技术特征：
1.三种肺泡结构细胞与胶原共同三维立体培养模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、向已灭菌的培养板中各孔移入肺泡上皮细胞混悬液，静置观察细胞贴附在孔底后，移液枪吸取上清培养液；步骤2、向位于冰盒中的离心管内加入naoh，之后加入i型胶原醋酸溶液混匀，再加入dmem混匀，形成dmem等渗等离子胶原溶液；步骤3、向步骤2的离心管内加入成纤维细胞混悬液混匀，取成纤维细胞-胶原溶液分配于步骤1的培养板孔内，室温静置观察胶原溶液凝固形成三维立体成纤维细胞-肺泡上皮细胞-胶原；步骤4、向步骤3的培养板孔内加入血管内皮细胞混悬液于已经凝固的成纤维细胞-肺泡上皮细胞-胶原上面，形成血管内皮细胞层面，待血管内皮细胞贴于胶原后，用消毒药铲将胶原与培养板分离并浸漂在培养液中培养。2.如权利要求1所述的三种肺泡结构细胞与胶原共同三维立体培养模型的方法，其特征在于，所述步骤1中移入的肺泡上皮细胞混悬液为0.1-0.5ml，细胞浓度为1
×
105/ml。3.如权利要求1所述的三种肺泡结构细胞与胶原共同三维立体培养模型的方法，其特征在于，所述步骤2中加入的naoh浓度为0.1mol/l，i型胶原醋酸溶液中i型胶原的浓度为5mg/ml、醋酸溶液的浓度为0.1mol/l，加入的dmem为5
×
dmem；naoh、i型胶原醋酸溶液与5
×
dmem的体积比为1:3:0.8。4.如权利要求1所述的三种肺泡结构细胞与胶原共同三维立体培养模型的方法，其特征在于，所述步骤3中加入的成纤维细胞混悬液为3100-7460ul，细胞浓度为5
×
105/ml。5.如权利要求1所述的三种肺泡结构细胞与胶原共同三维立体培养模型的方法，其特征在于，所述步骤3取0.1-0.6ml成纤维细胞-胶原溶液分配于步骤1的培养板孔内中。6.如权利要求1所述的三种肺泡结构细胞与胶原共同三维立体培养模型的方法，其特征在于，所述步骤4中加入的血管内皮细胞混悬液为0.1-0.5ml，细胞浓度为1
×
105/ml。7.如权利要求1所述的三种肺泡结构细胞与胶原共同三维立体培养模型的方法，其特征在于，所述步骤4中待血管内皮细胞贴于胶原后，再加入0.2-0.9ml无血清培养液，用消毒匙铲将胶原与培养板分离并浸漂在培养液中培养。
技术总结
本发明公开的三种肺泡结构细胞与胶原共同三维立体培养模型的方法，包括向已灭菌的培养板中各孔移入肺泡上皮细胞混悬液，静置观察细胞贴附在孔底后，移液枪吸取上清培养液；向位于冰盒中的离心管内加入NaOH，之后加入I型胶原溶液混匀，再加入DMEM形成等渗等离子胶原溶液；向离心管内加入成纤维细胞混悬液混匀，取含成纤维细胞的胶原溶液分配于培养板孔内，室温静置观察胶原溶液凝固形成三维立体细胞胶原；向培养板孔内加入血管内皮细胞混悬液于胶原上面，形成血管内皮细胞层面，待血管内皮细胞贴于胶原后，用消毒药铲将胶原分离并浸漂在培养液中。本发明解决了现有三维立体培养方法不能模拟肺泡组织完整结构的问题。法不能模拟肺泡组织完整结构的问题。法不能模拟肺泡组织完整结构的问题。
技术研发人员：李超然 朱运奎 闫蕾 王惠
受保护的技术使用者：西安国际医学中心有限公司
技术研发日：2022.03.30
技术公布日：2022/6/7