技术特征：
1.一种植物外泌体的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)收集植物细胞破碎液，离心收集上清液；(2)向上清液中加入沉淀液，得混合液；所述沉淀液包括10％～12％peg8000，10％～15％甘油；(3)将混合液离心，弃上清，收集沉淀，加入pbs完全溶解沉淀，得溶解液；(4)将溶解液进行凝胶过滤层析分离，即得外泌体。2.根据权利要求1所述的植物外泌体的纯化方法，其特征在于，在所述步骤(1)中，所述离心的条件为2500rpm～3500rpm、0℃～4℃下离心25min～35min。3.根据权利要求1所述的植物外泌体的纯化方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，所述peg8000的终浓度为10mg/ml～12mg/ml。4.根据权利要求1所述的植物外泌体的纯化方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，所述混合液在0℃～4℃下放置6h～12h。5.根据权利要求1所述的植物外泌体的纯化方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，所述离心的条件为10000rpm～15000rpm、0℃～4℃下离心25min～35min。6.根据权利要求1所述的植物外泌体的纯化方法，其特征在于，在所述步骤(4)中，所述凝胶过滤层析采用的层析柱为focurose 6ff。7.根据权利要求6所述的植物外泌体的纯化方法，其特征在于，所述层析柱的粒径范围为45μm～165μm，平均粒径为85μm～95μm；柱体积为2000ml～2400ml，装料高度为120cm～150cm。8.根据权利要求1所述的植物外泌体的纯化方法，其特征在于，在所述步骤(4)中，所述凝胶过滤层析分离的条件为：平衡：用缓冲液平衡层析柱，流速为1ml/min～1.5ml/min，直到ph、电导率稳定；上样：上样量为1％～5％cv，流速为8cm/h～10cm/h；洗脱：采用pbs洗脱，流速为1ml/min～1.5ml/min，在280nm处收集洗脱峰。9.根据权利要求8所述的植物外泌体的纯化方法，其特征在于，所述缓冲液为ph6.8～ph7.2的20mm～25mm na2hpo4和0.1m～0.15m nacl。
技术总结
本发明属于外泌体分离技术领域，公开了一种植物外泌体的纯化方法，以期克服现有方法中外泌体活性不足、分离提取量少、纯度不高的技术问题。本发明的植物外泌体的纯化方法包括：收集植物细胞破碎液，离心收集上清液；向上清液中加入沉淀液，得混合液；将混合液离心，弃上清，收集沉淀，加入PBS完全溶解沉淀，得溶解液；将溶解液进行凝胶过滤层析分离，即得外泌体。本发明的方法通过PEG8000沉淀与凝胶过滤层析联合实现大规模和高纯度外泌体的分离纯化，能够同时保证外泌体的含量、纯度、生物活性，所分离的外泌体产量高，纯度高；本发明的方法效率高，操作简单，易大规模生产。易大规模生产。易大规模生产。
技术研发人员：邹衡芳 周晗 陈宁 赖云 来昌冲
受保护的技术使用者：广州远想医学生物技术有限公司
技术研发日：2022.03.02
技术公布日：2022/5/30