技术特征：
1.一种检测试剂盒，其特征在于，包括：引导pfago蛋白靶向b19病毒ns1基因的gdna，具体为如序列seq id no:1所示的gt-b19、如序列seq id no:2所示的gf-b19以及如序列seq id no:3所示的gr-b19，或仅为如序列seq id no:2所示的gf-b19；带有荧光基团和猝灭基团的分子信标；pfago蛋白。2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述分子信标的序列如seq id no:4所示。3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括用于特异性扩增ns1基因上靶标序列的扩增试剂。4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述扩增试剂包括序列如seq id no:5～6所示的引物对。5.如权利要求1～4任意一项权利要求所述的检测试剂盒在非疾病诊断和治疗目的中鉴定或辅助鉴定b19病毒的应用。6.一种pfago蛋白介导的b19病毒核酸检测方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、对待测样本扩增得到tdna；s2、设立包括5’磷酸化的gdna、pfago蛋白、tdna、pfago反应缓冲液和分子信标的反应体系，进行切割反应；s3、反应结束后，对上述反应体系进行荧光检测。7.根据权利要求6所述pfago蛋白介导的b19病毒核酸检测方法，其特征在于，步骤s2所述反应体系中，gdna与pfago蛋白的摩尔比为1∶460。8.根据权利要求6所述pfago蛋白介导的b19病毒核酸检测方法，其特征在于，所述切割反应的温度为90～98℃。9.根据权利要求8所述pfago蛋白介导的b19病毒核酸检测方法，其特征在于，所述切割反应的温度为95℃。10.根据权利要求6所述pfago蛋白介导的b19病毒核酸检测方法，其特征在于，步骤s2所述反应体系中，tdna的含量≥0.1pmol。
技术总结
本发明属于B19病毒检测技术领域，公开了一种PfAgo蛋白介导的B19病毒核酸检测试剂盒及检测方法，检测试剂盒包括三条或单条引导PfAgo靶向B19病毒ns1基因的gDNA，其序列SEQ ID NO:1～3所示；gDNA引导PfAgo特异性切割B19病毒ns1基因片段，进而生成靶向荧光分子信标的gn-DNA进行第二轮切割，实现对B19病毒特异性和灵敏性检测。相对于现有的B19病毒检测方法，本发明不仅检测成本低，灵敏度高且特异性强，具有重要的实际应用价值。具有重要的实际应用价值。具有重要的实际应用价值。
技术研发人员：董衍明 马立新 王媛 罗婷 邱李炀
受保护的技术使用者：湖北大学
技术研发日：2022.04.25
技术公布日：2022/7/5