技术特征：
1.dna甲基化标志物组合，其特征在于，包括以下pcdhb18p、cdo1、hoxa9和lypd5四种基因每种任意至少一段甲基化片段：pcdhb18p基因：chr5:141235136-141235232：seq id no:1，chr5:141235796-141235918：seq id no:2，chr5:141235982-141236064：seq id no:3；cdo1基因：chr5:115816656-115816755：seq id no:4，chr5:115816502-115816579：seq id no:5，chr5:115816382-115816460：seq id no:6；hoxa9基因：chr7:27166431-27166523：seq id no:7，chr7:27166020-27166126：seq id no:8，chr7:27165835-27165919：seq id no:9；lypd5基因：chr19:43820817-43820923、seq id no:10，chr19:43820625-43820694、seq id no:11，chr19:43820271-43820377：seq id no:12。2.根据权利要求1所述的标志物组合，其特征在于，由以下甲基化片段组成：pcdhb18p基因：chr5:141235796-141235918：seq id no:2；cdo1基因：chr5:115816656-115816755：seq id no:4；hoxa9基因：chr7:27165835-27165919：seq id no:9；lypd5基因：chr19:43820625-43820694：seq id no:11。3.权利要求1或2所述的标志物组合在制备卵巢癌早期筛查诊断试剂中的应用。4.卵巢癌早期筛查诊断用检测引物组，其特征在于，包括对应检测权利要求1或2所述的组合中甲基化片段的甲基化状态的目标基因检测引物，所述目标基因检测引物的核苷酸序列5’端带有5-10bp长度且与3’端互补配对但不与3’端的末端的cg碱基进行配对的序列；所述目标基因检测引物的核苷酸序列的tm值高于pcr反应体系退火温度2～4℃。5.根据权利要求4所述的检测引物组，其特征在于，所述目标基因检测引物的核苷酸序列带有锁核酸修饰碱基。6.根据权利要求4所述的检测引物组，其特征在于，所述目标基因检测引物的核苷酸序列如下所示：pcdhb18p目标基因：chr5:141235136-141235232检测引物的核苷酸序列：seq id no:13～14，chr5:141235796-141235918检测引物的核苷酸序列：seq id no:16～17，chr5:141235982-141236064检测引物的核苷酸序列：seq id no:19～20；cdo1目标基因：chr5:115816656-115816755检测引物的核苷酸序列：seq id no:22～23，chr5:115816502-115816579检测引物的核苷酸序列：seq id no:25～26，
chr5:115816382-115816460检测引物的核苷酸序列：seq id no:28～29；hoxa9目标基因：chr7:27166431-27166523检测引物的核苷酸序列：seq id no:31～32，chr7:27166020-27166126检测引物的核苷酸序列：seq id no:34～35，chr7:27165835-27165919检测引物的核苷酸序列：seq id no:37～38；lypd5目标基因：chr19:43820817-43820923检测引物的核苷酸序列：seq id no:40～41，chr19:43820625-43820694检测引物的核苷酸序列：seq id no:43～44，chr19:43820271-43820377检测引物的核苷酸序列：seq id no:46～47。7.卵巢癌早期筛查诊断用检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求4-6任一所述引物组。8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包括对应检测权利要求1或2所述的组合中甲基化片段的甲基化状态的目标基因检测探针，所述目标基因检测探针的核苷酸序列如下所示：pcdhb18p基因：chr5:141235136-141235232检测探针的核苷酸序列：seq id no:15，chr5:141235796-141235918检测探针的核苷酸序列：seq id no:18，chr5:141235982-141236064检测探针的核苷酸序列：seq id no:21；cdo1基因：chr5:115816656-115816755检测探针的核苷酸序列：seq id no:24，chr5:115816502-115816579检测探针的核苷酸序列：seq id no:27，chr5:115816382-115816460检测探针的核苷酸序列：seq id no:30；hoxa9基因：chr7:27166431-27166523检测探针的核苷酸序列：seq id no:33，chr7:27166020-27166126检测探针的核苷酸序列：seq id no:36，chr7:27165835-27165919检测探针的核苷酸序列：seq id no:39；lypd5基因：chr19:43820817-43820923检测探针的核苷酸序列：seq id no:42，chr19:43820625-43820694检测探针的核苷酸序列：seq id no:45，chr19:43820271-43820377检测探针的核苷酸序列：seq id no:48。9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，还包括针对内参基因gapdh的内参基因检测引物和内参基因检测探针，所述内参基因检测引物的核苷酸序列如seq id no:49～50所示，内参基因检测探针的核苷酸序列如seq id no:51所示。10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述目标基因检测探针和内参基因检测探针的核苷酸序列5’端均标记荧光基团，3’端均标记淬灭基团，同一检测体系中各目标基因检测探针之间以及和内参基因检测探针之间标记的荧光基团不同。
技术总结
本发明公开了DNA甲基化标志物组合及应用、卵巢癌早期检测引物探针及试剂盒，其中，DNA甲基化标志物组合包括PCDHB18P、CDO1、HOXA9和LYPD5四种基因每种任意至少一段甲基化片段，针对该目标基因甲基化区域获得的检测引物及试剂盒，能够显著提升对卵巢癌检出的灵敏度，同时保持对正常及卵巢良性肿瘤的高特异性。该检测引物和探针通过分子表观遗传手段，利用甲基化检测技术对妇科恶性肿瘤可能的患者提早检出，结果准确性非常高，能够给临床医生提供辅助诊断参考，提早进行预防治疗。提早进行预防治疗。提早进行预防治疗。
技术研发人员：刘沛 王林海
受保护的技术使用者：北京起源聚禾生物科技有限公司
技术研发日：2022.03.03
技术公布日：2022/5/16