技术特征:
1.一种细胞膜囊泡,其特征在于,制备细胞膜囊泡的细胞膜表面表达cd40蛋白。2.根据权利要求1所述细胞膜囊泡,其特征在于,所述细胞膜来源于nih3t3细胞系。3.权利要求1或2所述细胞膜囊泡的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将cd40基因进行慢病毒包装,纯化病毒,利用病毒感染细胞,抗药性筛选,获得稳定表达cd40的细胞系;(2)培养稳定表达cd40的细胞系,胰酶消化,收集并裂解细胞,两次离心后取上清,再次离心后收取沉淀,过滤,得到细胞膜囊泡。4.根据权利要求3所述细胞膜囊泡的制备方法,其特征在于,步骤(1)所述慢病毒包装的原载体为plv-egfp-n,xhoi-noti插入cd40序列,重组得到目的质粒plv-cd40-egfp-n,病毒包装质粒为ph1和ph2。5.根据权利要求4所述细胞膜囊泡的制备方法,其特征在于,所述目的质粒plv-cd40-egfp-n、病毒包装质粒ph1和ph2的质量比为4:3:1配比。6.根据权利要求3所述细胞膜囊泡的制备方法,其特征在于,步骤(1)所述病毒感染的细胞为小鼠成纤维细胞系nih 3t3细胞;步骤(1)所述感染细胞采用的细胞密度为50-60%;步骤(1)所述感染细胞加入终浓度为6μg/ml的polybrene。7.根据权利要求3所述细胞膜囊泡的制备方法,其特征在于,步骤(1)所述抗药性筛选采用嘌呤霉素。8.根据权利要求3所述细胞膜囊泡的制备方法,其特征在于,包括以下1)-4)中至少一项:1)步骤(2)所述裂解细胞为利用低渗溶液裂解,并在冰上研磨;所述低渗溶液组分为0.25m sucrose、1mm edta、20mm hepes-naoh,ph为7.4;2)步骤(2)所述两次离心取上清为1000rpm离心5min后取上清,再3000g离心5min,取上清;3)步骤(2)所述离心后收取沉淀为4℃、100,000g离心30min后收取沉淀;4)步骤(2)所述过滤为依次采用过0.8和0.22μm滤头过滤7次。9.权利要求1或2所述细胞膜囊泡在制备系统性红斑狼疮治疗药物中的应用。10.根据权利要求9所述应用,其特征在于,所述系统性红斑狼疮治疗药物采用细胞膜囊泡作为载体,装载治疗系统性红斑狼疮的药物得到。
技术总结
本发明公开了一种细胞膜囊泡及其制备方法与应用。本发明的细胞膜囊泡,产生细胞膜囊泡的细胞膜表面表达CD40蛋白,能够竞争性与T细胞表面的CD40L相互作用,阻断CD40/CD40L信号轴抑制B细胞的分化成熟,进而减少自身抗体的产生,降低机体自身免疫活化水平。此外,细胞膜囊泡作为药物载体可用来负载免疫抑制剂,协同发挥免疫抑制作用,缓解SLE小鼠的症状。缓解SLE小鼠的症状。缓解SLE小鼠的症状。
技术研发人员:张旭东 梁欣 房湉靓
受保护的技术使用者:中山大学
技术研发日:2022.04.29
技术公布日:2022/7/29