与CD3和CD19结合的抗体的制作方法

本发明一般地涉及与cd3和cd19结合的、例如用于活化t细胞的抗体。此外，本发明涉及编码此类抗体的多核苷酸，以及包含此类多核苷酸的载体和宿主细胞。本发明进一步涉及用于产生所述抗体的方法，以及涉及将所述抗体用于治疗疾病的方法。

背景技术：

1、cd3(分化簇3)是由四个亚基组成的蛋白质复合物，即cd3γ链、cd3δ链和两个cd3ε链。cd3与t细胞受体和ζ链结合，在t淋巴细胞中产生激活信号。

2、cd3作为药物靶点已被广泛探索。以cd3为靶向的单克隆抗体已被用于自身免疫性疾病(如i型糖尿病)或移植排斥处理的免疫抑制剂治疗。1985年，cd3抗体莫罗单抗cd3(muromonab-cd3,okt3)成为第一个获准用于人体临床的单克隆抗体。

3、cd3抗体的最新应用为双特异性抗体的形式，一方面与cd3结合，另一方面与诸如cd19的靶细胞抗原结合。这种抗体与其两个靶标的同时结合将使靶细胞和t细胞之间产生一种暂时的相互作用，导致活化任何细胞毒性t细胞，随后裂解靶细胞。与cd3和cd19结合的双特异性抗体描述于例如wo 2017/055314中。

4、为了实现治疗的目的，抗体必须满足的一个重要条件是在体外(用于药物的储存)和体内(在患者给药以后)均具有足够的稳定性。

5、结构修饰，如天冬酰胺脱酰胺化是重组抗体的典型降解反应，可以作用于体外稳定性和体内生物学功能。

6、鉴于抗体、特别是用于活化t细胞的双特异性抗体的巨大治疗潜力，需要具有优化特性的cd3抗体，包括多特异性抗体。

技术实现思路

1、本发明提供了抗体，包括多特异性(例如双特异性)抗体，其与cd3结合并且对由例如天冬酰胺脱酰胺引起的降解具有抗性，因此如治疗目的所需尤其稳定。所提供的(多特异性)抗体进一步结合了良好的功效和可生产性以及低毒性和有利的药代动力学特性。

2、如本文所示，本发明提供的与cd3结合的抗体(包括多特异性抗体)在ph 7.4、37℃2周后保留超过约90％的cd3结合活性，其相对于如通过表面等离子体共振(spr)所测定的在ph 6、-80℃2周后的结合活性。

3、在一个方面，本发明提供了与cd3和cd19结合的抗体，其中抗体包含(a)与cd3结合的第一抗原结合结构域，其包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，该重链可变区包含seqid no:2的重链互补决定区(hcdr)1、seq id no:3的hcdr 2和seq id no:5的hcdr 3，该轻链可变区包含seq id no:8的轻链互补决定区(lcdr)1、seq id no:9的lcdr 2和seq idno:10的lcdr 3；以及(b)与cd19结合的第二抗原结合结构域和任选的第三抗原结合结构域。在一个方面，第一抗原结合结构域的vh包含与seq id no:7的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，和/或第一抗原结合结构域的vl包含与seq id no:11的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。

4、在另一方面，本发明提供与cd3和cd19结合的抗体，其中抗体包含(a)与cd3结合的第一抗原结合结构域，其包含seq id no:7的vh序列和seq id no:11的vl序列；以及(b)与cd19结合的第二抗原结合结构域和任选的第三抗原结合结构域。

5、在一个方面，所述第一抗原结合结构域、所述第二抗原结合结构域和/或在存在时的第三抗原结合结构域是fab分子。

6、在一个方面，抗体包含由第一亚基和第二亚基构成的fc结构域。

7、在一个方面，第一抗原结合结构域为fab分子，其中fab轻链和fab重链的可变结构域vl和vh彼此替换或恒定结构域cl和ch1彼此替换，特别是可变结构域vl和vh彼此替换。

8、在一个方面，第二抗原结合结构域和在存在时的第三抗原结合结构域为常规fab分子。

9、在一个方面，第二抗原结合结构域和在存在时的第三抗原结合结构域为fab分子，其中在恒定结构域cl中，第124位的氨基酸被赖氨酸(k)、精氨酸(r)或组氨酸(h)独立地取代(根据kabat编号)，并且第123位的氨基酸被赖氨酸(k)、精氨酸(r)或组氨酸(h)独立地取代(根据kabat编号)；并且在恒定结构域ch1中，第147位的氨基酸被谷氨酸(e)或天冬氨酸(d)独立地取代(根据kabat eu索引编号)，并且第213位的氨基酸被谷氨酸(e)或天冬氨酸(d)独立地取代(根据kabat eu索引编号)。

10、在一个方面，第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域彼此融合，任选地经由肽接头融合。

11、在一个方面，第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域各自为fab分子并且(i)第二抗原结合结构域在fab重链的c末端与第一抗原结合结构域的fab重链的n末端融合，或者(ii)第一抗原结合结构域在fab重链的c末端与第二抗原结合结构域的fab重链的n末端融合。

12、在一个方面，第一抗原结合结构域、第二抗原结合结构域以及在存在时的第三抗原结合结构域各自为fab分子，并且抗体包含由第一亚基和第二亚基构成的fc结构域；并且其中(i)第二抗原结合结构域在fab重链的c末端与第一抗原结合结构域的fab重链的n末端融合，并且第一抗原结合结构域在fab重链的c末端与fc结构域的第一亚基的n末端融合，或者(ii)第一抗原结合结构域在fab重链的c末端与第二抗原结合结构域的fab重链的n末端融合，并且第二抗原结合结构域在fab重链的c末端与fc结构域的第一亚基的n末端融合；并且第三抗原结合结构域在存在时在fab重链的c末端与fc结构域的第二亚基的n末端融合。

13、在一个方面，fc结构域是igg，特别是igg1 fc结构域。在一个方面，fc结构域是人fc结构域。在一个方面，fc包含促进fc结构域的第一亚基和第二亚基进行缔合的修饰。在一个方面，fc结构域包含降低与fc受体的结合和/或效应子功能的一个或更多个氨基酸取代。

14、在一个方面，第二抗原结合结构域和在存在时的第三抗原结合结构域包含(i)vh，其包含seq id no:15的hcdr 1、seq id no:16的hcdr 2和seq id no:17的hcdr 3；以及vl，其包含seq id no:19的lcdr 1、seq id no:20的lcdr 2和seq id no:21的lcdr 3；或(ii)vh，其包含seq id no:28的hcdr 1、seq id no:29的hcdr 2和seq id no:30的hcdr 3；以及vl，其包含seq id no:32的lcdr 1、seq id no:33的lcdr 2和seq id no:34的lcdr 3。在一个方面，第二抗原结合结构域和在存在时的第三抗原结合结构域包含(i)vh，其包含与seqid no:18的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；和/或vl，其包含与seq id no:22的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；或(ii)vh，其包含与seq id no:31的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；和/或vl，其包含与seq id no:35的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。

15、根据本发明的另一个方面，提供了编码本发明的抗体的分离的多核苷酸和包含本发明的分离的多核苷酸的宿主细胞。

16、在另一方面，提供了产生与cd3和cd19结合的抗体的方法，该方法包括以下步骤：(a)在适合表达该抗体的条件下培养本发明的宿主细胞，以及任选地(b)回收该抗体。本发明还涵盖通过本发明的方法产生的与cd3和cd19结合的抗体。

17、本发明进一步提供了包含本发明的抗体和药用载体的药物组合物。

18、本发明还涵盖使用本发明的抗体和药物组合物的方法。在一个方面，本发明提供了用作药物的根据本发明的抗体或药物组合物。在一个方面，提供了根据本发明的用于治疗疾病的抗体或药物组合物。还提供了根据本发明的抗体或药物组合物在制造药物中的用途，以及根据本发明的抗体或药物组合物在制造用于治疗疾病的药物中的用途。本发明还提供了一种治疗个体中的疾病的方法，包括向所述个体施用有效量的根据本发明的抗体或药物组合物。在某些方面，该疾病为癌症。在其他方面，该疾病为自身免疫性疾病。