技术特征：
1.用于检测非洲猪瘟病毒野毒株和/或疫苗株的单链dna组，由如下组成：（a1）引物对1和探针1；所述引物对1为由seq id no.1和seq id no.2所示两条单链dna组成；所述探针1为seq id no.3所示单链dna；（a2）引物对2和探针2；所述引物对2为由seq id no.4和seq id no.5所示两条单链dna组成；所述探针2为seq id no.6所示单链dna；（a3）引物对3和探针3；所述引物对3为由seq id no.7和seq id no.8所示两条单链dna组成；所述探针3为seq id no.9所示单链dna。2.根据权利要求1所述的单链dna组，其特征在于：所述探针1、所述探针2和所述探针3的两端均分别标记有荧光报告基团和荧光淬灭基团，且所述探针1、所述探针2和所述探针3所标记的荧光报告基团均不同。3.根据权利要求1或2所述的单链dna组，其特征在于：在所述单链dna组中，所述引物对1的上游引物、所述引物对1的下游引物、所述探针1、所述引物对2的上游引物、所述引物对2的下游引物、所述探针2、所述引物对3的上游引物、所述引物对3的下游引物、所述探针3的摩尔比为2:2:1:2:2:1:2:2:1。4.一种用于检测非洲猪瘟病毒野毒株和/或疫苗株的pcr试剂，其特征在于：所述pcr试剂中含有权利要求1-3中任一所述单链dna组。5.根据权利要求4所述的pcr试剂，其特征在于：在所述pcr试剂中，所述引物对1的上游引物、所述引物对1的下游引物、所述引物对2的上游引物、所述引物对2的下游引物、所述引物对3的上游引物、所述引物对3的下游引物的终浓度均为0.4 pmol/μl；所述探针1、所述探针2和所述探针3的终浓度均为0.2 pmol/μl。6.一种用于检测非洲猪瘟病毒野毒株和/或疫苗株的试剂盒，含有权利要求1-3中任一所述单链dna组或权利要求4或5所述的pcr试剂。7.如下任一应用：p1、权利要求1-3中任一所述单链dna组或权利要求4或5所述的pcr试剂或权利要求6所述试剂盒在鉴定或辅助鉴定非洲猪瘟病毒野毒株和/或疫苗株中的应用；p2、权利要求1-3中任一所述单链dna组或权利要求4或5所述的pcr试剂在制备用于鉴定或辅助鉴定非洲猪瘟病毒野毒株和/或疫苗株的产品中的应用；p3、权利要求1-3中任一所述单链dna组或权利要求4或5所述的pcr试剂或权利要求6所述试剂盒在检测或辅助检测待测非洲猪瘟病毒为野毒株还是疫苗株中的应用；p4、权利要求1-3中任一所述单链dna组或权利要求4或5所述的pcr试剂在制备用于检测或辅助检测待测非洲猪瘟病毒为野毒株还是疫苗株的产品中的应用；p5、权利要求1-3中任一所述单链dna组或权利要求4或5所述的pcr试剂或权利要求6所述试剂盒在检测或辅助检测待测病毒是否为非洲猪瘟病毒中的应用；p6、权利要求1-3中任一所述单链dna组或权利要求4或5所述的pcr试剂在制备用于检测或辅助检测待测病毒是否为非洲猪瘟病毒的产品中的应用；p7、权利要求1-3中任一所述单链dna组或权利要求4或5所述的pcr试剂或权利要求6所
述试剂盒在检测或辅助检测待测样本中是否含有非洲猪瘟病毒中的应用；p8、权利要求1-3中任一所述单链dna组或权利要求4或5所述的pcr试剂在制备用于检测或辅助检测待测样本中是否含有非洲猪瘟病毒的产品中的应用；所述疫苗株为mgf360-505r和/或cd2v基因缺失株。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述待测样本选自如下任一：离体全血、血清、血浆、淋巴结、脾脏、肾脏、扁桃体、肌肉、肉骨粉、血粉。9.一种鉴定或辅助鉴定非洲猪瘟病毒野毒株和/或疫苗株的方法，包括如下步骤：从待测样本中提取dna作为模板，用权利要求1-3中任一所述单链dna组或权利要求4或5所述的pcr试剂或权利要求6所述试剂盒进行三重荧光定量pcr，然后根据各通道的ct值和扩增曲线进行结果判定：若所述探针1对应通道、所述探针2对应通道、所述探针3对应通道均满足阳性判定条件，则所述待测样品中含有非洲猪瘟病毒，且为或候选为野毒株；若所述探针1对应通道满足阳性判定条件，且所述探针2对应通道和所述探针3对应通道均不满足阳性判定条件，则所述待测样品中含有非洲猪瘟病毒，且为或候选为cd2v与mgf360-505r基因联合缺失株；若所述探针1对应通道和所述探针2对应通道均满足阳性判定条件，且所述探针3对应通道不满足阳性判定条件，则所述待测样品中含有非洲猪瘟病毒，且为或候选为mgf360-505r基因缺失株；若所述探针1对应通道和所述探针3对应通道均满足阳性判定条件，且所述探针2对应通道不满足阳性判定条件，则所述待测样品中含有非洲猪瘟病毒，且为或候选为cd2v基因缺失株；若所述探针1对应通道不满足阳性判定条件，则所述待测样本中不含有或候选不含有非洲猪瘟病毒；所述探针1对应通道、所述探针2对应通道、所述探针3对应通道的所述阳性判定条件均为如下a1）或a2）：a1）ct值≤35；a2）35＜ct值≤37且扩增曲线为s型。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：进行所述三重荧光定量pcr时，所述引物对1的上游引物、所述引物对1的下游引物、所述探针1、所述引物对2的上游引物、所述引物对2的下游引物、所述探针2、所述引物对3的上游引物、所述引物对3的下游引物、所述探针3的摩尔比为2:2:1:2:2:1:2:2:1；进行所述三重荧光定量pcr时，退火温度为60℃。
技术总结
本发明公开了一种用于检测非洲猪瘟病毒野毒株和疫苗株的试剂盒。本发明提供了用于检测ASFV野毒株和/或疫苗株的单链DNA组，由引物对1（SEQ ID No.1和SEQ ID No.2）和探针1（SEQ ID No.3）、引物对2（SEQ ID No.4和SEQ ID No.5）和探针2（SEQ ID No.6）、引物对3（SEQ ID No.7和SEQ ID No.8）和探针3（SEQ ID No.9）组成。本发明建立的多重荧光定量PCR法可有效区分ASFV野毒感染和基因缺失的疫苗毒株，该方法具良好特异性、敏感性和重复性，为ASFV野毒和疫苗毒的鉴别诊断提供了技术支撑；具良好的社会应用前景。会应用前景。
技术研发人员：牟新涛 刘婉君 韩典霖 杨亮 龚小鹏
受保护的技术使用者：济凡生物科技（北京）有限公司
技术研发日：2022.01.20
技术公布日：2022/2/25