苗。
技术总结
本发明公开了一种表达非洲猪瘟病毒B602L-B646L蛋白的重组腺病毒及构建方法，属于基因工程技术领域，本发明利用重组腺病毒穿梭载体pENTRE-EGFP-TOPO，经过一系列中间过程，得到重组腺病毒载体pAD-CMV-EGFP-B602L-B646L；将其线性化后转染AD293细胞，根据腺病毒感染形成的细胞病变筛选重组病毒，实现腺病毒包装过程，获得表达非洲猪瘟病毒B602L-B646L蛋白的重组腺病毒，为构建表达非洲猪瘟病毒B602L-B646L蛋白的重组腺病毒疫苗奠定了基础。基础。基础。
技术研发人员：朱鸿飞 贾红 鑫婷 郭晓宇 袁维峰 崔帅 王洋
受保护的技术使用者：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
技术研发日：2021.11.26
技术公布日：2022/2/28