技术特征：
1.一种肿瘤组织匀浆液代血清微组织块个体化药敏检测方法，其特征在于，包括以下步骤：a)制备人工基底膜三维组织体外低粘附培养皿和培养板；b)获取新鲜肿瘤组织样本，取一部分制备大小均一的肿瘤微组织块；c)将剩余部分组织块称重，转移至灭菌玻璃匀浆器中，制备组织匀浆液，得到含一定比例的组织匀浆液的培养基；d)将b)中大小均一的肿瘤微组织块加入c)中含一定比例的组织匀浆液的培养基中，形成组织匀浆液代血清微组织块个体化培养体系，于37℃，5％co2含量的细胞培养箱稳定孵育；e)将d)中稳定后的肿瘤微组织块进行台盼蓝活性检测；f)将有活性的肿瘤微组织块接种到低粘附培养板中，与化疗药物共孵育；g)采用葡萄糖代谢和mtt方法，对化疗方案进行药敏性检测。2.根据权利要求1所述的一种肿瘤组织匀浆液代血清微组织块个体化药敏检测方法，其特征在于，所述a)步骤中低粘附培养皿或培养板为聚甲基丙烯酸-2-羟乙酯，具体制备方法是，将phema按照15mg:1ml加入到85％乙醇中，待聚合物完全溶解，将聚合物的乙醇溶液加入培养皿或培养板中，细胞培养甁在37℃下干燥24h，制备人工基底膜三维组织体外低粘附培养皿或培养板备用。3.根据权利要求1所述的一种肿瘤组织匀浆液代血清微组织块个体化药敏检测方法，其特征在于，所述b)步骤中大小均一的肿瘤微组织块的制备，获取肿瘤组织样本，将患者新鲜肿瘤组织块放置无菌容器中，加pbs洗涤2次，去除血污、坏死、液化及微生物污染组织，置于hanks缓冲液中快速切块，得到1mm3的均匀组织块。4.根据权利要求1所述的一种肿瘤组织匀浆液代血清微组织块个体化药敏检测方法，其特征在于，所述c)步骤中组织匀浆液制备方法，将剩余部分组织块称重，转移至灭菌玻璃匀浆器中，按组织块：无血清培养基等于1g：5ml的比例加入无血清培养基，研磨匀浆；将研磨好的组织匀浆液转移至离心管中，15000rpm，5min离心；离心后取上清液转移至新离心管中，过0.22um滤器，收集滤液为组织匀浆液原液；将滤液和无血清培养基按不同比例稀释，得到组织匀浆液的体积浓度为10％～20％。5.根据权利要求1所述的一种肿瘤组织匀浆液代血清微组织块个体化药敏检测方法，其特征在于，所述d)步骤中的稳定孵育体系为，在96孔板中，每孔加入3个瘤块，200ul上述含一定比例的组织匀浆液的培养基，形成组织匀浆液代血清微组织块个体化培养体系，于37℃，5％co2含量的细胞培养箱稳定孵育。6.根据权利要求1所述的一种肿瘤组织匀浆液代血清微组织块个体化药敏检测方法，其特征在于，所述e)进行的微组织块活性检测方法为台盼蓝活性检测，0.4％的台盼蓝染液检测肿瘤组织活性，剔除没有活性的组织，然后用含有3％双抗的pbs冲洗组织。7.根据权利要求1所述的一种肿瘤组织匀浆液代血清微组织块个体化药敏检测方法，其特征在于，所述f)步骤与化疗药物共孵育时，设置空白对照孔，以及加药处理孔，37℃，5％co2含量的细胞培养箱孵育时间为72h。8.根据权利要求1所述的一种肿瘤组织匀浆液代血清微组织块个体化药敏检测方法，其特征在于，所述g)步骤中葡萄糖代谢检测方法，接种孔每孔取上清20μl至培养板，加入80
μl邻甲苯胺溶液，沸水中水浴5min，酶标仪630nm检测吸光值。9.根据权利要求1所述的一种肿瘤组织匀浆液代血清微组织块个体化药敏检测方法，其特征在于，所述g)步骤中mtt检测方法，接种孔每孔加入20μl的mtt溶液，培养箱中孵育2-4h，待组织颜色变深，弃上清，每孔加入dmso150μl，培养箱中孵育30min，待组织褪色，取上清至新的96孔板，酶标仪测定540nm吸光值。10.根据权利要求1所述的一种肿瘤组织匀浆液代血清微组织块个体化药敏检测方法，其特征在于，所述g)步骤中化疗方案敏感性判定将孔板各孔的吸光度值进行换算，进而计算出每种药物对肿瘤组织块活性的影响，以活性抑制率为主，葡萄糖消耗率为辅，选取活性抑制率高且葡萄糖消耗率低的化疗方案。
技术总结
本发明提供一种肿瘤组织匀浆液代血清微组织块个体化药敏检测方法，属于生物医药技术领域，其主要包括以下步骤：制备人工基底膜三维组织培养低粘度培养皿和培养板，对所获取新鲜肿瘤组织处理成大小均一肿瘤微组织块，将组织块置于含有组织液代血清微组织块个体化培养基的低粘附板内中稳定孵育，稳定后的肿瘤微组织块接种到培养板中，药物处理，药敏检测。本发明解决了肿瘤个性化治疗方案筛选及抗肿瘤药物评价耗时长，数据相关性差的问题，最大程度保留肿瘤的异质性和原有的微环境，保证了肿瘤组织的效能。本发明操作简单，可行性强，在3天时间内快速、准确获得患者最佳个体化治疗方案。案。案。
技术研发人员：薛敬伟 倪庆宾 刘富垒 赵斌 刘少霞
受保护的技术使用者：泰安市中心医院
技术研发日：2021.12.28
技术公布日：2022/3/11