免疫球蛋白变体1.序列表2.本技术含有已经以ascii格式电子递交的序列表，并且将该序列表通过引用以其全文特此并入。所述ascii副本创建于2021年4月19日，名称为pat058743-wo-pct_sl.txt，并且大小为316千字节。
技术领域：
：3.本发明涉及具有促进嗜中性粒细胞募集的优化特性的fc变体多肽和抗体，及其制备的工程改造方法。这些fc变体多肽和抗体可用于治疗肿瘤，特别是实体瘤。
背景技术：
：：4.目前，所有临床上批准的抗体包含免疫球蛋白igg同种型。抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)是由识别并且结合fcγ受体(fcγr)的igg抗体介导的肿瘤细胞杀伤的关键机制。然而，在具有高肿瘤负荷的患者中，由于在肿瘤中发现的免疫抑制环境，可能发生复发并且igg抗体治疗剂可能失去功效。在肿瘤微环境中，携带fcγr的效应细胞(如巨噬细胞和自然杀伤细胞)可能因免疫抑制因子(如tgfβ)而丧失溶解能力。iga通过与由骨髓效应细胞(如嗜中性粒细胞和肿瘤驻留的骨髓源性抑制细胞(mdsc))表达的fcα受体(fcαri)结合，代表了抗体疗法的替代性同种型。iga是在人血清中次于igg的第二丰富的免疫球蛋白；两种单体iga同种异型(iga1和iga2)包含高达25％的人血清免疫球蛋白。过去，通常不认为嗜中性粒细胞是潜在的效应细胞。然而，嗜中性粒细胞是循环白细胞中最丰富的群体，并且也已经显示出浸润实体瘤(gregory和houghton(2011)cancerres.[癌症研究],71:2411-16；vogtsionov等人,(2015)cancermicroenviron.[癌症微环境],8(3):125-58；uribe-querol和rosales(2015)j.immunol.res.[免疫学研究杂志],文章id:983698；rosales(2018)frontphysiol.[生理学前沿],9:113)。mdsc也来源于髓系，并且是最具免疫抑制性的细胞类型之一。已证明iga抗体通过募集嗜中性粒细胞并从而增强adcc而有效杀伤肿瘤细胞。遗憾的是，iga抗体作为治疗剂的使用受到一些麻烦和限制的阻碍，如低表达产量和昂贵的纯化方案。此外，产物存在异质性糖基化。iga具有多个糖基化位点，这些位点易受聚糖异质性的影响。据报道，人iga1的单体iga的瞬时表达水平为30-70μg/l(lombana等人(2019)mabs[单克隆抗体],11:1122-38；meyer等人(2016)mabs[单克隆抗体],8:87-98)。[0005]因此，仍然需要可以开发作为治疗性抗体的iga抗体。效力更强的iga抗体可提供igg治疗性抗体的可行替代物，其优势在于通过募集嗜中性粒细胞、mdsc和从而增强的adcc，有效杀伤肿瘤细胞。技术实现要素：[0006]本发明提供了iga同种型的亲本fc多肽的fc变体，这些变体具有与fcαri改善的结合特性，并且可以用于募集且活化嗜中性粒细胞。本披露的fc变体包含氨基修饰，这些氨基修饰可以独立地或组合地包含一种或多种氨基酸插入、一种或多种氨基酸缺失和/或氨基酸取代。[0007]在一方面，本披露提供了亲本fc多肽的fc变体，其中与该亲本fc多肽相比，该fc变体展现出改变的fcαr结合或改变的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)，其中该fc变体包含该亲本fc多肽的fc区中的至少一个氨基酸修饰。在一个实施例中，氨基酸修饰位于选自由以下组成的组的位置：ch2.10、ch2.89、ch2.91、ch2.94、ch2.97、ch2.99、ch3.45、ch3.105、ch3.109、ch3.118以及ch3.124，其中所述氨基酸修饰的编号根据c-结构域的imgt编号进行。在优选实施例中，fc变体包含亲本fc多肽的fc区中的至少一个氨基酸修饰，其中氨基酸修饰选自由以下组成的组：a_ch2.10_s、l_ch2.89_i、g_ch2.91_q、g_ch2.91_v、q_ch2.94_e、n_ch2.97_h、n_ch2.97_y、g_ch2.99_w、s_ch3.45_d、m_ch3.105_y、e_ch3.109_d、q_ch3.118_y以及l_ch3.124_f，其中所述氨基酸修饰的编号根据c-结构域的imgt编号进行。在另一个实施例中，本披露提供了包含fc区中至少一个氨基酸修饰的fc变体，其中该氨基酸修饰选自由以下组成的组：q_ch2.94_e、n_ch2.97y、s_ch3.45_d、m_ch3.105_y、q_ch3.118_y、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y、q_ch2.94_e/s_ch3.45_d、q_ch2.94_e/m_ch3.105_y、n_ch2.97_y/s_ch3.45_d、n_ch2.97_y/m_ch3.105_y、s_ch3.45_d/m_ch3.105_y、m_ch3.105_y/q_ch3.118_y、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/m_ch3.105_y、n_ch2.97_y/s_ch3.45_d/m_ch3.105_y、q_ch2.94_e/s_ch3.45_d/m_ch3.105_y、m_ch3.105_y/q_ch3.118_y/s_ch3.45_d、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/s_ch3.45_d、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/s_ch3.45_d/m_ch3.105_y、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/m_ch3.105_y/q_ch3.118_y、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/s_ch3.45_d/m_ch3.105_y/q_ch3.118_y、a_ch2.10_s、l_ch2.89_i、g_ch2.91_v、n_ch2.97_h、g_ch2.99_w、e_ch3.109_d、l_ch3.124_f、l_ch2.89_i/g_ch2.91_v/q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/g_ch2.99_w，其中该氨基酸修饰的编号根据c-结构域的imgt编号进行。[0008]在一个实施例中，本披露提供了亲本fc多肽的fc变体，该变体包含位于位置ch2.94、ch2.97、ch3.45、ch3.105以及ch3.118处的氨基酸修饰。在一个实施例中，亲本fc多肽的fc变体包含以下氨基酸取代：位于位置ch2.94处的glu、位于位置ch2.97处的tyr、位于位置ch3.45处的asp、位于位置ch3.105处的tyr或位于位置ch3.118处的tyr。在优选实施例中，亲本fc多肽的fc变体包含以下氨基酸取代：q_ch2.94_e、l_ch2.97_y、s_ch3.45_d、m_ch3.105_y以及q_ch3.118_y。[0009]在一个实施例中，本披露提供了亲本fc多肽的fc变体，其中该亲本fc多肽包含在人iga1中，或其中该亲本fc多肽包含在人iga2中。[0010]在本披露的一个实施例中，与亲本fc多肽相比，fc变体展现出改变的fcαr结合。本文提供了亲本fc多肽的fc变体，其中如通过表面等离子体共振(spr)测量，相对于亲本fc多肽，fc变体具有至少50倍的对人fcαri的增加的亲和力。在一个实施例中，本披露提供了亲本fc多肽的fc变体，其中如通过表面等离子体共振测量，相对于亲本fc多肽，fc变体具有至少约50、约100、约150、约200、约250、约300倍的对人fcαri的增加的亲和力。在一个实施例中，本披露提供了亲本fc多肽的fc变体，其中如通过spr测量，相对于亲本fc多肽，fc变体具有至少约300倍的对人fcαri的增加的亲和力。[0011]在本披露的一个实施例中，与亲本fc多肽相比，fc变体展现出改变的adcc。本文提供了亲本fc多肽的fc变体，其中如在mda-mb-453细胞杀伤测定中测量，相对于亲本fc多肽，fc变体使抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)增加了至少约5倍。在一个实施例中，本披露提供了亲本fc多肽的fc变体，其中在calu-3细胞杀伤测定中，相对于亲本fc多肽，fc变体具有至少约2倍的增加的功效。[0012]在另一方面，本披露提供了包含变体fc多肽的lga抗体，其中相对于包含野生型fc多肽的iga抗体，本披露的抗体具有增加的fcαr亲和力、或增加的adcc。在一个实施例中，本披露提供了lga抗体，其包含位于选自由以下组成的组的位置处的氨基酸修饰：ch2.10、ch2.89、ch2.91、ch2.94、ch2.97、ch2.99、ch3.45、ch3.105、ch3.109、ch3.118以及ch3.124，其中所述氨基酸修饰的编号根据c-结构域的imgt编号进行。在优选实施例中，本披露提供了包含氨基酸修饰的iga抗体，其中该氨基酸修饰选自由以下组成的组：a_ch2.10_s、l_ch2.89_i、g_ch2.91_q、g_ch2.91_v、q_ch2.94_e、n_ch2.97_h、n_ch2.97_y、g_ch2.99_w、s_ch3.45_d、m_ch3.105_y、e_ch3.109_d、q_ch3.118_y以及l_ch3.124_f，其中所述氨基酸修饰的编号根据c-结构域的imgt编号进行。[0013]在另一个实施例中，本披露提供了包含氨基酸修饰的iga抗体，其中该氨基酸修饰选自由以下组成的组：q_ch2.94_e、n_ch2.97y、s_ch3.45_d、m_ch3.105_y、q_ch3.118_y、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y、q_ch2.94_e/s_ch3.45_d、q_ch2.94_e/m_ch3.105_y、n_ch2.97_y/s_ch3.45_d、n_ch2.97_y/m_ch3.105_y、s_ch3.45_d/m_ch3.105_y、m_ch3.105_y/q_ch3.118_y、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/m_ch3.105_y、n_ch2.97_y/s_ch3.45_d/m_ch3.105_y、q_ch2.94_e/s_ch3.45_d/m_ch3.105_y、m_ch3.105_y/q_ch3.118_y/s_ch3.45_d、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/s_ch3.45_d、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/s_ch3.45_d/m_ch3.105_y、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/m_ch3.105_y/q_ch3.118_y、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/s_ch3.45_d/m_ch3.105_y/q_ch3.118_y、a_ch2.10_s、l_ch2.89_i、g_ch2.91_v、n_ch2.97_h、g_ch2.99_w、e_ch3.109_d、l_ch3.124_f、l_ch2.89_i/g_ch2.91_v/q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/g_ch2.99_w，其中该氨基酸修饰的编号根据c-结构域的imgt编号进行。[0014]在一个实施例中，本披露提供了iga抗体，其包含位于位置ch2.94、ch2.97、ch3.45、ch3.105以及ch3.118处的氨基酸修饰。在一个实施例中，iga抗体包含以下氨基酸取代：位于位置ch2.94处的glu、位于位置ch2.97处的tyr、位于位置ch3.45处的asp、位于位置ch3.105处的tyr或位于位置ch3.118处的tyr。在优选实施例中，iga抗体包含以下氨基酸取代：q_ch2.94_e、l_ch2.97_y、s_ch3.45_d、m_ch3.105_y、q以及ch3.118_y。[0015]在一个实施例中，本披露提供了包含变体fc多肽的lga抗体，其中该抗体是人lga1或lga2抗体。[0016]本披露提供了分离的核酸，其编码本文所述的fc变体。本披露提供了包含这些核酸的载体，这些核酸任选地与控制序列可操作地连接。本披露提供了含有这些载体的宿主细胞，以及用于生产和任选地回收这些fc变体的方法。本披露提供了包含iga抗体以及生理上或药学上可接受的载剂或稀释剂的组合物，这些iga抗体包含本文所述的fc变体。[0017]本披露预期了包含本文披露的fc变体的iga抗体的治疗性和诊断性用途。本文披露的fc变体也可用于构建其他结合分子，如双特异性和多特异性抗体。本披露中描述的iga抗体可以用于治疗多种适应证，包括但不限于增殖性疾病(如癌症)。附图说明[0018]图1显示出在如实例4所述的adcc测定中，浓度递增的fc变体seqidno:3(■)、6essentiallyof)”是指方法或组合物中所包含的活性药剂以及对这些方法或组合物的预期目的而言无活性的任何赋形剂的类属或物种。在一些方面，短语“基本上由……组成”明确地排除了包括除本披露的fc变体以外的一种或多种另外的活性剂。在一些方面，短语“基本上由……组成”明确地排除了包含除本披露的fc变体和第二共同施用的药剂之外的一种或多种另外的活性剂。[0029]如本文所用，术语“抗体”是指免疫球蛋白家族的多肽，该多肽能够非共价、可逆并以特异性方式结合相应的抗原。每种抗体的基本功能单位是仅含有一个ig单位的免疫球蛋白单体，本文定义为“ig单体”。分泌的抗体也可以是具有两个ig单位的二聚体(例如iga)、具有四个ig单位的四聚体或具有五个ig单位的五聚体(例如哺乳动物igm)。术语“抗体”包括，例如，单克隆抗体(包括具有免疫球蛋白fc区的全长抗体)。ig单体是由四条多肽链组成的y形分子；这四条多肽链为由二硫键连接的两条相同的重链和两条相同的轻链(woof和burton(2004)naturereviewsimmunology[自然免疫学综述],4(2):89-99)。每条链包含多个含有约70-110个氨基酸的结构性结构域，这些结构域根据其大小和功能分为两类：可变的或恒定的。重链包含一个可变结构域(缩写为vh)和三个恒定结构域(缩写为ch1、ch2以及ch3)。每条轻链包含一个可变结构域(缩写为vl)和一个恒定结构域(缩写为cl)。免疫球蛋白结构域具有特征性的免疫球蛋白折叠，其中两个β片形成“夹心”形状，通过保守的半胱氨酸残基和其他带电荷氨基酸之间的相互作用保持在一起。vh和vl区可进一步细分为高变区，称为互补决定区(cdr)，其间散布有称为框架区(fr)的较保守区。每个vh和vl由从氨基末端排到羧基末端按以下顺序排列的三个cdr和四个fr组成：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3和fr4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的抗原结合结构域或抗原结合位点。[0030]术语“抗体”包括但不限于：单克隆抗体、人抗体、人源化抗体、骆驼科(camelid)抗体、嵌合抗体和抗独特型(抗id)抗体(包括，例如，针对本披露抗体的抗id抗体)。抗体可以属于任何同种型/类别(例如，igg、ige、igm、igd、iga和igy)或亚类(例如，igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2)。[0031]如本文所用的术语“单特异性分子”是指与靶抗原上的一个表位结合的分子。在一些实施例中，本披露的单特异性分子是单特异性抗体样分子。在一些实施例中，本披露的单特异性分子是单特异性抗体。术语“双特异性分子”是指与两种不同抗原结合的多特异性结合分子。在一些实施例中，本披露的双特异性分子是双特异性抗体样分子。如本文所用的术语“多特异性结合分子”是指结合两种或更多种不同抗原的分子。每种抗原的识别通常通过“抗原结合结构域”完成。在一些实施例中，本披露的多特异性结合分子是多特异性抗体样分子，如双特异性抗体样分子。[0032]术语“抗原结合位点”是指抗体的一部分，该部分包含形成与抗原或其表位结合的界面的决定簇。术语“抗原结合位点”可以与术语“抗原结合结构域”互换地使用。关于蛋白质(或蛋白质模拟物)，抗原结合位点典型地包括形成与抗原多肽结合的界面的一个或多个环(具有至少四个氨基酸或氨基酸模拟物)。典型地，抗体分子的抗原结合位点包括至少一个或两个cdr和/或高变环，或更典型地至少三个、四个、五个或六个cdr和/或高变环。[0033]如本文所用，“互补决定区”(“cdr”)是指vl和vh的高变区。cdr是抗体链的靶蛋白结合位点，结合位点携带针对这种靶蛋白的特异性。每种人vl或vh中存在三个cdr(cdr1-3，从n末端顺序编号)，总共构成约15％-20％的可变结构域。cdr可以按其区域和顺序提及。例如，“vhcdr1”或“hcdr1”均是指重链可变区的第一cdr。cdr在结构上与靶蛋白的表位互补并因此直接负责结合特异性。vl或vh的剩余伸展段(所谓的框架区)表现出较小的氨基酸序列变异性(kuby,(2000)immunology[免疫学],第4版,第4章.弗里曼出版公司(w.h.freeman&co.),纽约)。cdr和框架区的位置可以使用本领域熟知的多种定义确定，例如，卡巴特(kabat)、乔西亚(chothia)、imgt、abm和组合定义(参见，例如，johnson等人,(2001)nucleicacidsres.[核酸研究],29:205-206；chothia和lesk,(1987)j.mol.biol.[分子生物学杂志],196:901-917；chothia等人,(1989)nature[自然],342:877-883；chothia等人,(1992)j.mol.biol.[分子生物学杂志],227:799-817；lefranc,m.p.,(2001)nucleicacidsres.[核酸研究],29:207-209；al-lazikani等人,(1997)j.mol.biol.[分子生物学杂志],273:927-748以及kabat等人,(1991)sequencesofproteinsofimmunologicalinterest[具有免疫学重要性的蛋白质序列],第5版-usdhhs,nih公开号91-3242,第662、680、689页)。抗原组合位点的定义还在以下文献中描述：ruiz等人,(2000)nucleicacidsres.[核酸研究],28:219-221；maccallum等人,(1996)j.mol.biol.[分子生物学杂志],262:732-745；以及martin等人,(1989)proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊],86:9268-9272；martin等人,(1991)methodsenzymol.[酶学方法],203:121-153；以及rees等人,(1996)见sternbergm.j.e.(编辑),proteinstructureprediction[蛋白质结构预测],oxforduniversitypress[牛津大学出版社],牛津,141-172。在组合的卡巴特和乔西亚编号方案中，在一些实施例中，cdr对应于为卡巴特cdr、乔西亚cdr或两者的一部分的氨基酸残基。例如，在一些实施例中，cdr对应于vh(例如哺乳动物vh，例如人vh)中的氨基酸残基26-35(hcdr1)、50-65(hcdr2)、和95-102(hcdr3)；和vl(例如哺乳动物vl，例如人vl)中的氨基酸残基24-34(lcdr1)、50-56(lcdr2)、和89-97(lcdr3)。根据imgt，将vh中的cdr氨基酸残基编号为大约26-35(cdr1)、51-57(cdr2)和93-102(cdr3)，并将vl中的cdr氨基酸残基编号为大约27-32(cdr1)、50-52(cdr2)和89-97(cdr3)(根据“卡巴特”编号)。根据imgt，抗体的cdr区可以使用程序imgt/domaingapalign确定。imgt工具在万维网(www).imgt.org.中获得。[0034]在实施例中，抗体包含抗体的“抗原结合片段”。此类片段的实例包括：(i)fab片段，该片段是由vl、vh、cl和ch1结构域组成的单价片段；(ii)f(ab')2片段，包含在铰链区通过二硫桥连接的两个fab片段的二价片段；(iii)由vh和ch1结构域组成的fd片段；(iv)由抗体单臂的vl和vh结构域组成的fv片段，(v)由vh结构域组成的双抗体(dab)片段；(vi)骆驼科或骆驼化(camelized)可变结构域；(vii)单链fv(scfv)(参见例如bird等人,(1988)science[科学]242:423-426；和huston等人,(1988)pnasusa[美国国家科学院院刊]85:5879-5883)；(viii)单结构域抗体；(ix)双抗体(dab)(二价且双特异性)以及(x)嵌合(例如，人源化)抗体，这些嵌合抗体可通过修饰完整抗体或使用重组dna技术从头合成的抗体产生。这些功能抗体片段保留了与其各自的抗原或受体选择性结合的能力。这些抗体片段是使用本领域的技术人员已知的常规技术获得的，并且以与完整抗体相同的方式针对效用来筛选这些片段。[0035]哺乳动物中有两种类型的免疫球蛋白轻链，称为λ(λ)和κ(κ)。每种抗体含有两条始终相同的轻链；哺乳动物中每种抗体仅存在一种类型的轻链，κ或λ。轻链的近似长度为211至217个氨基酸，并且每条轻链具有两个结构域，即一个恒定结构域和一个可变结构域。[0036]哺乳动物ig重链有五种类型(指示为α、δ、ε、γ以及μ)，并且在抗体中存在的重链类型定义了抗体的类别或同种型：分别为igm、igg、iga、igd、ige。重链在理化、结构和免疫特性方面有所不同，但每条重链都有两个结构域，即一个可变结构域和一个恒定结构域。可变结构域包含单ig结构域(大约110个氨基酸长)，并且决定抗体的结合特异性。相同同种型的所有抗体中的恒定结构域相同，但不同同种型的抗体中的恒定结构域不同。重链γ、α和δ具有由三个串联ig结构域组成的恒定区，以及增加柔性的铰链区；重链μ和ε具有由四个免疫球蛋白结构域组成的恒定区(woof和burton，同上)。术语“免疫球蛋白”(ig)与术语“抗体”在本文中可互换地使用。[0037]igg是血液(血浆)中最丰富的抗体同种型，占人免疫球蛋白的70％-75％。igg能解毒有害物质，并且在白细胞和巨噬细胞识别抗原-抗体复合物中起重要作用。igg在人类中进一步分为4种亚类：igg1、igg2、igg3以及igg4。igm通常在血液中循环，约占人免疫球蛋白的10％。igm具有五聚体结构，其中五个基本的y形分子连接在一起。b细胞首先响应于微生物感染/抗原侵袭而产生igm。尽管igm对抗原的亲和力低于igg，但由于其五聚体/六聚体结构，其对抗原的亲合力更高。igm也通过与细胞表面受体结合来活化细胞信号传导途径。iga大量存在于血清、鼻涕、唾液、母乳和肠液中，占人免疫球蛋白的25％。iga形成二聚体(即，两种连接在一起的iga单体)。母乳中的iga保护新生儿胃肠道免受病原体感染。iga分为2种亚类：iga1和iga2。igd占人免疫球蛋白的比例不到1％，并且可能参与诱导b细胞产生抗体，但其确切功能尚不清楚。ige以微量存在，占人免疫球蛋白的比例不超过0.001％。它最初的作用是抵御寄生虫。在寄生虫感染罕见的区域，ige主要参与过敏。[0038]免疫细胞活性通过抗体的区域(称为片段可结晶区或“fc区”)调节。fc区由两条相同的多肽链(本文中均称为“fc结构域”)组成，其在igg和iga中包含重链的ch2和ch3恒定结构域。igm和igefc区在每条多肽链中含有三个重链恒定结构域(ch结构域2-4)。ch2和ch3结构域中的氨基酸残基可以根据eu编号系统(edelman等人,(1969)pnas.usa[美国国家科学院院刊],63,78-85)、“kabat”编号(kabat等人,同上)或可替代地使用c结构域的imgt编号来进行编号。imgt工具在万维网(www).imgt.org.中获得。[0039]fc区与细胞表面受体、“fc受体”以及介导抗体的生理作用的补体蛋白结合。fc受体见于免疫系统的许多细胞，包括：b淋巴细胞、滤泡性树突细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、人血小板以及肥大细胞。抗体fc区与fc受体的结合通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)的机制，刺激吞噬细胞或细胞毒性细胞破坏微生物或受感染的细胞。存在几种不同类型的fc受体(fcr)，基于其识别的抗体类型进行分类。例如，结合igg的那些称为fc-γ受体(fcγr)，结合iga的那些称为fc-α受体(fcαri)，并且结合ige的那些称为fc-ε受体(fcεr)。fcr的种类也通过表达它们的细胞(巨噬细胞、粒细胞、自然杀伤细胞、t和b细胞)和每个受体的信号传导特性来区分(owenj等人,(2009)immunology[免疫学](第7版).纽约：w.h.弗里曼公司(newyork:w.h.freemanandcompany.)第423页)。fcαri也称为cd89，并且其主要抗体配体是iga。这一受体对iga的亲和力低(kd》10-6m)，并且见于单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞以及嗜酸性粒细胞。iga与fcαri的结合主要引起吞噬作用和诱导微生物杀伤。[0040]在实施例中，抗体包含全长抗体、或全长免疫球蛋白链。在实施例中，抗体包含全长抗体或全长免疫球蛋白链的抗原结合或功能性片段。抗体的制剂可以是单克隆或多克隆的。抗体也可以是人抗体、人源化抗体、cdr移植抗体或体外产生的抗体。[0041]在一个实施例中，可以重组地产生抗体或免疫球蛋白，例如通过噬菌体展示或通过组合方法产生。用于产生抗体的噬菌体展示和组合方法是本领域已知的(如描述于例如，ladner等人,us5,223,409；kang等人,wo92/18619；dower等人,wo91/17271；winter等人,wo92/20791；markland等人,wo92/15679；breitling等人,wo93/01288；mccafferty等人,wo92/01047；garrard等人,wo92/09690；ladner等人,wo90/02809；fuchs等人,(1991)bio/technology[生物技术]9:1370-1372；hay等人,(1992)humantibodyhybridomas[人抗体杂交瘤]3:81-85；huse等人,(1989)science[科学]246:1275-1281；griffths等人,(1993)emboj.[欧洲分子生物学学会会刊],12:725-734；hawkins等人,(1992)jmolbiol.[分子生物学杂志],226:889-896；clackson等人,(1991)nature[自然],352:624-628；gram等人,(1992)pnas[美国国家科学院院刊]89:3576-3580；garrard等人,(1991)bio/technology[生物技术]9:1373-1377；hoogenboom等人,(1991)nucacidres.[核酸研究],19:4133-4137；以及barbas等人,(1991)pnas[美国国家科学院院刊]88:7978-7982，所有文献的内容通过引用并入本文)。[0042]在一个实施例中，抗体或免疫球蛋白是全人抗体(例如，在已经基因工程改造为从人免疫球蛋白序列产生抗体的小鼠中制备的抗体或从人中分离的抗体)，或非人抗体，例如啮齿动物(小鼠或大鼠)、山羊、灵长类动物(例如，猴)、骆驼抗体。可以使用携带人免疫球蛋白基因而不是小鼠系统的转基因小鼠产生人单克隆抗体。使用来自用目的抗原免疫的这些转基因小鼠的脾细胞产生分泌人单克隆抗体的杂交瘤，这些人单克隆抗体对来自人蛋白质的表位具有特异性亲和力(参见，例如，wood等人,wo91/00906；kucherlapati等人,wo91/10741；lonberg等人,wo92/03918；kay等人,wo92/03917；lonberg等人,(1994)nature[自然]368:856-859；green等人,(1994)naturegenet.[自然遗传学]7:13-21；morrison等人,(1994)pnasusa[美国国家科学院院刊]81:6851-6855；bruggeman等人,(1993)yearimmunol[免疫学年评]7:33-40；tuaillon等人,(1993)pnas[美国国家科学院院刊]90:3720-3724；bruggeman等人,(1991)eurjimmunol[欧洲免疫学杂志]21:1323-1326)。[0043]抗体或免疫球蛋白可以是可变区或其一部分(例如，cdr)在非人生物(例如，大鼠或小鼠)中产生的抗体或免疫球蛋白。嵌合抗体、cdr移植的抗体、和人源化抗体属于本发明。在非人生物(例如，大鼠或小鼠)中产生并且然后在例如可变框架或恒定区中修饰以降低在人中的抗原性的抗体属于本发明。嵌合抗体可以通过本领域已知的重组dna技术产生(参见robinson等人,wo87/002671；akira等人,ep184187a1；taniguchi,ep171496a1；morrison等人,ep173494a1；neuberger等人,wo86/01533；cabilly等人,us4,816,567；cabilly等人,ep125023a1；better等人,(1988)[科学]240:1041-1043；liu等人,(1987)pnas[美国国家科学院院刊]84:3439-3443；liu等人,(1987),j.immunol.[免疫学杂志]139:3521-3526；sun等人,(1987)pnas[美国国家科学院院刊]84:214-218；nishimura等人,(1987),canc.res.[癌症研究]47:999-1005；wood等人,(1985)nature[自然]314:446-449；以及shaw等人,(1988),j.natlcancerinst.[美国国立癌症研究所杂志]80:1553-1559)。[0044]人源化抗体或cdr移植抗体的至少一个或两个但通常所有三个(重和/或轻免疫球蛋白链的)受体cdr被供体cdr替换。抗体可以被至少一部分非人cdr替换，或者仅一些cdr可以被非人cdr替换。仅需要替换人源化抗体与靶抗原结合所需的cdr的数量。优选地，供体是啮齿动物抗体(例如大鼠或小鼠抗体)，并且受体将是人框架或人共有框架。典型地，提供cdr的免疫球蛋白称为“供体”，并且提供框架的免疫球蛋白称为“受体”。在一个实施例中，供体免疫球蛋白是非人(例如啮齿动物)的。受体框架是天然存在的(例如人类)框架或共有框架，或与其具有约85％或更高，优选90％、95％、99％或更高同一性的序列。[0045]如本文所用，术语“共有序列”是指由相关序列家族中最常出现的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见例如winnaker,fromgenestoclones[从基因到克隆](德国魏因海姆出版社(verlagsgesellschaft,weinheim,germany)1987))。在蛋白质家族中，共有序列中的每个位置被在家族中所述位置上最频繁出现的氨基酸占据。如果两个氨基酸同样频繁出现，则任一个均可以包括在共有序列中。“共有框架”是指共有免疫球蛋白序列中的框架区。[0046]抗体可以通过本领域已知的方法人源化(参见例如morrison,(1985),science[科学]229:1202-1207；oi等人,(1986),biotechniques[生物技术]4:214，以及queen等人,us5,585,089、us5,693,761和us5,693,762，所有文献的内容通过引用特此并入)。可以通过cdr移植或cdr取代产生人源化抗体或cdr移植抗体，其中免疫球蛋白链的一个、两个或所有cdr可以被替换。参见例如us5,225,539；jones等人,(1986)nature[自然]321:552-525；verhoeyan等人,(1988)science[科学]239:1534；beidler等人,(1988)j.immunol.[免疫学杂志]141:4053-4060以及winterus5,225,539，所有文献的内容明确地通过引用特此并入。人源化抗体也在本发明的范围内，其中特定氨基酸已被取代、缺失或添加。从供体中选择氨基酸的标准描述于us5,585,089，例如us5,585,089的第12-16栏中，其内容通过引用特此并入。用于人源化抗体的其他技术描述于padlan等人,ep519596a1中。[0047]用于改变抗体恒定区的方法是本领域已知的。具有改变功能(改变的对效应配体(如细胞上的fcr)或补体的c1组分的亲和力)的抗体可以通过用不同的残基替换抗体恒定部分中的至少一个氨基酸残基而产生(参见例如ep388151a1、us5,624,821和us5,648,260)。[0048]如本文所用，“位置”意指蛋白质序列中氨基酸的位置。位置可以顺序编号，或者根据既定格式(例如如在卡巴特或imgt编号中的eu索引(www.imgt.org))编号。例如，当使用imgt编号时，谷氨酰胺94(也称为gln94，也称为q94)也被赋予fc区中的位置，以表示其是否存在于ch2或ch3结构域中。例如，在人抗体iga1中，qch2.94、sch3.45指示在ch2结构域中位于位置94处的谷氨酰胺，以及在ch3结构域中位于位置45处的丝氨酸。[0049]如本文所用，“残基”意指在蛋白质中的位置及其相关的氨基酸身份。例如，谷氨酰胺94(也称为gln94，也称为q94)是人抗体lga1中的残基。[0050]如本文所用的一种或多种氨基酸残基/一个或多个位置的“修饰”或“突变”是指与起始氨基酸序列相比，一级氨基酸序列的变化，其中这一变化是由涉及所述一种或多种氨基酸残基/位置的序列变化引起的。例如，典型的修饰包括用一个或多个其他氨基酸取代一个或多个残基(或在所述一个或多个位置)(例如，保守或非保守取代)，在所述一个或多个残基/一个或多个位置附近插入一个或多个氨基酸，以及缺失所述一个或多个残基/一个或多个位置，倒位所述一个或多个残基/一个或多个位置，以及复制所述一个或多个残基/一个或多个位置。氨基酸“取代”或其变化形式是指用一个或多个不同的氨基酸残基替代预定(起始)氨基酸序列中的一个或多个现有氨基酸残基。通常且优选地，与包含起始或亲本(或“野生型”)氨基酸序列的多肽相比，修饰使变体多肽的至少一种物理生物化学活性改变。例如，在抗体或fc变体的情况下，改变的物理生物化学活性可以是对靶标分子的结合亲和力、结合能力和/或结合作用。[0051]如本文所用，“变体多肽”、“多肽变体”或“变体”意指由于至少一个氨基酸修饰而不同于亲本多肽序列的多肽序列。亲本多肽可以是天然存在的或野生型(wt)多肽，或者可以是wt多肽的修饰版本。变体多肽可以指代多肽本身、包含该多肽的组合物或编码该多肽的氨基序列。优选地，与亲本多肽相比，变体多肽具有至少一个氨基酸修饰，例如与亲本相比，具有从约一至约十个氨基酸修饰，并且优选地从约一至约五个氨基酸修饰。如本文所述的变体多肽序列将与亲本多肽序列具有至少约80％同源性，优选地至少约90％同源性，更优选地至少约95％同源性。在一个实施例中，如本文所述的变体多肽序列将与亲本igach2多肽序列具有至少约85％同源性，优选地至少约90％同源性，更优选地至少约95％同源性。在一个实施例中，如本文所述的变体多肽序列将与亲本igach3多肽序列具有至少约90％同源性，优选地至少约95％同源性，更优选地至少约97％同源性。在优选实施例中，如本文所述的变体多肽序列将与亲本igach2多肽序列具有至少约85％同源性，优选地至少约90％同源性，更优选地至少约95％同源性，并且与亲本igach3多肽序列具有至少约90％同源性，优选地至少约95％同源性，更优选地至少约97％同源性。因此，如本文所用，“fc变体”或“变体fc”意指由于至少一个氨基酸修饰而不同于亲本fc序列的fc序列。fc变体可以仅涵盖一个fc区，或可以存在于抗体、fc融合体、分离的fc、fc片段或基本上由fc编码的其他多肽的上下文中。fc变体可以指代fc多肽本身、包含该fc变体多肽的组合物或编码该fc变体多肽的氨基酸序列。如本文所用，“fc多肽变体”或“变体fc多肽”意指由于至少一个氨基酸修饰而不同于亲本fc多肽的fc多肽。如本文所用，术语“亲本fc多肽”意指进行一个或多个氨基酸修饰的起始fc多肽。亲本fc多肽可以是野生型fc多肽或野生型fc多肽的等位基因变异的fc多肽。亲本fc多肽也可以是已经进行氨基酸修饰的fc多肽。如本文所用，“蛋白质变体”或“变体蛋白质”意指由于至少一个氨基酸修饰而不同于亲本蛋白质的蛋白质。如本文所用，“抗体变体”或“变体抗体”意指由于至少一个氨基酸修饰而不同于亲本抗体的抗体。如本文所用，“lga变体”或“变体lga”意指由于至少一个氨基酸修饰而不同于亲本lga的抗体。亲本iga可以属于同种型iga1或iga2。如本文所用，“免疫球蛋白变体”或“变体免疫球蛋白”意指由于至少一个氨基酸修饰而不同于亲本免疫球蛋白序列的免疫球蛋白序列。[0052]本文中的“野生型”或“wt”意指在自然界中发现的氨基酸序列或核苷酸序列，包括等位基因变异。wt蛋白质、多肽、抗体、免疫球蛋白、lga等具有未被有意修饰的氨基酸序列或核苷酸序列。[0053]“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被具有类似侧链的氨基酸残基替换的取代。具有类似侧链的氨基酸残基的家族已在本领域中进行了定义。这些家族包括具有以下各项的氨基酸：碱性侧链(例如，赖氨酸(k)、精氨酸(r)、组氨酸(h))、酸性侧链(例如，天冬氨酸(d)、谷氨酸(e))、不带电的极性侧链(例如甘氨酸(g)、天冬酰胺(n)、谷氨酰胺(q)、丝氨酸(s)、苏氨酸(t)、酪氨酸(y)、半胱氨酸(c))、非极性侧链(例如丙氨酸(a)、缬氨酸(v)、亮氨酸(l)、异亮氨酸(i)、脯氨酸(p)、苯丙氨酸(f)、甲硫氨酸(m)、色氨酸(w))、β-支链侧链(例如苏氨酸(t)、缬氨酸(v)、异亮氨酸(i))以及芳族侧链(例如，酪氨酸(y)、苯丙氨酸(f)、色氨酸(w)、组氨酸(h))。[0054]在两个或更多个核酸或多肽序列的上下文中，术语“相同百分比”或“同一性百分比”是指两个或更多个相同的序列或子序列。当在比较窗口或指定区域内进行比较和比对以寻求使用以下序列比较算法之一或通过手动比对和目视检查所测量的最大对应时，如果两个序列具有规定百分比的相同的氨基酸残基或核苷酸(即，在规定区域上或当没有规定时则在整个序列上，60％同一性，任选65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％同一性)，则两个序列是“基本上相同的”。任选地，同一性存在于长度为至少约50个核苷酸(或10个氨基酸)的区域上，或更优选地在长度为100至500或1000或更多个核苷酸(或20、50、200或更多个氨基酸)的区域上。本披露的“同一性百分比”或“序列同一性百分比”可以通过以下来计算：(i)在比较窗口上比较两个最佳比对序列(核苷酸或蛋白)，(ii)确定在这两个序列中出现相同核酸碱基(对于核苷酸序列)或氨基酸残基(对于蛋白质)的位置的数目以产生匹配位置数，(iii)用匹配位置数除以比较窗口中的位置总数，然后(iv)将该商乘以100％以得到同一性百分比。如果在没有指定特定比较窗口的情况下相对于参考序列计算“同一性百分比”，则通过将在比对区域上的匹配位置数除以参考序列的总长度来确定同一性百分比。因此，出于本披露的目的，当两个序列(查询序列和主题序列)是最佳比对(在比对中允许空位)时，查询序列的“同一性百分比”等于两个序列之间的相同位置数除以其长度(或比较窗口)上查询序列中的总位置数，然后乘以100％。[0055]对于序列比较，典型地一个序列充当参考序列，将测试序列与该参考序列进行比较。当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入到计算机中，必要时指定子序列坐标，并且指定序列算法程序参数。可以使用默认程序参数，或者可以指定替代参数。然后，序列比较算法将基于程序参数计算测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。[0056]如本文所用的术语“比较窗口”包括提及选自由20至600、通常约50至约200、更通常约100至约150组成的组的多个邻接位置中的任一个的区段，其中可以将序列与具有相同数量邻接位置的参考序列在两个序列最佳比对后进行比较。用于比较的序列比对方法是本领域中已知的。用于比较的序列的最佳比对可以通过以下来进行：例如，通过smith和waterman(1970)adv.appl.math.[应用数学进展]2:482c的局部同源性算法，通过needleman和wunsch(1970)j.mol.biol.[分子生物学期刊],48:443的同源性比对算法，通过pearson和lipman(1988)pnasusa[美国国家科学院院刊]85:2444的相似性方法研究，通过这些算法(威斯康星州麦迪逊的科学大道575号遗传学计算机小组(geneticscomputergroup,575sciencedr.,madison,wi)的威斯康星遗传学软件包中的gap、bestfit、fasta、和tfasta)的计算机实现，或通过手动比对和目测检查(参见例如，brent等人,(2003)currentprotocolsinmolecularbiology[分子生物学实验指南])。[0057]适用于确定序列同一性百分比和序列相似性的算法的两个实例是blast和blast2.0算法，它们分别描述于altschul等人,(1977),nuc.acidsres[核酸研究],.25:3389-3402；和altschul等人,(1990)j.mol.biol.[分子生物学杂志]215:403-410中。用于执行blast分析的软件可通过美国国家生物技术信息中心(nationalcenterforbiotechnologyinformation)公开地获得。此算法包括首先通过鉴定查询序列中长度为w的短字来鉴定高评分序列对(hsp)，当与数据库序列中的相同长度的字比对时，该长度为w的短字匹配或满足一些正值阈值得分t。t被称为邻域字得分阈值(altschul等人，(1990)同上)。这些初始邻域字命中点充当启动搜索以查找含有它们的更长hsp的种子。字命中点沿着每个序列在两个方向上扩展，远至可以增加累积比对得分。对于核苷酸序列，使用参数m(一对匹配残基的奖励得分；总是》0)和n(错配残基的罚分；总是《0)计算累积得分。对于氨基酸序列，使用评分矩阵来计算累积得分。当出现以下情形时，字命中点向各方向的延伸终止：累积比对得分从其最大获得值跌落数量x；由于一个或多个负评分残基比对的累积，累积得分走向零或更低；或到达任一序列的一端。blast算法参数w、t和x决定了比对的灵敏度和速度。blastn程序(对于核苷酸序列)使用字长(w)11、期望值(e)10、m＝5、n＝-4和两条链比较作为默认值。对于氨基酸序列，blastp程序使用字长3和期望值(e)10以及blosum62评分矩阵(参见henikoff和henikoff,(1989)pnas.usa[美国国家科学院院刊],89:10915)、比对(b)50、期望值(e)10、m＝5、n＝-4和两条链比较作为默认值。[0058]blast算法还对两个序列之间的相似性进行统计学分析(参见例如，karlin和altschul(1993)pnas.usa[美国国家科学院院刊],90:5873-5787)。由blast算法提供的一种相似性量度是最小总和概率(p(n))，该最小总和概率提供了两个核苷酸或氨基酸序列之间偶然发生匹配的概率的指示。例如，如果在测试核酸与参考核酸的比较中的最小总和概率小于约0.2、更优选地小于约0.01、最优选地小于约0.001，则认为该核酸与参考序列相似。[0059]两个氨基酸序列之间的同一性百分比也可以使用已并入align程序(2.0版)中的e.meyers和w.miller(comput.appl.biosci.[计算机应用生物科学],4:11-17(1988))的算法，利用pam120权重残基表、空位长度罚分12、空位罚分4来确定。另外，两个氨基酸序列之间的同一性百分比可以使用已并入gcg软件包(在www.gcg.com上可获得)中的gap程序中的needleman和wunsch(同上)算法，使用blossum62矩阵或pam250矩阵以及缺口权重为16、14、12、10、8、6或4和长度权重为1、2、3、4、5或6来确定。[0060]除了上述序列同一性百分比之外，两个核酸序列或多肽基本上相同的另一个指示是由第一核酸编码的多肽与针对由第二核酸编码的多肽产生的抗体进行免疫交叉反应，如下所述。因此，例如在一个多肽与第二多肽的区别仅在于保守取代的情况下，这两个肽通常基本上相同。两个核酸序列基本上相同的另一个指示是两个分子或它们的互补序列在严格条件下彼此杂交，如下所述。两个核酸序列基本上相同的又另一个指示是可使用相同的引物来扩增序列。[0061]术语“核酸”在本文中可与术语“多核苷酸”互换使用，并且是指呈单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物。该术语涵盖含有已知核苷酸类似物或经修饰的骨架残基或连接的核酸，这些核酸是合成的、天然存在的和非天然存在的，具有与参考核酸类似的结合特性，并且以类似于参考核苷酸的方式代谢。此类类似物的实例包括但不限于硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、甲基膦酸酯、手性-甲基膦酸酯、2-o-甲基核糖核苷酸、肽-核酸(pna)。[0062]除非另外指示，否则特定的核酸序列还隐含地涵盖其经保守修饰的变体(例如，简并密码子取代)和互补序列以及明确指示的序列。特别地，如下文详述，简并密码子取代可以通过产生如下序列而实现，在这些序列中，一个或多个所选择的(或全部)密码子的第三位被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代(batzer等人,(1991)nucleicacidres.[核酸研究]19:5081；ohtsuka等人,(1985)jbiolchem.[生物化学杂志]260:2605-2608；以及rossolini等人,(1994)molcellprobes[分子和细胞探针],8:91-98)。如本文所用，术语“优化的核苷酸序列”意指核苷酸序列已被改变为使用在产生细胞(在该案例中为中国仓鼠卵巢细胞(cho))中优选的密码子编码氨基酸序列。将优化的核苷酸序列工程改造以完全保留最初由起始核苷酸序列编码的氨基酸序列，该起始核苷酸序列也称为“亲本”序列。在特定的实施例中，本文优化的序列已被工程改造以具有在cho哺乳动物细胞中优选的密码子。[0063]如本文所用，“c末端”是指具有游离羧基(-cooh)的多肽链的羧基末端氨基酸。如本文所用，“n末端”是指具有游离胺基(-nh2)的多肽链的氨基末端氨基酸。[0064]如本文所用，术语“可操作地连接”或“功能性连接”是指两个或更多个多核苷酸(例如，dna)区段之间的功能关系。典型地，它是指转录调节序列与已转录序列的功能性关系。例如，如果启动子或增强子序列在适当的宿主细胞或其他表达系统中刺激或调节编码序列的转录，则该启动子或增强子序列可操作地连接至编码序列。通常，与转录序列可操作地连接的启动子转录调节序列与转录序列在物理上邻接，即它们是顺式作用的。然而，一些转录调节序列如增强子不需要在物理上邻接或位于极为接近这些转录调节序列增强其转录的编码序列的位置。[0065]术语“多肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用来指氨基酸残基的聚合物。这些短语还适用于一个或多个氨基酸残基是相应天然存在氨基酸的人工化学模拟物的氨基酸聚合物，并且适用于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。除非另外指示，否则特定的多肽序列还隐含地涵盖其经保守修饰的变体。[0066]如本文所用，“亲本多肽”、“亲本蛋白质”、“前体多肽”或“前体蛋白质”意指随后被修饰以产生变体的未修饰的多肽。亲本多肽可以是天然存在的多肽，或天然存在的多肽的变体或工程改造版本。亲本多肽可以指代多肽本身、包括该亲本多肽的组合物或编码该亲本多肽的氨基酸序列。因此，如本文所用，“亲本fc多肽”意指经修饰以产生变体的fc多肽，并且如本文所用，“亲本抗体”意指经修饰以产生变体抗体的抗体。在一些实施例中，“亲本”是野生型蛋白质。[0067]如本文所用，术语“体内半衰期”是指在给定哺乳动物的血液中循环的目的分子或其变体的半衰期。[0068]术语“受试者”包括人类和非人类动物。非人类动物包括所有脊椎动物，例如，哺乳动物和非哺乳动物如非人类灵长类动物、绵羊、狗、牛、鸡、两栖动物和爬行动物。在优选实施例中，受试者是人。除非在指出时，否则术语“患者”或“受试者”在本文中可互换地使用。[0069]如本文所用，如“需要治疗的患者”或“需要治疗的受试者”的短语包括将受益于施用例如用于检测、诊断程序和/或治疗的本披露的分子或药物组合物的受试者，如哺乳动物受试者。[0070]如本文所用，术语术语“治疗(treatment或treat)”在本文中被定义为根据本披露的fc变体，或包含所述fc变体的药物组合物向受试者或向来自受试者的分离的组织或细胞系的应用或施用，其中该受试者患有特定的疾病(例如，关节炎)，具有与疾病相关的症状，或有向疾病发展的倾向(如果适用)，其中的目的是治愈(如果适用)，预防(如果适用)疾病，延迟疾病的发作，降低疾病的严重程度，减缓、改善疾病的一种或多种症状，改善疾病，减少或改善任何与疾病相关的症状或向疾病发展的倾向。术语“治疗(treatment或treat)”包括治疗怀疑患有疾病的患者以及患病或已诊断患有疾病或医学病症的患者，并且包括抑制临床复发。短语“降低可能性”是指延迟疾病、感染或障碍的发作或产生或进展。[0071]术语“治疗上可接受的量”或“治疗有效量”或“治疗有效剂量”可互换地指足以实现所需结果(即，降低疾病活动性，降低疾病进展，减少疾病病征和/或症状等)的量。在一些方面，治疗上可接受的量不诱导或不引起不期望的副作用。可以通过首先施用低剂量并且随后递增地增加剂量直至实现所期望效果来确定治疗上可接受的量。本披露的分子的“预防有效剂量”和“治疗有效剂量”可以分别预防疾病症状发作(如果适用)或使疾病症状的严重程度减轻。[0072]如本文所用，关于患者的“选择”用于指特定患者由于其具有预定标准而特别地从较大的患者组选出。类似地，“选择性治疗患者”是指向如下患者提供治疗，该患者由于该特定患者具有预定标准而特别地从较大的患者组选出。类似地，“选择性施用”是指向如下患者施用药物，该患者由于该特定患者具有预定标准而特别地从较大的患者组选出。[0073]除非另外特别说明或从上下文中显而易见，否则如本文所用，关于数值的术语“约”应理解为在本领域的正常公差内，例如，在平均值的两个标准偏差内。因此，“约”可以在所述值的+/-10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.1％、0.05％或0.01％内，优选地，所述值的+/-10％内。当在数值范围或数字列表前使用时，术语“约”适用于系列中的每个数字，例如，短语“约1-5”应被解释为“约1-约5”，或例如，短语“约1、2、3、4”应被解释为“约1、约2、约3、约4等”。[0074]单词“基本上”不排除“完全”，例如，“基本上不含”y的组合物可以完全不含y。必要时，本披露的定义中可以省略单词“基本上”。[0075]术语“共同施用”是指个体的血液中同时存在两种活性剂。与所披露的抗体和抗原结合片段共同施用的活性剂(例如，另外的治疗剂)可以并行或顺序递送。[0076]本披露的各个方面在以下章节和子章节中进一步详细描述。[0077]本发明的fc变体[0078]除了抗体结合抗原的能力之外，抗体的一个重要特征是其募集免疫效应子功能的能力。体液免疫应答的参与主要由与c1q的相互作用和补体级联反应的启动控制(meyer等人,(2014)mabs[单克隆抗体],6(5):1133-44)。细胞免疫应答的发生主要是由于抗体和fcγ受体(fcγr)之间的相互作用。通过活化受体的细胞内信号传导通过基于免疫受体酪氨酸的活化基序(itam)的磷酸化来调节，这导致效应子功能，如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)、抗体依赖性细胞吞噬作用(adcp)，以及通过诱导细胞因子分泌的炎症。[0079]尽管许多基于抗体的疗法在临床上和商业上取得了成功，但这些治疗剂通常仅在部分患者中有效。迄今为止，所有商业抗体都属于igg类别，主要是igg1，其通过fcγriii(cd16)募集免疫效应子功能。典型的反应涉及通过igg抗体的fc部分活化自然杀伤(nk)细胞(这些细胞在其细胞表面展示fcγriii)，从而触发adcc。然而，nk细胞只是先天性免疫系统的一个组成部分，并且活化其他形式的白细胞可用于增强igg触发的adcc响应。抗体的iga类别接合广泛表达于嗜中性粒细胞的fcαri。嗜中性粒细胞包含循环中发现的最高百分比先天效应细胞，并且它们的活化同时触发adcc和adcp。此外，已显示它们可浸润许多实体瘤(gregory和houghton(2011)同上)。然而，由于igg抗体不与fcαri结合，因此大多数基于商业抗体的治疗剂不能活化嗜中性粒细胞。到目前为止，基于iga的治疗性抗体尚未进行商业化开发，因为与igg抗体相比，这类抗体存在明显的缺陷。然而，申请人已经证明，通过对fc区进行修饰，可以产生对fcαri的结合增强的iga抗体。这种高达1000倍的改善的亲和力已在基于细胞的测定中显示出直接转化为效力的提高。因此，当在治疗上使用时，需要更少的抗体，并且该抗体的给药频次可以减少，这对于患者是优选的。[0080]一般而言，如上所述，fc变体包括fc区的ch2结构域和/或ch3结构域中的氨基酸修饰。fc变体相对于亲本fc多肽包含一个或多个氨基酸修饰，其中该一个或多个氨基酸修饰任选地提供一种或多种优化的特性，尽管在一些情况下，这些变体展现出基本相同的生物特性。可以优化的特性包括但不限于，增强或减弱对fcαri的亲和力。在实施例中，将本发明的fc变体修饰为具有对人fcαri的增强的亲和力。在优选实施例中，fc变体的fc区已经亲和成熟，从而在ch2和/或ch3结构域中进行氨基酸修饰以增强fc区对其靶fcαri的结合。此类修饰类型可以改善与靶抗原结合的缔合和/或解离动力学。这种优化特性预期将为fc变体提供增强的人类治疗特性，例如增强的效应子功能和更强的抗癌效力。[0081]如本文所用，相比于亲本fc多肽“更强的亲和力”或“改善的亲和力”或“增强的亲和力”或“更好的亲和力”意指，当在结合测定中变体和亲本多肽的量基本相同时，fc变体与fc受体以相比于亲本fc多肽显著更高的缔合平衡常数(ka)或更低的解离平衡常数(kd)结合。例如，如通过表面等离子体共振测量，相对于亲本fc多肽，具有改善的fc受体结合亲和力的fc变体可以展示出约10倍至约100倍，例如至少约50倍。例如，如通过表面等离子体共振测量，相对于亲本fc多肽，该亲本fc多肽的fc变体可以具有至少约50、约100、约150、约200、约250、约300倍的对人fcαri的增加的亲和力。[0082]给定fc变体的fc受体选择性或特异性将提供不同的特性，这取决于其是否构成抗体、fc融合体或具有偶联融合体或缀合物配偶体的fc变体。[0083]本发明的fc变体可以包含修饰，这些修饰调节与除fcαri之外的fc受体(包括但不限于fcγr和/或fcrn)的相互作用。[0084]本发明的fc变体由于至少一个氨基酸修饰而在氨基酸序列上不同于其亲本igafc区。因此，与亲本相比，本发明的fc变体具有至少一个氨基酸修饰。替代性地，与亲本相比，本发明的fc变体可以具有超过一个氨基酸修饰，例如与亲本相比，具有约一至十个氨基酸修饰，优选地具有约一至五个氨基酸修饰，具有约一至四个氨基酸修饰，具有约一至三个氨基酸修饰，具有约一至两个氨基酸修饰。因此，fc变体的序列和亲本fc多肽的那些序列基本上同源或相同。例如，本文的变体fc变体序列将与亲本fc变体序列具有约80％同源性(包括同一性)，优选地至少约90％同源性，以及最优选地至少约95％、96％、97％、98％和99％同一性。[0085]在一个实施例中，进行一个或多个氨基酸插入、缺失或取代。所有的这些取代可以在iga分子，例如iga1或iga2，特别是iga2中进行。优选地，在一个实施例中，氨基酸取代可以在位于以下的fc区位置处进行：ch2.10、ch2.89、ch2.91、ch2.94、ch2.97、ch2.99、ch3.45、ch3.105、ch3.109、ch3.118和/或ch3.124，其中氨基酸修饰的编号根据c-结构域的imgt编号进行。这些氨基酸取代包括但不限于：a_ch2.10_s、l_ch2.89_i、g_ch2.91_q、g_ch2.91_v、q_ch2.94_e、n_ch2.97_h、n_ch2.97_y、g_ch2.99_w、s_ch3.45_d、m_ch3.105_y、e_ch3.109_d、q_ch3.118_y和/或l_ch3.124_f，同样，作为一个或多个取代、一个或多个插入和一个或多个缺失的任何可能组合，其中氨基酸修饰的编号根据c-结构域的imgt编号进行。在优选实施例中，氨基酸取代或其组合可以包括但不限于：q_ch2.94_e、n_ch2.97y、s_ch3.45_d、m_ch3.105_y、q_ch3.118_y、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y、q_ch2.94_e/s_ch3.45_d、q_ch2.94_e/m_ch3.105_y、n_ch2.97_y/s_ch3.45_d、n_ch2.97_y/m_ch3.105_y、s_ch3.45_d/m_ch3.105_y、m_ch3.105_y/q_ch3.118_y、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/m_ch3.105_y、n_ch2.97_y/s_ch3.45_d/m_ch3.105_y、q_ch2.94_e/s_ch3.45_d/m_ch3.105_y、m_ch3.105_y/q_ch3.118_y/s_ch3.45_d、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/s_ch3.45_d、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/s_ch3.45_d/m_ch3.105_y、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/m_ch3.105_y/q_ch3.118_y、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/s_ch3.45_d/m_ch3.105_y/q_ch3.118_y、a_ch2.10_s、l_ch2.89_i、g_ch2.91_v、n_ch2.97_h、g_ch2.99_w、e_ch3.109_d、l_ch3.124_f、l_ch2.89_i/g_ch2.91_v/q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/g_ch2.99_w，其中氨基酸修饰的编号根据c-结构域的imgt编号进行。[0086]在一个实施例中，氨基酸取代可以在位于以下的fc区位置处进行：ch2.94、ch2.97、ch3.45、ch3.105和ch3.118。在一个实施例中，氨基酸取代可以在位于以下的fc区位置处进行：位于位置ch2.94处的glu、位于位置ch2.97处的tyr、位于位置ch3.45处的asp、位于位置ch3.105处的tyr或位于位置ch3.118处的tyr。在优选实施例中，氨基酸取代可以在以下的fc区进行：q_ch2.94_e、l_ch2.97_y、s_ch3.45_d、m_ch3.105_y、q_ch3.118_y。[0087]在功能上，导致与fcαri结合增强的变体在一些实施例中具有特定用途。fc变体可以包含超过一条蛋白链。也就是说，fc变体可用于单体或寡聚体(包括同源寡聚体或异源寡聚体)的抗体或fc融合体。[0088]fc融合体、抗体融合体以及抗体缀合物[0089]本发明的fc多肽和抗体可以是各种结构，包括但不限于抗体片段、双特异性抗体、微型抗体、结构域抗体、合成抗体(本文有时称为“抗体模拟物”)、嵌合抗体、人源化抗体、抗体融合体(有时称为“抗体缀合物”)以及各自的片段。本发明包括与异源蛋白或多肽(或其片段，优选与至少10个、至少20个、至少30个、至少40个、至少50个、至少60个、至少70个、至少80个、至少90个或至少100个氨基酸的多肽)重组融合或化学缀合(包括共价和非共价缀合两者)以产生融合蛋白的变体fc多肽和抗体(例如，抗体或抗体样分子)或其片段。将蛋白质、多肽或肽与抗体或抗体片段融合或缀合的方法是本领域已知的。参见例如，us5,336,603、us5,622,929、us5,359,046、us5,349,053、us5,447,851和us5,112,946；ep307434和ep367166；wo1996/04388和wo1991/06570；ashkenazi等人,(1991)pnas.usa[美国国家科学院院刊]88:10535-10539；zheng等人,(1995)j.immunol.[免疫学杂志]154:5590-5600；以及vil等人,(1992)pnas.usa[美国国家科学院院刊]89:11337-11341。[0090]可以通过基因改组、基序改组、外显子改组和/或密码子改组(统称为“dna改组”)的技术生成另外的融合蛋白。dna改组可以用来改变本披露分子或其片段(例如，具有更高亲和力和更低解离速率的分子或其片段)的活性。通常，参见us5,605,793、us5,811,238、us5,830,721、us5,834,252和us5,837,458；patten等人,(1997)curr.opinionbiotechnol.[当前生物技术观点]8:724-33；harayama,(1998),trendsbiotechnol.[生物技术趋势]16(2):76-82；hansson等人,(1999)j.mol.biol.[分子生物学杂志]287:265-76；以及lorenzo和blasco,1998,biotechniques[生物技术]24(2):308-313(这些专利和出版物中的每一篇均通过引用以其全文特此并入)。可以通过在重组之前借助易错pcr、随机核苷酸插入或其他方法进行随机诱变来改变本文所述的分子或其片段。编码本发明的分子的片段的多核苷酸可以与一个或多个异源分子的一个或多个组分、基序、区段、部分、结构域、片段等重组。[0091]此外，本披露的变体fc多肽和抗体可以与标记序列(如肽)融合以促进纯化。在优选实施例中，标记氨基酸序列是六组氨酸肽(seqidno:81)，例如pqe载体中提供的标签(凯杰公司(qiagen,inc.)，伊顿大街(etonavenue)9259号，加利福尼亚州查茨沃思(chatsworth)，91311)等，其中许多是商购可得的。如描述于gentz等人,(1989)pnas.usa[美国国家科学院院刊]86:821-824中，例如，六组氨酸(seqidno:81)为融合蛋白纯化提供方便。可用于纯化的其他肽标签包括但不限于对应于源自流感血凝素蛋白的表位(wilson等人,(1984)cell[细胞]37:767)的血凝素(“ha”)标签和“旗帜(flag)”标签。[0092]在其他实施例中，本披露的变体fc多肽和抗体与诊断剂或可检测剂缀合。这种分子可用于监测或预后疾病或障碍的发作、发展、进展和/或严重程度，其作为临床试验程序(如确定特定功效的效果)的一部分。此种诊断和检测可以通过将分子与可检测物质偶联来完成，所述可检测物质包括但不限于各种酶，诸如但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；辅基，例如但不限于链霉亲和素/生物素和亲和素/生物素；荧光材料，例如但不限于伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料，例如但不限于鲁米诺；生物发光材料，例如但不限于荧光素酶、荧光素和水母素；放射性物质，例如但不限于碘(131i、125i、123i和121i)、碳(14c)、硫(35s)、氚(3h)、铟(115in、113in、112in和111in)、锝(99tc)、铊(201ti)、镓(68ga、67ga)、钯(103pd)、钼(99mo)、氙(133xe)、氟(18f)、153sm、177lu、159gd、149pm、140la、175yb、166ho、90y、47sc、186re、188re、142pr、105rh、97ru、68ge、57co、65zn、85sr、32p、153gd、169yb、51cr、54mn、75se、113sn和117tin；以及使用各种正电子发射断层扫描的正电子发射金属和非放射性顺磁金属离子。[0093]本技术还涵盖与治疗性部分缀合的本披露的变体fc多肽和抗体的用途。例如，治疗性部分可以是细胞毒素，例如细胞抑制剂或杀细胞剂、治疗剂或放射性金属离子(例如α-发射体)。细胞毒素或细胞毒性剂包括对细胞有害的任何药剂。[0094]此外，变体fc多肽和抗体可以与调节给定生物反应的治疗部分或药物部分缀合。例如，药物部分可以是具有所需生物活性的蛋白质、肽或多肽。这种蛋白质可包括例如毒素，如相思豆毒素、蓖麻毒素a、假单胞菌外毒素、霍乱毒素或白喉毒素；如下蛋白质，诸如肿瘤坏死因子、α-干扰素、β-干扰素、神经生长因子、血小板衍生生长因子、组织纤溶酶原活化物、凋亡剂、抗血管生成剂；或生物反应调节剂如淋巴因子。[0095]关于细胞毒素类型、接头和使治疗剂与工程改造的免疫球蛋白缀合的方法的进一步讨论，还请参见saito等人,(2003)advdrugdeliv.rev.[先进药物递送评论]55:199-215；trail等人,(2003)cancerimmunol.immunother.[癌症免疫学和免疫治疗]52:328-337；payne(2003)cancercell[癌细胞]3:207-212；allen(2002)nat.rev.cancer[自然综述-癌症]2:750-763；pastan和kreitman(2002)curr.opin.investig.drugs[当前研究药物观点],3:1089-1091；senter和springer,(2001)adv.drugdeliv.rev.[先进药物递送评论]53:247-264。[0096]本披露的变体fc多肽和抗体也可以与放射性同位素缀合以产生细胞毒性放射药物，也称作放射免疫缀合物。可以与工程改造的免疫球蛋白缀合的用于诊断或治疗性用途的放射性同位素的实例包括但不限于碘l31、铟111、钇90和镥177。本领域中建立了用于制备放射免疫缀合物的方法。参见，例如，denardo等人,(1998)clincancerres.[临床癌症研究]4(10):2483-90；peterson等人,(1999)bioconjug.chem.[生物缀合化学]10(4):553-7；和zimmerman等人,(1999)nucl.med.biol.[核医学和生物学]26(8):943-50，每一篇文献均通过引用以其全文并入。[0097]用于将治疗性部分与变体fc多肽(如抗体或抗体样分子)缀合的技术是已知的，参见例如，arnon等人,“monoclonalantibodiesforimmunotargetingofdrugsincancertherapy[癌症疗法中用于药物免疫靶向的单克隆抗体]”,在monoclonalantibodiesandcancertherapy[单克隆抗体和癌症疗法],reisfeld等人(编辑),第243-56页(alanr.liss,inc.[艾伦丽思出版公司]1985)中；hellstrom等人,“antibodiesfordrugdelivery[用于药物递送的抗体]”,在controlleddrugdelivery[药物控制递送](第2版),robinson等人(编辑),第623-53页(marceldekker,inc.[马塞尔德克尔出版公司]1987)中；thorpe,“antibodycarriersofcytotoxicagentsincancertherapy:areview[癌症疗法中细胞毒性剂的抗体载剂：综述]”,在monoclonalantibodies[单克隆抗体]84:biologicalandclinicalapplications[生物和临床应用]、pinchera等人(编辑),第475-506页(1985)中；“analysis,results,andfutureprospectiveofthetherapeuticuseofradiolabeledantibodyincancertherapy[放射标记的抗体在癌症疗法中的治疗用途的分析、结果和未来前景]”,在monoclonalantibodiesforcancerdetectionandtherapy[用于癌症检测和疗法的单克隆抗体],baldwin等人(编辑),第303-16页(academicpress[学术出版社]1985)中以及thorpe等人,(1982)immunol.rev.[免疫学综述]62:119-58。[0098]变体fc多肽和抗体也可以与固体支持物附接，这些支持物特别适用于免疫测定或靶抗原的纯化。这种固体支持物包括但不限于玻璃、纤维素、聚丙烯酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。[0099]本发明的fc变体可以包含一种或多种修饰，该一种或多种修饰提供fc变体的降低的或增强的内化。在一个实施例中，可以利用本发明的fc变体或将其与另外的修饰组合以减少通过与一个或多个fc配体相互作用而发生的fc变体的细胞内化。这种特性可能预期增强效应子功能，并且潜在地降低本发明的fc变体的免疫原性。替代性地，可以直接利用本发明的fc变体或将其与另外的修饰组合以增强通过与一个或多个fc配体相互作用而发生的fc变体的细胞内化。[0100]在优选实施例中，进行修饰以改善本发明的fc变体的生物物理特性，包括但不限于稳定性、溶解度以及寡聚状态。修饰可以包括例如，在fc变体中提供更有利的分子内相互作用(如提供更高的稳定性)的取代，或用极性氨基酸取代暴露的非极性氨基酸以获得更高的溶解度。许多优化目标和方法描述于us10/379,392(通过引用并入本文)中，可用于工程改造另外的修饰以进一步优化本发明的fc变体。本发明的fc变体还可与减少寡聚状态或大小的另外的修饰组合，使得肿瘤渗透增强，或体内清除率根据需要增加。对本发明的fc变体的其他修饰包括能够特异性形成同二聚体或同多聚体分子的修饰。此类修饰包括但不限于工程改造的二硫化物，以及可以提供产生共价同二聚体或同多聚体机制的化学修饰或聚集方法。例如，此类分子的工程改造方法和组成描述于kan等人,(2001)j.lmmunol.[免疫学杂志],166:1320-1326；stevenson等人,(2002)recentresultscancerres.[癌症研究最新结果]159:104-12；us5,681,566；caron等人,(1992),j.exp.med.[实验医学杂志]176:1191-1195，以及shapes(1992)j.lmmunol.[免疫学杂志]148(9):2918-22中，所有这些文献均通过引用并入本文。对本发明的变体的另外的修饰包括能够特异性形成异二聚体、异多聚体、双功能和/或多功能分子的那些修饰。此类修饰包括但不限于，ch3结构域中的一种或多种氨基酸取代，其中这些取代减少同二聚体的形成并且增加异二聚体的形成。例如，此类分子的工程改造方法和组成描述于atwell等人,1997,j.mol.bioi.[分子生物学杂志]270(1):26-35，以及carter等人,2001,j.lmmunol.methods[免疫学方法杂志]248:7-15，这两篇文献均通过引用并入本文。另外的修饰包括在铰链和ch3结构域中的修饰，其中这些修饰减少形成二聚体的倾向。[0101]制备fc变体多肽[0102]包含如本文披露的变体fc多肽的抗体及其片段，可以通过多种技术产生，这些技术包括常规的单克隆抗体方法，例如kohler和milstein,(1975)nature[自然]256:495的标准体细胞杂交技术。[0103]用于制备杂交瘤的动物系统是鼠系统。小鼠中的杂交瘤生产是已知的程序。免疫方案和分离免疫脾细胞用于融合的技术是本领域已知的。融合配偶体(例如鼠骨髓瘤细胞)和融合程序也是已知的。[0104]可以基于如上所述制备的鼠单克隆抗体的序列来制备嵌合抗体或人源化抗体。编码重链和轻链免疫球蛋白的dna可以从目的鼠杂交瘤中获得，并使用标准分子生物学技术工程改造为含有非鼠(例如人)免疫球蛋白序列。例如，为了产生嵌合抗体，可以使用本领域已知的方法将鼠可变区与人恒定区连接(参见例如cabilly等人的us4,816,567)。为产生人源化抗体，可以使用本领域已知的方法将鼠cdr区插入人框架中。参见例如，winter的us5,225,539和us5,530,101；us5,585,089；queen等人的us5,693,762和us6,180,370。[0105]在某个实施例中，包含如本文描述的fc变体的抗体或其片段是人单克隆抗体。可以使用携带部分人免疫系统而不是小鼠系统的转基因或转染色体小鼠产生此类人单克隆抗体。这些转基因和转染色体小鼠包括在本文中分别被称为humab小鼠和km小鼠的小鼠，并且在本文中统称为“人ig小鼠”。[0106]humab小鼠(梅达瑞克斯公司(medarex,inc.))含有编码未重排的人重链(μ和γ)和κ轻链免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白基因小基因座(miniloci)，以及使内源μ和κ链基因座失活的靶向突变(参见例如，lonberg等人,(1994)nature[自然]368(6474):856-859)。因此，小鼠表现出小鼠igm或k的表达降低，并且响应于免疫，引入的人重链和轻链转基因经历类别转换和体细胞突变以产生高亲和力人iggk单克隆(lonberg等人,(1994)同上；在lonberg,(1994)handbookofexperimentalpharmacology[实验药理学手册]113:49-101；lonberg和huszar,(1995)intern.rev.immunol.[国际免疫学评论]13:65-93，以及harding和lonberg,(1995)ann.n.y.acad.sci.[纽约科学学术年报]764:536-546中综述)。humab小鼠的制备和用途以及由这种小鼠携带的基因组修饰进一步描述于以下文献中：taylor等人,1992nucleicacidsresearch[核酸研究]20:6287-6295；chen等人,(1993)internationalimmunology[国际免疫学]5:647-656；tuaillon等人,(1993)pnasusa[美国国家科学院院刊]94:3720-3724；choi等人,(1993)naturegenetics[自然遗传学]4:117-123；chen等人,(1993)emboj.[欧洲分子生物学学会杂志]12:821-830；tuaillon等人,(1994)j.immunol.[免疫学杂志]152:2912-2920；taylor等人,(1994)int.immun.[国际免疫学],579-591；以及fishwild等人,(1996)naturebiotech.[自然生物技术]14:845-851，所有这些文献的内容均通过引用以其全文特别地特此并入。另外参见us5,545,806；us5,569,825；us5,625,126；us5,633,425；us5,789,650；us5,877,397；us5,661,016；us5,814,318；us5,874,299；以及us5,770,429；全部属于lonberg和kay；surani等人的us5,545,807；wo92/103918、wo93/12227、wo94/25585、wo97113852、wo98/24884以及wo99/45962，全部属于lonberg和kay；以及korman等人的wo01/14424。[0107]在另一个实施例中，人抗体可以使用在转基因和转染色体上携带人免疫球蛋白序列的小鼠，如携带人重链转基因和人轻链转染色体的小鼠中产生。此类小鼠，在本文中被称为“km小鼠”，在wo2002/43478(ishida等人)中有详细描述。[0108]仍进一步，表达人免疫球蛋白基因的替代性转基因动物系统可在本领域中获得并且可以用于产生人抗体。例如，可以使用被称为xenomouse(安根尼克斯公司(abgenix,inc.))的替代性转基因系统。此类小鼠描述于例如，us5,939,598；us6,075,181；us6,114,598；us6,150,584和us6,162,963(kucherlapati等人)。[0109]此外，表达人免疫球蛋白基因的替代性转染色体动物系统是本领域可获得的，并且可用于产生人抗体。例如，可以使用携带人重链转染色体和人轻链转染色体的被称为“tc小鼠”的小鼠；此类小鼠描述于tomizuka等人,(2000)pnasusa[美国国家科学院院刊]97:722-727中。此外，本领域中已经描述了携带人重链和轻链转染色体的牛(kuroiwa等人,(2002)naturebiotechnology[自然生物技术]20:889-894)，并且这些牛可以用于产生可用于本技术的人抗体。[0110]还可以使用针对筛选人免疫球蛋白基因文库的噬菌体展示方法来制备人单克隆抗体或其片段。用于分离人抗体的这种噬菌体展示方法在本领域中建立或在以下实例中描述。参见例如：us5,223,409；us5,403,484；和us5,571,698(ladner等人)；us5,427,908和us5,580,717(dower等人)；us5,969,108和us6,172,197(mccafferty等人)；以及us5,885,793；us6,521,404；us6,544,731；us6,555,313；us6,582,915和us6,593,081(griffiths等人)。[0111]可用于本披露的人单克隆抗体或其片段也可以使用scid小鼠制备，人免疫细胞已经重建至该scid小鼠中，使得免疫后可以产生人抗体应答。此类小鼠描述于例如，us5,476,996和us5,698,767(wilson等人)。[0112]可以进一步修饰根据下文所述的方法制备的人单克隆抗体或其片段，以使vh、vl、ch1、cl、ch2、ch3结构域内的氨基酸残基突变，从而改善抗体或其片段与目的受体的一种或多种结合特性(例如，亲和力)，这一过程被称为“亲和力成熟”。可以进行定点诱变或pcr介导的诱变以引入一个或多个突变，并且可以在如本文所述且在实例中提供的体外或体内测定中评估对受体结合或其他目的功能特性的影响。因此，在一个实施例中，本披露涉及亲和力成熟的抗体或其片段，特别是亲和力成熟的fc区。突变可以是氨基酸取代、添加或缺失。例如，本披露的fc变体是亲和力成熟的fc区，其中ch2结构域和/或ch3结构域内的不超过一个、两个、三个、四个或五个残基已经被修饰。所有的这些取代可以在iga分子，例如iga1或iga2，特别是iga2中进行。在优选实施例中，氨基酸取代可以在位于以下的fc区位置处进行：ch2.10、ch2.89、ch2.91、ch2.94、ch2.97、ch2.99、ch3.45、ch3.105、ch3.109、ch3.118和/或ch3.124，其中氨基酸修饰的编号根据c-结构域的imgt编号进行。这些氨基酸取代包括但不限于：a_ch2.10_s、l_ch2.89_i、g_ch2.91_q、g_ch2.91_v、q_ch2.94_e、n_ch2.97_h、n_ch2.97_y、g_ch2.99_w、s_ch3.45_d、m_ch3.105_y、e_ch3.109_d、q_ch3.118_y和/或l_ch3.124_f，同样，作为一个或多个取代、一个或多个插入和一个或多个缺失的任何可能组合，其中氨基酸修饰的编号根据c-结构域的imgt编号进行。在优选实施例中，在亲和力成熟的本发明的fc变体中的氨基酸取代或其组合可以包括但不限于：q_ch2.94_e、n_ch2.97y、s_ch3.45_d、m_ch3.105_y、q_ch3.118_y、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y、q_ch2.94_e/s_ch3.45_d、q_ch2.94_e/m_ch3.105_y、n_ch2.97_y/s_ch3.45_d、n_ch2.97_y/m_ch3.105_y、s_ch3.45_d/m_ch3.105_y、m_ch3.105_y/q_ch3.118_y、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/m_ch3.105_y、n_ch2.97_y/s_ch3.45_d/m_ch3.105_y、q_ch2.94_e/s_ch3.45_d/m_ch3.105_y、m_ch3.105_y/q_ch3.118_y/s_ch3.45_d、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/s_ch3.45_d、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/s_ch3.45_d/m_ch3.105_y、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/m_ch3.105_y/q_ch3.118_y、q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/s_ch3.45_d/m_ch3.105_y/q_ch3.118_y、a_ch2.10_s、l_ch2.89_i、g_ch2.91_v、n_ch2.97_h、g_ch2.99_w、e_ch3.109_d、l_ch3.124_f、l_ch2.89_i/g_ch2.91_v/q_ch2.94_e/n_ch2.97_y/g_ch2.99_w，其中氨基酸修饰的编号根据c-结构域的imgt编号进行。[0113]核酸和表达系统[0114]本发明还涵盖编码本文所述的fc变体的多肽链的核酸。本披露的核酸分子包括单链和双链形式的dna和rna，以及相应的互补序列。本披露的核酸分子包括全长基因或cdna分子以及其片段的组合。本披露的核酸衍生自人来源，但可以包括衍生自非人物种的核酸。[0115]“分离的核酸”是在从天然存在的来源分离的核酸的情况下，与分离了核酸的生物体的基因组中存在的相邻遗传序列分开的核酸。在以酶促方式从模板或以化学方式合成的核酸(如pcr产物、cdna分子、或寡核苷酸)的情况下，应理解，由此类过程产生的核酸是分离的核酸。分离的核酸分子是指单独片段形式或作为较大核酸构建体的组分的核酸分子。在一个优选实施例中，核酸基本上不含污染性的内源材料。核酸分子优选地衍生自以基本上纯的形式和以使得能够通过标准生物化学方法(如sambrook等人,molecularcloning:alaboratorymanual[分子克隆：实验室手册],第2版,纽约冷泉港的冷泉港实验室(coldspringharborlaboratory,coldspringharbor,ny)(1989)中概述的那些)鉴定、操纵和回收其组分核苷酸序列的量或浓度分离至少一次的dna或rna。此类序列优选以不被典型地存在于真核基因中的内部非翻译序列或内含子中断的可读框的形式提供和/或构建。非翻译dna的序列可以存在于可读框的5'或3'，其中该序列不干扰编码区的操纵或表达。[0116]变体序列例如，变体序列文库通过以下方式制备：使用盒或pcr诱变或本领域已知的其他技术进行编码多肽的dna中的核苷酸的位点特异性诱变，以产生编码变体的dna，然后如本文所概述的那样在细胞培养物中表达重组dna。[0117]如“优化的核苷酸序列”意指核苷酸序列已被改变为使用在产生细胞(例如中国仓鼠卵巢细胞(cho))中优选的密码子编码氨基酸序列。将优化的核苷酸序列工程改造以完全保留最初由起始核苷酸序列编码的氨基酸序列，起始核苷酸序列也称为“亲本”序列。[0118]本披露还提供了包含至少一种如上所述的多核苷酸的呈质粒、表达载体、转录或表达盒形式的表达系统和构建体。此外，本披露提供了包含此类表达系统或构建体的宿主细胞。[0119]在一个实施例中，本发明提供了制备包含如本文所述的变体fc区的抗体或其片段的方法，该方法包括以下步骤：(a)培养包含编码变体重链和轻链多肽的核酸的宿主细胞，其中培养的宿主细胞表达这些变体多肽；以及(b)从宿主细胞培养物中回收抗体或其片段。[0120]用于本披露的表达载体可由起始载体(如可商购获得的载体)构建。在构建载体并且将编码工程改造的免疫球蛋白的多肽链的核酸分子插入载体的恰当位点之后，可将完成的载体插入合适的宿主细胞中用于扩增和/或多肽表达。将表达载体转化至所选宿主细胞可通过已知方法完成，包括转染、感染、磷酸钙共沉淀、电穿孔、显微注射、脂质转染、deae-葡聚糖介导的转染、或其他已知技术。所选方法将部分地取决于有待使用的宿主细胞类型的功能。这些方法和其他合适的方法是技术人员已知的，并且阐述于例如sambrook等人,2001,同上。[0121]典型地，宿主细胞中所用的表达载体将含有用于质粒维持和用于克隆和表达外源核苷酸序列的序列。在某些实施例中，此类序列，统称为“旁侧序列”，通常将包括一个或多个以下核苷酸序列：启动子、一个或多个增强子序列、复制起点、转录终止序列、含有供体和受体剪接位点的完整内含子序列、编码用于多肽分泌的前导序列的序列、核糖体结合位点、多腺苷酸化序列、用于插入编码有待表达的多肽的核酸的多接头区、以及选择标记元件。[0122]当在适当条件下培养时，宿主细胞可以用于表达fc变体，这些fc变体随后可从培养基中收集(如果宿主细胞将其分泌到培养基中)或直接从产生它的宿主细胞中收集(如果不是分泌性的)。适当宿主细胞的选择将取决于各种因素，如期望的表达水平、活性(如糖基化或磷酸化)期望或必需的多肽修饰以及折叠成生物活性分子的便宜性。宿主细胞可以是真核或原核细胞。[0123]可用作表达宿主的哺乳动物细胞系是本领域已知的并且包括但不限于可从美国典型培养物保藏中心(atcc)获得的永生化细胞系，并且本领域已知的表达系统中使用的任何细胞系可以用于制备包含本披露的工程改造的免疫球蛋白的多肽。一般而言，用包含编码期望的工程改造免疫球蛋白的dna的重组表达载体转化宿主细胞。可采用的宿主细胞有原核生物、酵母或高等真核细胞。原核生物包括革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体，例如大肠杆菌(e.coli)或杆菌(bacilli)。高等真核细胞包括昆虫细胞和已建立的哺乳动物细胞系。合适的哺乳动物宿主细胞系的示例包括cos-7细胞、l细胞、cl27细胞、3t3细胞、中国仓鼠卵巢(cho)细胞、或在无血清培养基中生长的它们的衍生物和相关细胞系、hela细胞、bhk细胞系、cviiebna细胞系、人胚胎肾细胞(如293、293ebna或msr293)、人表皮a431细胞、人colo205细胞、其他转化的灵长类动物细胞系、正常二倍体细胞、源自原代组织的体外培养的细胞株、原代外植体、hl-60、u937、hak或jurkat细胞。任选地，当期望在各种信号转导或报告蛋白测定中使用多肽时，哺乳动物细胞系(如hepg2/3b、kb、nih3t3或s49)可以用于多肽的表达。替代性地，可以在低等真核生物(如酵母)或在原核生物(如细菌)中产生多肽。合适的酵母包括酿酒酵母、裂殖酵母、克鲁维酵母属菌株、假丝酵母属、或能够表达异源多肽的任何酵母菌株。合适的细菌菌株包括大肠杆菌、枯草芽孢杆菌(b.subtilis)、鼠伤寒沙门氏菌(s.typhimurium)、或能够表达异源多肽的任何细菌菌株。如果工程改造的免疫球蛋白在酵母或细菌中制备，则可能期望修饰其中产生的产物，例如通过适当位点的磷酸化或糖基化，以便获得功能性产物。此类共价附接可以使用已知的化学或酶促方法实现。[0124]在另外的实施例中，本发明的fc变体包含去除蛋白水解降解位点的修饰。这些可以包括例如，降低生产产率的蛋白酶位点，以及体内降解施用蛋白的蛋白酶位点。[0125]在优选实施例中，fc变体在表达后进行纯化或分离。可以用本领域技术人员已知的多种方法分离或纯化蛋白。标准纯化方法包括色谱技术，包括离子交换、疏水相互作用、亲和、定量或凝胶过滤以及反相技术，在大气压或高压下使用系统(如fplc和hplc)进行。纯化方法还包括电泳、免疫、沉淀、透析和色谱聚焦技术。超滤和渗滤技术以及蛋白浓缩也很有用。如本领域已知的，多种天然蛋白质结合fc和抗体，并且这些蛋白质可以在本发明中用于纯化fc变体。例如，细菌蛋白a和g与fc区结合。同样，细菌蛋白l与一些抗体的fab区结合，当然也与抗体的靶抗原结合。纯化通常可以通过特定的融合配偶体实现。例如，如果使用gst融合，则可以使用谷胱甘肽树脂来纯化fc变体，如果使用his标签，则可以使用ni+2亲和色谱，或者如果使用旗帜标签，则可以使用固定化抗旗帜抗体。有关合适的纯化技术的一般指导，参见，例如，通过引用完全并入的proteinpurification:principlesandpractice[蛋白质纯化：原理与实践],第3版,scopes,纽约施普林格出版社(springer-verlag,ny),1994，通过引用完全并入。[0126]药物组合物和给药[0127]本文提供了包含本披露的fc变体的药物组合物。fc变体能以抗体形式掺入，例如作为单特异性、双特异性或多特异性抗体，与一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载剂组合。[0128]为了制备包含本披露的fc变体的药物或无菌组合物，将分子与药学上可接受的载剂或赋形剂混合。[0129]术语“药学上可接受”意指由联邦或州政府的监管机构批准或者列于美国药典(u.s.pharmacopeia)或其他普遍认可的药典中适用于动物并且更特别地适用于人。术语“药物组合物”是指至少一种活性成分(例如，包含本披露的fc变体的抗体)和至少一种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载剂的混合物。“药物”是指用于医疗的物质。[0130]治疗剂和诊断剂的药物组合物可以通过与生理学上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂以例如冻干粉末、浆液、水性溶液、洗剂或悬浮液的形式混合来制备(参见例如，hardman等人.(2001)goodmanandgilman'sthepharmacologicalbasisoftherapeutics[goodman和gilman的治疗剂的药理学基础],mcgraw-hill[麦格劳-希尔集团],纽约州纽约市；gennaro(2000)remington:thescienceandpracticeofpharmacy[雷明顿：药学科学与实践],lippincott,williamsandwilkins[利平科特、威廉姆斯和威尔金斯出版社],纽约州纽约市；avis等人(编辑)(1993)pharmaceuticaldosageforms:generalmedications[药物剂型：一般药物],marceldekker[马塞尔德克尔出版公司],纽约州；lieberman等人(编辑)(1990)pharmaceuticaldosageforms:tablets[药物剂型：片剂],marceldekker[马塞尔德克尔出版公司],纽约州；lieberman等人(编辑)(1990)pharmaceuticaldosageforms:dispersesystems[药物剂型：分散系统],marceldekker[马塞尔德克尔出版公司],纽约州；weiner和kotkoskie(2000)excipienttoxicityandsafety[赋形剂毒性和安全性],marceldekker,inc.[马塞尔德克尔出版公司],纽约州纽约市)。[0131]为治疗剂选择施用方案取决于若干种因素，包括实体的血清或组织周转速率、症状水平、实体的免疫原性、和生物基质中的靶细胞的可及性。在某些实施例中，施用方案使递送至患者的与可接受水平的副作用一致的治疗剂的量达最大。因此，递送的生物制品的量部分地取决于特定的实体和正在治疗的病症的严重程度。选择适当剂量的抗体、细胞因子、和小分子的指南是可获得的(参见，例如，wawrzynczak(1996)antibodytherapy[抗体疗法],biosscientificpub.ltd(bios科学出版社有限公司),牛津郡,英国；kresina(编辑),(1991)monoclonalantibodies,cytokinesandarthritis[单克隆抗体、细胞因子和关节炎],marceldekker[马塞尔德克尔出版公司],纽约州纽约市；bach(编辑),(1993)monoclonalantibodiesandpeptidetherapyinautoimmunediseases[自身免疫疾病中的单克隆抗体和肽疗法],marceldekker[马塞尔德克尔出版公司],纽约州纽约市；baert等人,(2003)newengl.j.med.[新英格兰医学杂志]348:601-608；milgrom等人,(1999)newengl.j.med.[新英格兰医学杂志]341:1966-1973；slamon等人,(2001)newengl.j.med.[新英格兰医学杂志]344:783-792；beniaminovitz等人,(2000)newengl.j.med.[新英格兰医学杂志]342:613-619；ghosh等人,(2003),newengl.j.med.[新英格兰医学杂志]348:24-32；lipsky等人,(2000)newengl.j.med.[新英格兰医学杂志]343:1594-1602)。[0132]由临床医生，例如，使用本领域已知或疑似影响治疗或预计影响治疗的参数或因素确定适当的剂量。通常，剂量始于略小于最佳剂量的量并此后将其以小增量增加，直至相对于任何不利副作用，实现所希望的或最佳的效果。重要的诊断测量值包括症状(例如炎症)的那些测量值或产生的炎性细胞因子的水平。[0133]可以改变本披露的药物组合物中活性成分的实际剂量水平，以便获得一定量的活性成分，该活性成分的量有效地实现对于特定的患者、组合物和施用方式的期望的治疗应答，而对该患者没有毒性。所选的剂量水平取决于多种药代动力学因素，包括所用的本披露特定组合物或其酯、盐或酰胺的活性，施用途径，施用时间，正在使用的特定化合物的排泄速率，治疗的持续时间，与所用特定组合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料，正在治疗的患者的年龄、性别、体重、病症、总体健康和既往病史，以及医学领域中已知的类似因素。[0134]包含本披露的fc变体的药物组合物可以通过连续输注，或以例如一天、一周的间隔或每周1-7次按剂量提供。可通过静脉内、皮下、局部、口、鼻、直肠、肌内、脑内、或通过吸入来提供剂量。[0135]以摩尔/kg体重计，包含本披露的fc变体的治疗剂的所需剂量与抗体或多肽的剂量大致相同。向受试者进行施用的次数可以是至少1次、2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次、10次、11次或12次或更多次。[0136]对于包含本披露的fc变体的治疗剂，施用于患者的剂量可以是约0.0001mg/kg至约100mg/kg患者体重。在施用一系列剂量的情况下，这些剂量可以例如大约每天、大约每周、大约每月施用一次。这些剂量可以例如继续施用，直到疾病进展，出现不良事件或由医生确定的其他时间为止。[0137]特定患者的有效量可以根据如以下的因素而改变：待治疗的病症，患者的总体健康状况，施用的方法、途径和剂量，和副作用的严重程度(参见，例如，maynard等人,(1996)ahandbookofsopsforgoodclinicalpractice[用于良好临床实践的sop手册],interpharmpress[国际药物出版社],佛罗里达州波卡拉顿(bocaraton,fla.)；dent(2001)goodlaboratoryandgoodclinicalpractice[良好实验和良好临床实践],urchpubl.[厄奇出版社],伦敦,英国)。[0138]必要时，可以将包含本披露的fc变体的治疗剂掺入包括增溶剂和局部麻醉剂如利多卡因(lidocaine)的组合物中以减轻注射部位的疼痛。此外，也可以采用肺部施用，例如通过使用吸入器或雾化器以及具有雾化剂的配制品。参见例如，us6,019,968、us5,985,320、us5,985,309、us5,934,272、us5,874,064、us5,855,913、us5,290,540和us4,880,078；以及wo92/19244、wo97/32572、wo97/44013、wo98/31346、和wo99/66903，每一篇文献均通过引用以其全文并入本文。[0139]包含本披露的fc变体的治疗剂还可以通过一种或多种施用途径使用在本领域中已知的多种方法中的一种或多种来施用。如本领域技术人员将理解的，施用途经和/或方式将根据所希望的结果而变化。抗体的所选施用途径包括静脉内、肌肉内、皮内、腹膜内、皮下、经脊髓或其他肠胃外施用途径，例如通过注射或输注。肠胃外施用可以代表除经肠和局部施用之外的施用模式，通常通过注射，并且包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、被膜下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注。替代性地，本披露的组合物可以通过非肠胃外途径施用，如局部、经表皮或经粘膜施用途径，例如鼻内、口服、经阴道、经直肠、舌下或局部。[0140]包含本披露的fc变体的治疗剂可以使用例如注射装置、注射笔、小瓶和注射筒、预填充注射筒、自动注射器、输注泵、贴片泵、输注袋和针等，通过上述途径中的任一种来施用。如果包含本披露的fc变体的治疗剂以控制释放或持续释放系统施用，则可使用泵来实现控制释放或持续释放(参见langer,同上；sefton(1987)crccrit.refbiomed.eng.[crc在生物医学工程中的参考评论]14:20；buchwald等人,(1980)surgery[外科手术]88:507；saudek等人,(1989)n.engl.j.med.[新英格兰医学杂志]321:574)。聚合物材料可用于实现本披露治疗剂的控制释放或持续释放(参见，例如，medicalapplicationsofcontrolledrelease[控制释放药物的医学应用],langer和wise(编辑),crc出版社,佛罗里达州波卡拉顿(bocaraton,fla.)(1974)；controlleddrugbioavailability,drugproductdesignandperformance[受控的药物生物利用率、药物产物设计以及性能],smolen和ball(编辑),wiley[威利出版公司],纽约(1984)；ranger和peppas(1983)j.macromol.sci.rev.macromol.chem.[高分子科学杂志-高分子化学评论]23:61；还参见levy等人,(1985)science[科学]228:190；during等人,(1989)ann.neurol.[神经病学年鉴]25:351；howard等人,(1989)j.neurosurg.[神经外科杂志],7(1):105；us5,679,377；us5,916,597；us5,912,015；us5,989,463；us5,128,326；wo99/15154；以及wo99/20253。用于持续释放配制品中的聚合物的实例包括但不限于聚(甲基丙烯酸2-羟乙酯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙交酯(plg)、聚酸酐、聚(n-乙烯基吡咯烷酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯酰胺、聚(乙二醇)、聚丙交酯(pla)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(plga)以及聚原酸酯。在一个实施例中，用于持续释放配制品的聚合物是惰性的，不含可浸出的杂质，在储存时稳定，无菌并且可生物降解。可以将控制释放系统或持续释放系统放置在预防性或治疗性靶附近，因此仅要求全身性剂量的一部分(参见例如，goodson,在medicalapplicationsofcontrolledrelease[控制释放的医学应用],同上,第2卷,第115-138页,1984)。[0141]在langer(science[科学](1990)249:1527-1533)的综述中讨论了控制释放系统。可以使用本领域技术人员已知的任何技术来产生包含本技术的一种或多种fc变体的持续释放配制品。参见例如，us4,526,938、wo91/05548、wo96/20698，ning等人,(1996)radiotherapy&oncology[放射疗法与肿瘤学]39:179-189；song等人,(1995)pdajournalofpharmsci&tech.[pda药物科学与技术杂志],50:372-397；cleek等人,(1997)pro.int'l.symp.control.rel.bioact.mater.[控制释放生物活性材料国际研讨会学报]24:853-854；lam等人,(1997)proc.int'l.symp.controlrel.bioact.mater.[控制释放生物活性材料国际研讨会学报],24:759-760，其各自通过引用以其全文并入本文。[0142]如果局部施用包含本披露的fc变体的药物组合物，则可以将其以油膏剂、乳膏剂、透皮贴片、洗剂、凝胶、香波、喷雾剂、气溶胶、溶液、乳剂的形式或本领域技术人员已知的其他形式配制。参见例如，remington'spharmaceuticalsciencesandintroductiontopharmaceuticaldosageforms[雷明顿制药科学和药物剂型简介],第19版,马克出版公司(mackpub.co.),伊斯顿,宾夕法尼亚州(1995)。对于不可喷雾的局部剂型，通常使用粘性至半固体或固体形式，其包含载剂或一种或多种与局部施用相容并且具有动态粘度的赋形剂，在一些情况下，其具有大于水的动态粘度。合适的配制品包括而不限于溶液、悬浮液、乳剂、乳膏剂、油膏剂、粉末、搽剂、药膏剂等，如果需要，对它们进行灭菌或与影响各种特性诸如像渗透压的助剂(例如，防腐剂、稳定剂、润湿剂、缓冲剂或盐)混合。其他合适的局部剂型包括可喷雾气溶胶制剂，其中在一些情况下将活性成分与固体或液体惰性载剂组合包装在具有加压的挥发性物质(例如，气体推进剂，如氟利昂(freon))的混合物中或挤瓶中。如果希望，还可以将保湿剂或湿润剂添加到药物组合物和剂型中。此类其他成分的实例是本领域已知的。[0143]如果鼻内施用包含本披露的fc变体的药物组合物，则可以将其以气溶胶形式、喷雾剂、雾化剂或以滴剂形式配制。特别地，用于根据本披露使用的预防剂或治疗剂可以使用一种合适的推进剂(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体)以从加压式包装或喷雾器的气溶胶喷雾展现的形式方便地进行递送。在加压的气溶胶的情况下，可通过提供阀门来确定剂量单位，以递送经计量的量。可以配制用于吸入器或吹入器中的胶囊剂和套筒剂(cartridge)(由例如明胶组成)，其含有化合物及合适粉剂基料(powderbase)(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。[0144]也可以向患者循环施用包含本披露的fc变体的药物组合物。[0145]在某些实施例中，可以配制包含本披露的fc变体的药物组合物以确保适当的体内分布。例如，血脑屏障(bbb)排除许多高度亲水性化合物。为确保本披露的治疗性化合物穿过bbb(如果希望)，可以将它们以例如脂质体配制。对于制造脂质体的方法，参见例如，us4,522,811；us5,374,548；和us5,399,331。脂质体可以包含一个或多个部分，该一个或多个部分被选择性运输至特定细胞或器官中，从而增强靶向药物递送(参见例如，ranade(1989)j.clin.pharmacol.[临床药理学杂志],29:685)。示例性的靶向部分包括叶酸或生物素(参见例如，low等人的us5,416,016)；甘露糖苷(umezawa等人,(1988)biochem.biophys.res.commun.[生物化学与生物物理研究通讯]153:1038)；抗体(bloeman等人,(1995),febslett.[欧洲生化学会联合会快报]357:140；owais等人,(1995)antimicrob.agentschemother.[抗微生物剂化学疗法]39:180)；表面活性剂蛋白a受体(briscoe等人,(1995)am.j.physiol.[美国生理学杂志]1233:134)；p120(schreier等人,(1994)j.biol.chem.[生物化学杂志]269:9090)；还参见和laukkanen(1994)febslett.[欧洲生化学会联合会快报],346:123-6；killion和fidler(1994)immunomethods[免疫方法],4:273。[0146]本技术还提供了使用包含本披露的fc变体与其他疗法或一种或多种治疗剂的组合的药物组合物共同施用或治疗患者的方案。与另外的治疗剂(例如，细胞因子、类固醇、化学治疗剂、抗生素、或放射)共同施用或治疗的方法在本领域中是已知的(参见例如，hardman等人,(编辑)(2001)goodmanandgilman'sthepharmacologicalbasisoftherapeutics[goodman和gilman的治疗剂的药理学基础],第10增版,mcgraw-hill[麦格劳-希尔集团],纽约州纽约市；poole和peterson(编辑)(2001)pharmacotherapeuticsforadvancedpractice:apracticalapproach[用于先进实践的药物治疗学：实用方法],lippincott,williams&wilkins[利平科特、威廉姆斯和威尔金斯出版社],宾夕法尼亚州费城市(phila.,pa.)；chabner和longo(编辑)(2001)cancerchemotherapyandbiotherapy[癌症化学疗法和生物疗法],lippincott,williams&wilkins[利平科特、威廉姆斯和威尔金斯出版社],phila.,pa.[宾夕法尼亚州费城市])。有效量的治疗剂可以将症状降低至少10％、至少20％、至少约30％、至少40％或至少50％。[0147]在一些实施例中，本披露的药物组合物还包含一种或多种另外的治疗剂。[0148]除上述治疗方案以外，还可对患者进行外科手术和其他形式的物理疗法。[0149]治疗应用[0150]包含本披露的fc变体但不限于此的治疗剂或药物组合物可用于治疗、预防或改善其中存在细胞异常增殖的障碍或病症，本文称为“细胞增殖性障碍或病症”。在一方面，本披露提供了用于治疗细胞增殖性障碍或病症的方法。在一方面，治疗的受试者是人。[0151]可以使用包含本披露的fc变体的治疗剂或药物组合物治疗、预防或改善的细胞增殖性障碍或病症的实例包括但不限于癌症。如本文使用的术语“癌症”意欲包括所有类型的癌性生长或致癌性过程、转移性组织或恶性转化的细胞、组织或器官，而不考虑组织病理学类型或侵袭的阶段。[0152]在特定实施例中，根据本文所述的方法，向受试者施用包含本披露的fc变体的治疗剂或药物组合物，实现了一种、两种或三种或更多种结果：(1)减少肿瘤或赘生物的生长；(2)减少肿瘤的形成；(3)根除、除去或控制原发性、区域性和/或转移性癌症；(4)减少转移性扩散；(5)降低死亡率；(6)提高生存率；(7)延长生存期；(8)增加缓解期的患者人数；(9)降低住院率；(10)缩短住院时间；以及(11)维持肿瘤的大小，使其增加不超过10％、或不超过8％、或不超过6％、或不超过4％；优选地，肿瘤的大小增加不超过2％。[0153]在特定实施例中，如使用本领域已知的测定法所测量，相对于施用阴性对照的患有癌症的受试者中(在一些实施例中，在相同的癌症动物模型中)的肿瘤的生长，根据本文所述方法向患有癌症的受试者(在一些实施例中，癌症的动物模型)施用包含本披露的fc变体的治疗剂或药物组合物使肿瘤的生长抑制或减少至少约2倍、优选地至少约2.5倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约7倍、或至少约10倍。在另一个实施例中，如使用本领域已知的测定法所测量，相对于施用阴性对照的患有癌症的受试者中(在一些实施例中，在相同的癌症动物模型中)的肿瘤的生长，根据本文所述方法向患有癌症的受试者(在一些实施例中，癌症的动物模型)施用包含本披露的fc变体的治疗剂或药物组合物使肿瘤的生长抑制或减少至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少70％、至少75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％。[0154]癌性障碍的实例包括但不限于实体瘤、血液癌症、软组织肿瘤和转移性病灶。实体瘤的实例包括各种器官系统(如影响肝，肺，乳腺，淋巴，胃肠(例如，结肠)，泌尿生殖道(例如，肾细胞、尿路上皮细胞)，前列腺和咽的那些器官系统)的恶性肿瘤，例如肉瘤和癌(包括腺癌和鳞状细胞癌)。腺癌包括如大多数结肠癌、直肠癌、肾细胞癌、肝癌、非小细胞肺癌、小肠癌和食管癌的恶性肿瘤。鳞状细胞癌包括恶性肿瘤，例如在肺、食管、皮肤、头颈部区域、口腔、肛门和子宫颈中。在一个实施例中，癌症是黑色素瘤，例如，晚期黑色素瘤。还可以使用本披露的方法和组合物治疗或预防前述癌症的转移性病变。[0155]使用包含本披露的fc变体的治疗剂或药物组合物可以抑制其生长的示例性癌症包括通常响应于免疫疗法的癌症。用于治疗的优选的癌症的非限制性实例包括黑素瘤(例如，转移性恶性黑素瘤)、肾癌(例如，透明细胞癌)、前列腺癌(例如，激素难治性前列腺腺癌)、乳腺癌、结肠癌和肺癌(例如，非小细胞肺癌)、上皮癌。另外，可以使用本文所述的组合疗法来治疗难治性或复发性恶性肿瘤。[0156]可以治疗的其他癌症的实例包括骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内恶性黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门癌、胃食道癌、胃癌、睾丸癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、默克(merkel)细胞癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、慢性或急性白血病(包括急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病)、儿童实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤(cns)、原发性cns淋巴瘤、神经母细胞瘤、肿瘤血管生成、脊髓轴肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西氏(kaposi)肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、t细胞淋巴瘤、环境诱导的癌症(包括石棉诱导的癌症(例如，间皮瘤))以及所述癌症的组合。[0157]在特定实施例中，癌症是乳腺癌、神经母细胞瘤、淋巴瘤、结肠癌、胰腺导管腺癌、黑色素瘤、肾细胞癌、膀胱癌、结直肠癌、非小细胞肺癌、非霍奇金淋巴瘤、多发性骨髓瘤。[0158]组合疗法[0159]关于另外的治疗剂，“组合”施用意指在受试者患病期间，将两种(或更多种)不同的治疗递送给受试者。在一些实施例中，当第二治疗的递送开始时，第一治疗的递送仍在进行，所以就施用而言存在重叠。这被称为“同时递送”或“并行递送”。在其他实施例中，一种治疗的递送在另一种治疗的递送开始前结束。这被称为“顺序递送”。在任一种情况的一些实施例中，由于是组合施用，该治疗更有效。还可以循环施用本披露的组合疗法的一种或多种另外的治疗剂。组合循环疗法涉及在一段时间内施用第一种疗法，然后在一段时间内施用第二种疗法，并且重复这种顺序施用。[0160]包含如本文所述的工程改造的免疫球蛋白的治疗剂或药物组合物可以与一种或多种其他疗法(例如，抗癌剂、细胞因子或抗激素剂)一起施用，以治疗和/或控制癌症。可以与包含如本文所述的工程改造的免疫球蛋白的治疗剂或药物组合物组合使用的其他疗法包括但不限于小分子、合成药物、肽(包括环状肽)、多肽、蛋白质、核酸(例如，dna和rna核苷酸，包括但不限于反义核苷酸序列，三螺旋，rnai和编码生物活性蛋白、多肽或肽的核苷酸序列)、抗体、合成或天然无机分子、模拟剂以及合成或天然有机分子。[0161]除了包含如本文所述的工程改造的免疫球蛋白的治疗剂或药物组合物之外可以使用的一种或多种其他疗法的非限制性实例包括但不限于化学疗法、放射疗法、细胞毒性剂、化学治疗剂、细胞因子、激酶抑制剂、低剂量吉西他滨、5-氟尿嘧啶以及细胞因子调节剂。特别地，除了包含本披露的工程改造的免疫球蛋白的治疗剂或药物组合物之外可以使用的一种或多种其他疗法特别包括将扰乱肿瘤微环境的免疫肿瘤学方法，例如，重组il-2、重组il-15、重组il-12、重组il-21、抗il1β、抗tgfβ、抗cd39、抗cd73、抗ctla4、抗pd(l)1、抗tim3、hdac抑制剂、hif1a抑制剂以及抗血管生成剂(如抗vegf)。[0162]试剂盒[0163]本披露还涵盖用于治疗患有细胞增殖性障碍的患者的试剂盒。此类试剂盒包含治疗有效量的包含如本文所述的fc变体的治疗剂或药物组合物。另外，此类试剂盒可以包含用于施用包含如本文所述的fc变体的治疗剂或药物组合物的工具(例如，自动注射器、注射筒和小瓶、预填充的注射筒、预填充笔)以及使用说明书。这些试剂盒可以含有另外的治疗剂(如下所述)，用于治疗细胞增殖性障碍。此类试剂盒还可以包含含有如本文所述的fc变体的治疗剂或药物组合物的施用说明书，以治疗患者。此类说明书可以提供用于使用包含如本文所述的fc变体的治疗剂或药物组合物的剂量、施用途径、方案和总治疗持续时间。[0164]短语“用于施用的工具”用于指示用于向患者全身施用药物的任何可用工具，该工具包括但不限于预填充注射筒、小瓶和注射筒、注射笔、自动注射器、静脉内滴注器和袋、输注泵、贴片、输注袋和针等。使用此类物品，患者可以自我施用药物(即，在没有医生的帮助下施用药物)或医生可以施用药物。[0165]实例[0166]提供以下实例以进一步说明本披露，但不限制本披露的范围。本披露的其他变型对本领域普通技术人员而言将是显而易见的，且也为所附权利要求书所涵盖。[0167]根据实例1产生的氨基酸序列衍生的所有构建体，在哺乳动物系统中表达且纯化(实例2)，以使用表面等离子体共振(spr)评估与人fcαri和大鼠fcαr的结合(实例3)。最后，使用人新鲜分离的pmn(实例4)，通过基于细胞的测定，来评估工程改造的免疫球蛋白的功能性。所有实例均使用包含识别抗原her2的vh和vl结构域以及基于iga2的工程改造铰链和fc区的抗体形式的fc变体进行。seqidno:1是抗her2结合抗体的全长重链序列，具有结合her2的vh结构域以及igg1的铰链和恒定结构域。seqidno:2是抗her2结合抗体的全长重链序列，具有结合her2的vh结构域以及iga2的m2同种异型的铰链和恒定结构域(lombana等人,(2019)mabs[单克隆抗体],11:1122-38)。seqidno:4是抗her2结合抗体的轻链序列，具有结合her2的vl结构域和iga2的恒定结构域(cl)。[0168]实例1：iga2fc对hfcαri的亲和力成熟[0169]1.1iga2fc文库设计[0170]由于iga1与iga2具有相似的结构，仅在铰链区有所不同，因此使用晶体结构pdb1ow0对iga1fc/hfcαri复合物进行计算机模拟分析。将所有位于hfcαri附近的残基视为可能参与iga1fc/hfcαri相互作用，并且分为两类：(i)“核”界面区的残基(lch2.15、lch2.15.1、mch3.105、ech3.109、pch3.113、lch3.114、ach3.115、fch3.116、qch3.118，其中这些残基根据c-结构域的imgt编号进行编号)，以及(ii)核周围的“外壳”区的残基(qch2.94、nch2.97、hch2.98、rch3.1、ech3.3、rch3.40、lch3.42、sch3.45、ech3.45.2，其中这些残基根据c-结构域的imgt编号进行编号)。使用基于三核苷酸定向诱变(trim)的方法，将两组残基多样化(等人,(1994)nucleicacidsres.[核酸研究],22:5600-5607；knappik等人,(2000)jmolbiol.[分子生物学杂志],296:57-86)以生成两种文库l1和l2，分别对应“外壳”区和“核”区。[0171]使用iga2fc结构域的易错pcr生成第三文库(ep文库)(gram等人,(1992)pnasusa[美国国家科学院院刊]89:3576-3580)。[0172]1.2通过酵母展示进行文库筛选[0173]使用酵母展示技术对所有这三种iga2fc文库进行筛选(boder等人,(1997)naturebiot.[自然生物技术],15:553-557)。简言之，igafc通过α-凝集素(aga1/aga2)蛋白异二聚体展示在酵母细胞膜上，其中iga2fc与aga2蛋白的n-末端融合。进行了四轮分选：[0174](i)在第一轮分选过程中，所有三种文库均在含有1％棉子糖和2％半乳糖的选择培养基中，在20℃下伴随摇动生长两天，以诱导iga2fc在酵母细胞表面表达。将每种培养物沉淀，去除上清液，并将沉淀用含有1％bsa(牛血清白蛋白)以及2mmedta的pbsm(pbs(吉布科公司(gibco)，马萨诸塞州沃尔瑟姆(waltham,ma)))洗涤一次。将沉淀重悬在20mlpbsm后，添加100μl的每种链霉亲和素和抗生物素微珠(美天旎生物技术公司(miltenyibiotec)，德国贝尔吉施格拉德巴赫(bergischgladbach,germany))。将细胞在室温下旋转孵育1小时。然后使用macsls柱(美天旎公司(miltenyi))，将这些珠去除。然后将这些文库沉淀，并且重悬于20mlpbsm+50nm生物素化fcαri(cd89)(seqidno:5)中，并且在室温下旋转孵育1小时。然后将这些细胞沉淀，去除上清液，在pbsm中洗涤一次，然后重悬于20mlpbsm+100μl链霉亲和素微球(美天旎公司)中。将这些文库在冰上孵育5min(伴随偶尔摇动)，然后将这些细胞沉淀，去除上清液，重悬于20mlpbsm中，然后在macsls柱(美天旎公司)上分离。将这些柱用5mlpbsm洗涤一次，然后将结合的细胞用选择培养基洗脱，最终在选择培养基中达到10ml，并且在30℃下伴随摇动生长过夜。[0175](ii)对于第二轮分选，将这三种文库的每一种的第一轮输出物在含有1％棉子糖和2％半乳糖的选择培养基中在20℃下生长24小时，以诱导iga表达。将这些文库沉淀，在pbsf(pbs(吉布科公司)+0.1％牛血清白蛋白)中洗涤一次，并且重悬于pbsf中。将每种文库分为两份样品；将第一份样品达到在pbsf中的25nm生物素化fcαri，将第二份样品达到在pbsf中的10nm生物素化fcαri。向每种溶液中加入1:100最终稀释的兔抗myc标签dylight488(罗克兰公司(rockland)，宾夕法尼亚州利默里克(limerick,pa))，并且将样品在室温下旋转孵育1.5小时。将样品沉淀，用pbsf洗涤一次，然后与pbsf+1:100最终链霉亲和素dylight633(英杰公司(invitrogen)，马萨诸塞州沃尔瑟姆)一起旋转孵育5min。然后将样品沉淀，洗涤一次，重悬于pbsf中，通过40μm过滤器过滤，然后使用流式细胞术在facsaria细胞分选仪(贝克顿-迪金森公司生物科学公司(bectondickinsonbiosciences)，加利福尼亚州圣何塞(sanjose,ca))上进行分析和分选。对于l1和l2文库，将10nmfcαri样品进行分选，并且对于ep文库，将25nmfcαri样品进行分选。在每种情况下，将显示前1％-2％信号的酵母门控、收集，并且在选择培养基中在30℃生长过夜。[0176](iii)对于第三轮分选，将第二轮分选的培养物接种至选择培养基+1％棉子糖+2％半乳糖中，并且在20℃下生长过夜以诱导iga表达。除了使用鸡抗myc标签fitc(基因泰克斯公司(genetex)，加利福尼亚州欧文市(irvine,ca))和中性抗生物素蛋白dylight633(英杰公司)作为检测试剂之外，如第二轮一样，制备这三种文库中的每一种的细胞，并且进行分选。将生物素化fcαri以5nm用于ep文库，以2nm用于l1文库，并且以1nm用于l2文库。在每种情况下，将显示前1％-2％信号的酵母门控、收集，并且在选择培养基中在30℃生长过夜。[0177](iv)第四轮分选仅在ep文库和l1文库中完成。将第三轮分选的培养物接种至选择培养基+1％棉子糖+2％半乳糖中，并且在20℃下生长过夜以诱导iga表达。除了使用鼠抗cmycdylight488(英杰公司)和链霉亲和素cy5(英杰公司)作为检测试剂之外，如第二轮一样，制备这些文库中的每一种的细胞，并且进行分选。将生物素化fcαri以2nm用于ep文库，并且以1nm用于l1文库。在每种情况下，将显示前1％-2％信号的酵母门控、收集，并且在选择培养基中在30℃生长过夜。[0178]1.3热点识别、全长免疫球蛋白的翻译和针对hfcαri的spr验证[0179]从第三轮(l2文库)和第四轮(ep和l1文库)培养物中纯化质粒，转化至大肠杆菌(e.coli)中，铺板在选择性琼脂平板上，在37℃下生长过夜，并且提交至金唯智公司(genewiz)(新泽西州南平野市(southplainfield,nj))进行桑格(sanger)测序(sanger等人(1975)jmolbiol.[分子生物学杂志],94(3):441-8；sanger等人(1977)pnasusa.[美国国家科学院院刊],74(12):5463-7)。基于出现频率选择先导克隆，并且用于识别增强iga2/hfcαri相互作用的突变。表1列出了iga2残基位置。[0180]表1：通过酵母展示识别的增强iga2对hfcαri亲和力的突变。[0181][0182][0183]将识别的突变作为单点突变或以组合形式掺入具有seqidno:2的全长iga2免疫球蛋白中，并且在如实例2所述的hek293细胞中瞬时表达。还将相同突变掺入具有seqidno:3和6的以及含有能够与hfcαri结合的工程改造igg1fc的igg1同种型免疫球蛋白中。表2(基于seqidno:2)、表4(基于seqidno:3)和表6(基于seqidno:6)列出了测试的突变组。[0184]将fc变体纯化并使用针对hfcαri测量的表面等离子体共振(spr)进行评估，以评估特定突变对免疫球蛋白对hfcαri的亲和力的影响。有趣的是，所有突变对相应免疫球蛋白的表达产量和聚集倾向具有有限的影响或没有真正的影响。捕获后的spr数据和聚集含量示出于表3、表5和表7。[0185]最后，基于spr和聚集数据选择先导候选物，并且使用更大范围的hfcαri浓度重复spr实验。使用调整后的浓度范围能够更精确地测量工程改造的免疫球蛋白和hfcαri之间的相互作用。结果示出于表8、表9以及表10中。[0186]表2：基于亲本iga2免疫球蛋白seqid2的测试的突变组。[0187][0188][0189]表3：基于亲本iga2seqidno:2的fc变体的生物物理表征。[0190][0191][0192]1按照实例3所述的程序，通过spr实验确定工程改造的免疫球蛋白对hfcαri的亲和力和最大响应。[0193]2按照实例2所述的程序，测量聚集倾向。[0194]nd：未确定的[0195]表4：基于亲本igg1工程改造的免疫球蛋白seqid3的测试的突变组。[0196][0197][0198]表5：基于亲本seqidno:3的fc变体的生物物理表征。[0199][0200][0201]1按照实例3所述的程序，通过spr实验确定工程改造的免疫球蛋白对hfcαri的亲和力和最大响应。[0202]2按照实例2所述的程序，测量聚集倾向。[0203]nd：未确定的[0204]表6：基于亲本igg1工程改造的免疫球蛋白seqid6的测试的突变组。[0205][0206][0207]表7：基于亲本seqidno:6的fc变体的生物物理表征。[0208][0209][0210]1按照实例3所述的程序，通过spr实验确定工程改造的免疫球蛋白对hfcαri的亲和力和最大响应。[0211]2按照实例2所述的程序，测量聚集倾向。[0212]nd：未确定的[0213]表8：如通过实例3所述的spr实验确定，基于亲本iga2(seqidno:2)的fc变体对hfcαri的亲和力和最大响应。[0214][0215]表9：如通过实例3所述的spr实验确定，基于亲本igg1工程改造的免疫球蛋白(seqidno:3)的fc变体对hfcαri的亲和力和最大响应。[0216][0217][0218]表10：如通过实例3所述的spr实验确定，基于亲本igg1工程改造的免疫球蛋白(seqidno:6)的fc变体对hfcαri的亲和力和最大响应。[0219][0220]1.4体外测定中亲和力成熟转化为α效应子功能增强[0221]选择具有同二聚体fc的先导候选物(seqidno:32、37和42)，因其对hfcαri的结合能力改善。接着按照如实例4所述的程序，在pmn杀伤测定中测试这些候选物。效力(ec50；产生其最大作用的50％所需的免疫球蛋白的浓度)和功效(emax；免疫球蛋白的预期最大作用)结果示出于图1至图4中。[0222]在sk-br-3pmn杀伤测定中，所有测试的候选物均具有活性，并且与亲本iga2相比，显示出更强的功效(图1)。[0223]此外，在使用calu-3细胞的pmn杀伤测定中，显示出功效的高达2倍的实质性改善(图2)，其中已知her2受体密度低于sk-br-3细胞(实例4中所述)。此外，在对mda-mb-453细胞(也被认为表达较低水平的her2受体)进行的pmn杀伤测定中，具有seqidno:42的变体显示出效力的实质性改善(图3)。这种效力的改善为大约7倍。[0224]最后，在使用mda-mb-175细胞(已知为最低的her2表达细胞系)的pmn杀伤测定中测试了具有seqidno:42的亲和力成熟的变体，并且即使在非常高的浓度下变体也没有显示出杀伤(图4)。这一观察结果突出了所测试候选物的安全特征。[0225]将突变组应用于异二聚体fc，产生包含seqidno:7-8、seqidno:80-8、seqidno:7-9或seqidno:80-9的候选物(图5)。在pmn杀伤测定中，测试的候选物seqidno:80-8和seqidno:80-9与其亲本免疫球蛋白和iga2相比，显示出对sk-br-3细胞具有更好的杀伤特性(图5a和5c)，但在pbmc杀伤测定中未显示出介导γ应答的作用(图5b和5d)。[0226]实例2：工程改造蛋白的表达和纯化[0227]基因艺术公司(geneart)(生命技术公司(lifetechnologies))合成了编码重链和轻链的核酸序列，并使用基于限制性酶连接的克隆技术将这些核酸序列克隆到哺乳动物表达载体中。将所得质粒共转染到hek293t细胞中。简言之，为了瞬时表达免疫球蛋白(igg、iga和工程改造的免疫球蛋白)，使用聚乙烯亚胺((pei)参考目录号24765，聚合科学公司(polysciences,inc.))，将等量轻链和每种工程改造重链载体共转染到悬浮适应的hek293t细胞中。典型地，用含有50μg编码工程改造重链的表达载体和50μg编码轻链的表达载体的dna转染以1-2个mio细胞/ml的密度悬浮的100ml细胞。然后将重组表达载体引入宿主细胞中，并通过进一步培养细胞7天的时间段来产生构建体，以允许分泌到补充有0.1％普朗尼克酸(pluronicacid)、4mm谷氨酰胺和0.25μg/ml抗生素的培养基(hek，无血清培养基)中。[0228]然后使用免疫亲和色谱，从无细胞上清液中纯化产生的构建体。使用液体色谱系统(aektapure色谱系统，通用电气医疗集团生命科学部(gehealthcarelifesciences))，将用pbs缓冲液(ph7.4)平衡的抗κlc树脂(kappaselect，通用电气医疗集团生命科学部)与经过滤的条件培养基一起孵育。将树脂用pbs(ph7.4)洗涤，然后用洗脱缓冲液(50mm柠檬酸盐，90mmnacl，ph2.7)洗脱构建体。[0229]捕获后，使用1mtris(ph10.0)溶液对洗脱蛋白进行ph中和，并且使用尺寸排阻色谱技术(hiprepsuperdex20016/60，通用电气医疗集团生命科学部)进行精制。最后，将纯化蛋白配制于pbs缓冲液(ph7.4)中。[0230]在捕获和ph中和步骤后，使用分析型尺寸排阻色谱技术(superdex200increase3.2/300gl，通用电气医疗集团生命科学部)测量聚集倾向。[0231]实例3：对人fcα受体(hfcαri)或大鼠fcα受体(rfcαr)的spr测量[0232]进行直接结合测定以表征fc变体(以抗体形式，具有seqidno:4的轻链)与人fcαri或大鼠fcαr的结合。[0233]在仪器(通用电气医疗集团，瑞士格拉特布鲁格市(glattbrugg,switzerland))上，在室温下测量动力学结合亲和力常数(kd)，其中蛋白在运行缓冲液(10mmnap，150mmnacl，0.05％吐温20，ph7.6)中稀释。将用生物素化抗κ轻链scfv固定的链霉亲和素传感器芯片(传感器芯片公司(sensorchipsa)，通用电气医疗集团生命科学部)，用于捕获工程改造的免疫球蛋白，并且重组人hfcαri或重组大鼠fcαr用作分析物。[0234]用作参考，一个流动池并未捕获任何免疫球蛋白。通过随后在参考和测量流动池上注射分析物稀释液系列获得结合数据。纳入零浓度样品(仅运行缓冲液)以允许在数据评估期间进行双重参考。对于数据评估，通过应用1:1结合模型分析双重参考传感图，以产生平衡解离常数(kd)。涉及rfcαr的结果总结在表11中。[0235]这一实验表明，候选fc变体与人/大鼠fcαri进行交叉反应，这是在体内疾病模型中测试候选物所需的特性。[0236]表11：spr测量和对rfcαr的亲和力[0237][0238]实例4：抗体依赖性细胞毒性(adcc)测定方法[0239]根据瑞士人类研究法案(巴塞尔组织供体计划(baseltissuedonorprogram)-上一页(prevomed))，从新鲜抽取的外周血中收集健康供体的血液样品。用ack裂解缓冲液裂解红细胞后，通过菲科帕克(ficoll-paque)梯度来分离多形核细胞和外周血单核细胞(pmn和pbmc)。pmn用于表征工程改造的免疫球蛋白的α效应子功能，而pbmc用于表征γ效应子功能。[0240]以20:1的效应子与靶标比率，将效应细胞(新鲜分离的pmn或pbmc细胞)添加至表达her2的靶细胞(sk-br-3、calu-3、mda-mb-453或mda-mb-175细胞，购自美国典型培养物保藏中心，马里兰州罗克维尔(rockvillemd))。sk-br-3是过表达her2的乳腺癌细胞系。calu-3和mda-mb-453分别是肺癌细胞系和乳腺癌细胞系，与sk-br-3相比，以低水平过表达her2(cheung等人,2019)。mda-md-175是表达最低量her2的乳腺癌细胞系(crocker等人,2005)。未观察到任何候选fc变体的pmn细胞杀伤，这表明对较低表达her2的细胞系的安全特征良好。[0241]添加指定浓度的免疫球蛋白构建体，并且将组合轻轻混合，然后以260xg不间断离心4分钟，以促进靶标和效应细胞的共定位。然后在标准组织培养培养箱中，将测定在5％co2中、在37℃下孵育18小时。18小时后，根据制造商的说明书使用cytotox96试剂(普洛麦格公司(promega))，将上清液用于ldh释放测量。在bioteksynergyht读板仪上，读取490nm的吸光度。分析数据，并使用graphpadprism6.0进行绘制。[0242]实例5：与iga相比，工程改造的免疫球蛋白药代动力学(pk)特性的改善[0243]5.1工程改造的免疫球蛋白材料生产[0244]基因艺术公司(生命技术公司)合成了编码具有序列seqidno:1、2、7、8、40、80、82、83、84的抗her2工程改造的免疫球蛋白重链变体的核酸，并使用基于限制性酶连接的克隆技术将这些核酸克隆至哺乳动物表达载体中。通过用ala残基取代特定的asp残基，去除了选定的n-糖基化位点。将所得编码重链的质粒与编码轻链(seqidno:4)的质粒共转染至哺乳动物表达系统中。对于hek293t表达细胞系，根据实例2所述的程序进行表达。对于cho-s表达细胞系(赛默公司(thermo))，使用以下程序。简言之，为了瞬时表达蛋白，使用expifectaminecho转染剂(赛默公司)将表达载体转染至适应悬浮液的cho-s细胞中。典型地，用含有400μg编码工程改造的蛋白的表达载体的dna转染以6mio细胞/ml的密度悬浮的400ml细胞。然后将重组表达载体引入宿主细胞以在培养基(expicho表达培养基，补充有expicho料和增强剂(赛默公司))中进一步分泌七天。然后根据实例2所述的程序，从无细胞上清液中纯化表达的构建体。血清中测量的免疫球蛋白浓度绘制为时间的函数，如图6和图7所示。表12和13中描述了生成的材料。[0245]表12：hek293t哺乳动物系统中产生的免疫球蛋白的描述[0246][0247]表13：cho哺乳动物系统中产生的免疫球蛋白的描述[0248][0249]如图6所示与构建体设计一致，具有序列seqidno:7-8和seqidno:8-80的工程改造的免疫球蛋白与cd89结合，同时保留了与fcrn的结合，并且与iga免疫球蛋白相比显示出改善的pk特性和改善的半衰期。此外，如图6所示，具有seqid8-80的亲和力成熟的变体展现出与具有seqidno:7-8的亲本构建体相同的pk特征。这表明，对cd89的亲和力成熟确实会损害工程改造的免疫球蛋白pk特性。[0250]图7呈现的数据显示出，n-糖基化模式如何影响免疫球蛋白pk。与iga相比，工程改造的免疫球蛋白的pk特性得到改善，并且当单个n-糖基化位点ch2.84.4(seqidno:83)去除时pk特性得到改善。[0251]5.1小鼠研究[0252]由查尔斯河实验室(charlesriverlaboratories))获得雄性cd1小鼠。抵达后，将所有小鼠安置在无病原体的动物设施中，采取21℃室温下标准的12h光照/12h黑暗循环，可随意获取食物和水。所有小鼠接受单次静脉内(iv)注射如上所述产生且纯化的igg或iga或工程改造的免疫球蛋白(3mg/kg)。将每种化合物注射到三只小鼠中。注射后不同时间，经由隐静脉将血液样品采集至血清分离管中。使血液在环境温度下凝结至少20min。将凝结的样品维持在室温下直至离心，在收集时间1h内开始。将每个样品以1500-2000xg的相对离心力，在2℃-8℃下离心5min。在离心后20min内将血清从血液样品中分离出，并且转移至带标记的2.0-ml的聚丙烯锥形底微量离心管中。仅使用看上去健康且无明显异常的动物进行研究。所有动物工作均经诺华股份有限公司机构动物护理和使用委员会(novartis’institutionalanimalcareandusecommittee)审查且批准。[0253]5.2用于药代动力学研究的免疫球蛋白elisa[0254]通过顺序夹心elisa来测量免疫球蛋白水平。对于iga给药，将nuncmaxisorp微量滴定板的孔在4℃下用山羊抗人iga(南方生物技术公司(southernbiotech)，目录号2053-01)包被过夜。对于igg和工程改造的免疫球蛋白给药，将罗氏公司(roche)streptawell微量滴定板的孔在室温下用生物素化sb山羊抗人igg(南方生物技术公司，目录号2049-08)包被1h。用封闭缓冲液(pbs、0.5％牛血清白蛋白(bsa))孵育1h后，将在相同的封闭缓冲液中稀释的样品添加至封闭板中，并且在室温下孵育2h。孵育后，添加辣根过氧化物酶缀合的山羊抗人iga(南方生物技术公司，目录号2053-05)或辣根过氧化物酶缀合的山羊抗人igg(南方生物技术公司，目录号2049-05)，并在室温下孵育1h。然后将板用底物溶液(bmbluepod底物tmb，罗氏公司，目录号11484281001)孵育，并且将反应用0.5m硫酸终止。使用读板仪在450nm下测量吸光度，其中在650nm下吸光度降低。在这些步骤之间，将板用洗涤缓冲液(pbs中0.05％吐温-20)洗涤3次。[0255]序列信息[0256]表14描述了包含如实例中所述的变体fc区的全长重链以及用于产生完整抗体的轻链的氨基酸序列(seqidno)。可以使用常规重组蛋白生产和纯化过程生产如本文所述的fc变体、全长重链、轻链或完整抗体。[0257]所有在本说明书中提到的序列(seqidno)参见表14。参考编号是指内部序列参考编号。在本技术的全文中，如果说明书文本(例如，表14)与序列表之间存在差异，则以说明书文本为准。[0258]表14：氨基酸序列[0259][0260][0261][0262][0263][0264][0265][0266][0267][0268]当前第1页12当前第1页12