技术特征：
1.abca4基因片段，其特征在于，所述的基因片段编码abca4全长蛋白以p1150cys为分裂位点断裂得到的任意一个片段。2.根据权利要求1所述的abca4基因片段，其特征在于所述的abca4基因片段的一端含有内含肽片段；所述的内含肽选择seq id no.3所示的rma intein或seq id no.4seq id no.4所示的npu intein。3.根据权利要求2所述的abca4基因片段，其特征在于所述的abca4基因片段选自以下任意一个：(1)如seq id no.8所示的含内含肽片段的人abca4-n蛋白片段的编码基因，(2)如seq id no.9所示的含内含肽片段的人abca4-c蛋白片段的编码基因。4.一种abca4-n或abca4-c端蛋白表达框，由增强子-启动子-内含子-目的基因序列-polya信号组成，其特征在于，所述的增强子选自人214bp interphotoreceptor retinoid-binding protein enhancer增强子序列，启动子选自视网膜感光细胞特异的人rs1启动子，人rho启动子、人rk启动子或小鼠car启动子；内含子选自sv40内含子；目的基因选自含内含肽片段的人abca4-n或abca4-c蛋白片段的编码基因；polya信号序列选自sv40 polya，bgh polya，hgh polya或rbg polya序列；所述的增强子、启动子、内含子、目的基因序列和polya之间通过键或核苷酸连接序列连接；所述的人abca4-n和abca4-c蛋白片段为abca4全长蛋白以p1150cys为分裂位点断裂所得。5.根据权利要求4所述的abca4-n或abca4-c端蛋白表达框，其特征在于，所述的内含肽选择seq id no.3所示的rma intein或seq id no.4所示的npu intein；优选seq id no.3所示的rma intein。6.根据权利要求5所述的abca4-n或abca4-c端蛋白表达框，其特征在于，所述的含内含肽片段的人abca4-n端氨基酸序列如seq id no.6所示，所述的含内含肽片段的人abca4-c端氨基酸序列如seq id no.7所示。7.根据权利要求6所述的abca4-n或abca4-c端蛋白表达框，其特征在于，所述的含内含肽片段的人abca4-n蛋白片段的编码基因,其核苷酸序列如seq id no.8所示；含内含肽片段的人abca4-c蛋白片段的编码基因,其核苷酸序列如seq id no.9所示。8.根据权利要求1所述的abca4-n或abca4-c端蛋白表达框，其特征在于，所述的启动子选自rk启动子，序列如seq id no.10所示；内含子序列选自sv40内含子，序列如genbank登录号mk225672.1公开的核苷酸序列的第4863bp-4959bp所示；polya选自bgh ploya，序列如genbank登录号mt267334.1公开的核苷酸序列的第957bp-1181bp所示。9.根据权利要求4-8中任一项所述的abca4-n或abca4-c端蛋白表达框，其特征在于，所述的abca4-n端蛋白表达框的核苷酸序列如seq id no.11；所述的abca4-c端蛋白表达框的核苷酸序列如seq id no.12。10.一种载体，其特征在于含有权利要求1-3中任一项所述的abca4基因片段、或权利要求4-8中任一项所述的abca4-n或abca4-c端蛋白表达框。11.根据权利要求10所述的载体，其特征在于所述载体选自以下任意一种重组腺相关病毒载体血清型选自：aav1、aav2、aav3b、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9、aavrh10、aav-lk03或aavanc80d，优选aav2、aav5、aav8或aav9。12.一种质粒组合物，其特征在于包含权利要求10所述的含有所述的abca4-n端蛋白表
达框的载体和含有所述的abca4-c端蛋白表达框的载体；优选包含权利要求10或11所述的载体、aav的rep及cap蛋白表达质粒、辅助质粒；进一步优选包含权利要求10或11所述的载体、aav的rep及cap蛋白表达质粒paav2/8以及辅助质粒padδf6。13.一种重组腺相关病毒，其特征在于由权利要求10或11所述的载体、aav的rep及cap蛋白表达质粒以及辅助质粒共转染hek293细胞包装制备得到。14.根据权利要求13所述的重组腺相关病毒，其特征在于由权利要求10或11所述的含有abca4-n蛋白表达框的载体、aav的rep及cap蛋白表达质粒paav2/8以及辅助质粒padδf6共转染hek293细胞包装制备得到。15.根据权利要求13所述的重组腺相关病毒，其特征在于由权利要求10或11所述的含有abca4-c蛋白表达框的载体、aav的rep及cap蛋白表达质粒、辅助质粒共转染hek293细胞包装制备得到。16.一种重组腺相关病毒组合物，其特征在于包含权利要求14和权利要求15所述的重组腺相关病毒。17.权利要求1-3中任一项所述的abca4基因片段、权利要求4-8中任一项所述的abca4-n或abca4-c端蛋白表达框、权利要求10或11所述的载体、权利要求12所述的质粒组合物、权利要求13-15中任一项所述的重组腺相关病毒、权利要求16所述的重组腺相关病毒组合物在制备治疗stgdi疾病的药物中的应用。
技术总结
本发明公开了表达全长ABCA4基因的腺相关病毒载体及应用。ABCA4基因片段，所述的基因片段编码ABCA4全长蛋白以p1150Cys为分裂位点断裂得到的任意一个片段。一种重组腺相关病毒，由含有含内含肽片段的人ABCA4-N或ABCA4-C蛋白片段的编码基因的载体、AAV的Rep及Cap蛋白表达质粒、辅助质粒共转染HEK293细胞包装制备得到。利用本发明所重组腺相关病毒可在STGDI疾病模型中高效的转导视网膜光感受器细胞，并在高效地表达全长的ABCA4蛋白，实现疾病治疗的目标。的目标。的目标。
技术研发人员：杨阳 魏于全 王青楠
受保护的技术使用者：成都金唯科生物科技有限公司
技术研发日：2022.06.24
技术公布日：2022/9/20