技术特征：
1.一种基于raa-crispr系统的新型致病性嗜水气单胞菌双重检测方法，所述方法为非疾病诊断目的的，其特征在于，包括以下步骤：（1）对待测标本进行基因组提取，得到待测液；（2）将cas12a和crrna混合物混合孵育形成的核糖核蛋白体；（3）在步骤（2）得到的核糖核蛋白体中避光加入探针和步骤（1）得到的待测液，进行孵育以充分切割探针；（4）用对应于探针的检测方法进行结果测定；其中，步骤（2）中，所述crrna混合物包括识别靶标核酸序列aera的crrna和识别靶标核酸序列hlya的crrna。2.根据权利要求1所述的基于raa-crispr系统的新型致病性嗜水气单胞菌双重检测方法，其特征在于：步骤（1）中，所述待测标本通过naoh裂解法或试剂盒提取法进行基因组提取。3. 根据权利要求1所述的基于raa-crispr系统的新型致病性嗜水气单胞菌双重检测方法，其特征在于：步骤（2）中，所述crrna混合物包括如seq no 5所示的acr1、如seq no 6所示的acr2、如seq no 7所示的hcr1、如seq no 8所示的hcr2。4.根据权利要求1所述的基于raa-crispr系统的新型致病性嗜水气单胞菌双重检测方法，其特征在于：步骤（3）中，所述探针为5’6-fam-ttatt-3’bhq1，基于该探针，步骤（4）中的检测方法为uv手电筒或酶标仪。5. 根据权利要求1所述的基于raa-crispr系统的新型致病性嗜水气单胞菌双重检测方法，其特征在于：步骤（2）中，cas12a浓度为400-1000 nm，步骤（3）中，所述探针的浓度为300-900 nm，切割探针的时间为至少20 min。6. 根据权利要求5所述的基于raa-crispr系统的新型致病性嗜水气单胞菌双重检测方法，其特征在于：步骤（2）中，cas12a浓度为600 nm，步骤（3）中，所述探针的浓度为500 nm，切割探针的时间为25 min。7.如权利要求1-6任一项所述的基于raa-crispr系统的新型致病性嗜水气单胞菌双重检测方法用于检测水样或食物样品中的致病性嗜水气单胞菌的应用。8. 一种基于raa-crispr系统的新型致病性嗜水气单胞菌双重检测试剂盒，其特征在于：包括细胞裂解体系、cas12a、crrna混合物、探针，所述crrna混合物包括如seq no 5所示的acr1、如seq no 6所示的acr2、如seq no 7所示的hcr1、如seq no 8所示的hcr2。9.根据权利要求8所述的基于raa-crispr系统的新型致病性嗜水气单胞菌双重检测试剂盒，其特征在于：所述细胞裂解体系包括氢氧化钠溶液，所述探针5’6-fam-ttatt-3’bhq1，所述试剂盒中还包括uv手电筒。
技术总结
本发明涉及一种基于RAA-CRISPR系统的新型致病性嗜水气单胞菌双重检测方法及应用。本发明通过对致病性嗜水气单胞菌致病基因aerA和hlyA进行研究分析，首次提出基于RAA-CRISPR系统的新型致病性嗜水气单胞菌双重检测方法，设计并筛选符合检测要求的RAA引物组、crRNA序列，既通过双重检测手段降低了漏检几率，又实现了对致病性嗜水气单胞菌的简便、快速、准确、灵敏检测。灵敏检测。灵敏检测。
技术研发人员：肖星星 吴四红 林子琴 楼永良
受保护的技术使用者：温州医科大学
技术研发日：2022.04.29
技术公布日：2022/7/29