金黄色葡萄球菌的LAMP双链检测探针、试剂盒及检测方法与流程

文档序号:30204661发布日期:2022-05-31 08:47阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种金黄色葡萄球菌的lamp双链检测探针,其特征在于,所述双链检测探针包括发光探针和淬灭探针;所述发光探针包括依次连接的保守序列和环引物lf,所述保守序列的5’端标记有荧光发光基团,所述发光探针的核苷酸序列如seq id no.1所示;所述淬灭探针与所述发光探针的保守序列互补,所述淬灭探针的3’端标记有荧光淬灭基团,所述淬灭探针的核苷酸序列如seq id no.2所示。2.根据权利要求1所述的金黄色葡萄球菌的lamp双链检测探针,其特征在于,所述荧光发光基团包括fam、vic、tet;所述荧光淬灭基团包括tamra、qsy、bhq。3.一种金黄色葡萄球菌的lamp检测试剂盒,其特征在于,其包括如权利要求1或2所述的lamp双链检测探针。4.根据权利要求3所述的金黄色葡萄球菌的lamp检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括检测引物组,所述检测引物组针对金黄色葡萄球菌的isdd基因编码序列设计,所述检测引物组包括外引物f3、外引物b3、内引物fip、内引物bip;所述外引物f3的核苷酸序列如seq id no.3所示;所述外引物b3的核苷酸序列如seq id no.4所示;所述内引物fip的核苷酸序列如seq id no.5所示;所述内引物bip的核苷酸序列如seq id no.6所示。5.根据权利要求3所述的金黄色葡萄球菌的lamp检测试剂盒,其特征在于,所述双链检测探针中所述发光探针和淬灭探针的浓度比为1:1.2~1.8。6.根据权利要求4所述的金黄色葡萄球菌的lamp检测试剂盒,其特征在于,所述外引物f3和外引物b3的浓度均为0.15~0.25μm,所述内引物fip和所述内引物bip的浓度均为1.5~1.7μm。7.根据权利要求3~6任一项所述的金黄色葡萄球菌的lamp检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括以下一种或多种组分:dna聚合酶、dntps、显色剂、甜菜碱、ph调节剂、ddh2o、阳性对照品、阴性对照品;优选地,所述显色剂为酚红、甲酚或中性红。8.一种金黄色葡萄球菌的lamp检测方法,其特征在于,其包括:利用外引物f3、外引物b3、内引物fip、内引物bip以及发光探针和淬灭探针在lamp反应体系下,扩增目的基因;所述发光探针的核苷酸序列如seq id no.1所示;所述淬灭探针的核苷酸序列如seq id no.2所示;所述外引物f3的核苷酸序列如seq id no.3所示;所述外引物b3的核苷酸序列如seq id no.4所示;所述内引物fip的核苷酸序列如seq id no.5所示;所述内引物bip的核苷酸序列如seq id no.6所示。9.根据权利要求8所述的金黄色葡萄球菌的lamp检测方法,其特征在于,在所述lamp反应体系配制之前,还包括将所述发光探针和淬灭探针混合,于92~97℃下加热4~6min后,置于冰上骤冷。10.根据权利要求8所述的金黄色葡萄球菌的lamp检测方法,其特征在于,所述lamp反
应的反应温度为60~65℃下,反应时间为50~70min。

技术总结
本发明提供一种金黄色葡萄球菌的LAMP双链检测探针、试剂盒及检测方法,属于生物技术领域。该双链检测探针包括发光探针和淬灭探针;发光探针包括依次连接的保守序列和环引物LF,保守序列的5’端标记有荧光发光基团;淬灭探针与发光探针的保守序列互补,淬灭探针的3’端标记有荧光淬灭基团。LAMP检测试剂盒包括这种双链检测探针,该试剂盒及检测方法,以金黄色葡萄球菌isdD基因为检测靶标,采用双链探针-恒温变色体系,可兼具荧光定量PCR图谱分析及肉眼观察法来判读结果,探针特异性强,变色颜色对比明显,不易产生误判,双重体系互相映照,检测的准确性高。检测的准确性高。检测的准确性高。


技术研发人员:许世伟 王群智 许远 邵俊影 吴镇宇 王欣 林圣博
受保护的技术使用者:河南中检食安生物科技有限公司
技术研发日:2022.03.08
技术公布日:2022/5/30
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