技术特征：
1.一种具备b谱系分化潜能的人造血祖细胞的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：将runx1、hoxa9和lhx2三个转录因子同时或者分别导入人多能干细胞诱导分化体系的细胞，并进行诱导表达与诱导分化，得到所述具备b谱系分化潜能的人造血祖细胞；所述人多能干细胞诱导分化体系的细胞包括人多能干细胞、中胚层细胞、生血内皮细胞或造血祖细胞中的任意一种或至少两种的组合；所述转录因子的导入的方法包括基因过表达、内源基因激活或基因编辑中的任意一种或至少两种的组合；所述诱导分化的方法包括基于基质细胞共培养的单层培养诱导分化或类器官三维培养诱导分化。2.根据权利要求1所述的具备b谱系分化潜能的人造血祖细胞的制备方法，其特征在于，所述runx1、hoxa9和lhx2三个转录因子同时或分别进行诱导表达，所述诱导表达开始于中胚层细胞、生血内皮细胞或造血祖细胞；所述人多能干细胞包括人诱导性多能干细胞和/或人胚胎多能干细胞。3.根据权利要求1或2所述的具备b谱系分化潜能的人造血祖细胞的制备方法，其特征在于，所述诱导分化的方法为基于基质细胞共培养的单层培养诱导分化，包括三个阶段：诱导人多能干细胞产生中胚层细胞、诱导生血内皮细胞分化和诱导造血祖细胞分化和成熟。4.根据权利要求3所述的具备b谱系分化潜能的人造血祖细胞的制备方法，其特征在于，所述诱导人多能干细胞产生中胚层细胞中使用d0培养基和d1培养基；所述诱导生血内皮细胞分化中使用d2培养基；所述诱导造血祖细胞分化和成熟中使用d9培养基和/或d16培养基；所述d0培养基包括人碱性成纤维细胞生长因子、重组人活化素、重组人骨形态发生蛋白、gsk-3α/β抑制剂chir99021、pi3k抑制剂ly294002和tesr-e6培养基；所述d1培养基包括重组人骨形态发生蛋白、alk5抑制剂a83-01、wnt通路抑制剂iwr-1-endo和tesr-e6培养基；所述d2培养基包括维生素c、重组人fms样酪氨酸激酶3配体、人碱性成纤维细胞生长因子、人血管内皮生长因子、重组人干细胞因子、重组人白介素3、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、巨噬细胞集落刺激因子、丁酸钠和stempro-34培养基；所述d9培养基包括重组人促血小板生成素、重组人白介素3、重组人干细胞因子、重组人白介素11、人胰岛素样生长因子1、人血管内皮生长因子、人碱性成纤维细胞生长因子、重组人骨形态发生蛋白、重组人fms样酪氨酸激酶3配体、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、巨噬细胞集落刺激因子、强力霉素和stempro-34培养基；所述d16培养基包括血清替代物b27、rock抑制剂y-27632、重组人促血小板生成素、重组人干细胞因子、重组人白介素3、重组人fms样酪氨酸激酶3配体、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、巨噬细胞集落刺激因子、强力霉素和stempro-34培养基。5.一种具备b谱系分化潜能的人造血祖细胞，其特征在于，所述具备b谱系分化潜能的人造血祖细胞通过权利要求1~4任一项所述的具备b谱系分化潜能的人造血祖细胞的制备方法制备得到；所述具备b谱系分化潜能的人造血祖细胞移植后实现人b细胞再生；
所述具备b谱系分化潜能的人造血祖细胞分化的b细胞类型包括b祖细胞、非成熟b细胞、成熟b细胞或浆细胞中的任意一种或至少两种的组合。6.一种细胞产物，其特征在于，所述细胞产物包括权利要求1~4任一项中所述的人多能干细胞诱导分化体系的细胞及其经基因工程改造后的细胞、权利要求5所述的具备b谱系分化潜能的人造血祖细胞及其经基因工程改造后的细胞、权利要求5所述的具备b谱系分化潜能的人造血祖细胞分化形成的b细胞及其经基因工程改造后的细胞或权利要求5所述的具备b谱系分化潜能的人造血祖细胞分化形成的b细胞及其经基因工程改造后的细胞的分泌产物；所述人多能干细胞诱导分化体系的细胞包括人多能干细胞、中胚层细胞、生血内皮细胞或造血祖细胞中的任意一种或至少两种的组合；所述经基因工程改造后的细胞包括通过基因工程技术构建的表达目标蛋白、目标细胞因子、目标抗体或嵌合抗原受体的细胞中的任意一种或至少两种的组合；所述b细胞及其经基因工程改造后的细胞的分泌产物包括抗体、细胞因子或蛋白中的任意一种或至少两种的组合。7.一种体内b淋巴细胞谱系再生的方法，其特征在于，所述体内b淋巴细胞谱系再生的方法包括：将权利要求5所述的具备b谱系分化潜能的人造血祖细胞移植到体内；所述体内b淋巴细胞谱系再生的方法还包括对移植后体内的人造血细胞进行检测的步骤。8.权利要求1~4任一项所述的具备b谱系分化潜能的人造血祖细胞的制备方法、权利要求5所述的具备b谱系分化潜能的人造血祖细胞或权利要求6所述的细胞产物中的任意一种或至少两种的组合在制备药物组合物中的应用。9.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物含有权利要求5所述的具备b谱系分化潜能的人造血祖细胞和/或权利要求6所述的细胞产物；所述药物组合物还包括药学上可接受的辅料；所述药学上可接受的辅料包括载体、赋形剂或稀释剂中的任意一种或至少两种的组合。10.权利要求9所述的药物组合物在制备疾病预防药物、疾病治疗药物或疫苗中的应用；所述疾病预防药物包括提高机体免疫响应的药物；所述免疫响应包括体液免疫和/或细胞免疫；所述疾病治疗药物包括b细胞免疫缺陷治疗药物、抗病原体感染药物、抗肿瘤药物、自身免疫病治疗药物或遗传性疾病治疗药物中的任意一种或至少两种的组合；所述遗传性疾病包括血友病、溶酶体贮积症、低磷酸酯酶症或苯丙酮尿症中的任意一种或至少两种的组合；所述药物包括抗体药物。
技术总结
本发明提供了一种具备B谱系分化潜能的人造血祖细胞的制备方法及其应用，所述制备方法包括：将RUNX1、HOXA9和LHX2三个转录因子同时或者分别导入人多能干细胞诱导分化体系的细胞，并进行诱导表达与诱导分化，得到所述具备B谱系分化潜能的人造血祖细胞；所述人多能干细胞诱导分化体系的细胞包括人多能干细胞、中胚层细胞、生血内皮细胞或造血祖细胞中的任意一种或至少两种的组合；所述诱导分化的方法包括基于基质细胞共培养的单层培养诱导分化方法或类器官三维培养诱导分化方法。所述制备方法具有良好的诱导及分化效率，制备得到的细胞的活性好、分化能力高，具有重要的应用价值。具有重要的应用价值。具有重要的应用价值。
技术研发人员：王金勇 张琪 夏成祥 王瑶 王童洁 翁启童 林云轻 朱艳平
受保护的技术使用者：北京干细胞与再生医学研究院
技术研发日：2022.02.11
技术公布日：2022/3/15