技术特征：
1.一种无核酸扩增可视化的rna定量检测方法，其特征在于，所述rna定量检测方法包括：s1：设计制备crispr-cas13系统响应的rna交联dna水凝胶；s2：将s1制备的dna水凝胶固定在毛细管末端形成超薄dna水凝胶薄膜，由超薄dna水凝胶薄膜与毛细管共同组成自驱动dna水凝胶传感器；s3：设计合成靶标rna特异性的crrna；s4：将crrna、cas13蛋白和已知浓度靶标rna在适当缓冲溶液中共同孵育后，获得含有已知浓度的靶标rna分子样品溶液；s5：将自驱动dna水凝胶传感器水平浸入含有已知浓度的靶标rna分子样品溶液；s6：通过s5中溶液在毛细管中的移动距离，构建靶标rna分子浓度与移动距离之间的线性对应关系；s7：将自驱动dna水凝胶传感器水平浸入含有靶标rna分子的待测样品溶液，根据s6中线性对应关系对待测样品中靶标rna分子进行可视化检测及定量分析。2.根据权利要求1所述的rna定量检测方法，其特征在于，所述s1具体包括：s11：设计合成两条acrydite修饰的dna链，a-dna-x和a-dna-y；s12：设计合成双重功能的交联单链rna，drcl-ssrna；s13：将a-dna-x和a-dna-y分别与丙烯酰胺单体共聚，分别形成直链聚丙烯酰胺-dna pa-x和pa-y；s14：drcl-ssrna包含三个序列区域，3'-和5'-末端的两个序列分别与dna-x和dna-y互补配对，在室温下形成具有三维多孔结构的dna水凝胶。3.根据权利要求2所述的rna定量检测方法，其特征在于，所述s14中dna水凝胶的中间序列为crispr-cas13系统响应序列，即crispr-cas13系统反式切割反应的底物序列。4.根据权利要求1所述的rna定量检测方法，其特征在于，所述s5具体为：将s4所制备的自驱动dna水凝胶传感器水平浸入含有已知浓度的靶标rna分子样品溶液，在毛细作用下，含有靶标rna分子的溶液通过dna水凝胶薄膜进入毛细管。5.根据权利要求1所述的rna定量检测方法，其特征在于，所述s6毛细管中的移动距离具体为：靶标rna分子激活crispr/cas13系统的附属酶切活性，使毛细管末端的dna水凝胶薄膜的通透性增加，靶标rna分子的浓度越大，溶液在毛细管中移动距离越大，且靶标rna分子浓度与溶液在毛细管中移动距离成线性关系。
技术总结
本发明提供了一种无核酸扩增可视化的RNA定量检测方法，包括：S1：设计制备RNA交联的DNA水凝胶；S2：制备自驱动DNA水凝胶传感器；S3：设计合成的特异性的crRNA；S4：将crRNA、Cas13a蛋白和靶标RNA共同孵育含有已知浓度的靶标RNA分子样品溶液；S5：将自驱动DNA水凝胶传感器水平浸入含有已知浓度的靶标RNA分子样品溶液；S6：通过S5中样品溶液在毛细管中的移动距离，构建靶标RNA分子浓度与移动距离之间的线性对应关系；S7：进行可视化检测及定量分析，本发明利用溶液在毛细管中的距离便可实现无需核酸扩增，可视化的RNA定量检测，为RNA为靶标的分子诊断、疾病检测提供新工具。疾病检测提供新工具。疾病检测提供新工具。
技术研发人员：王辉 李正平 王洪红
受保护的技术使用者：北京科技大学
技术研发日：2022.03.11
技术公布日：2022/7/29