技术特征：
1.一种检测人nras基因突变的引物和探针，其特征在于，针对2号外显子上的codon12突变g12d的引物和探针的序列为：正向引物nf1：5
′‑
tgctggtgtgaaatgactg-3
′
；反向引物nr1：5
′‑
ctggattagctggattgtca-3
′
；检测探针np1：5
′
荧光基团-aacaccatctgctc-3
′
猝灭基团；封阻探针nb1：5
′‑
cgcttttcccaacaccacctgct-3
′
phosphorylation；针对2号外显子上的codon13突变g13d的引物和探针的序列为：正向引物nf2：5
′‑
ggtgtgaaatgactgagtaca-3
′
；反向引物nr2：5
′‑
tggttctggattagctgga-3
′
；检测探针np2：5
′
荧光基团-caac+a+t+cacctgct-3
′
猝灭基团；封阻探针nb2：5
′‑
cgcttttcccaacaccacctgct-3
′
phosphorylation；针对3号外显子上的codon61突变q61k的引物和探针的序列为：正向引物nf3：5
′‑
aaacctgtttgttggacat-3
′
；反向引物nr3：5
′‑
attggtctctcatggcact-3
′
；检测探针np3：5
′
荧光基团-ctcttct+t+t+tccagc-3
′
猝灭基团；封阻探针nb3：5
′‑
cttcttgtccagctgtatccagtatgt-3
′
phosphorylation；针对3号外显子上的codon61突变q61r的引物和探针的序列为：正向引物nf4：5
′
荧光基团-ctcttctcgtccag-3
′
猝灭基团；反向引物nr4：5
′‑
attggtctctcatggcact-3
′
；检测探针np4：5
′
荧光基团-ctcttct+t+t+tccagc-3
′
猝灭基团；封阻探针nb4：5
′‑
cttcttgtccagctgtatccagtatgt-3
′
phosphorylation。2.根据权利要求1所述检测人nras基因突变的引物和探针，其特征在于，所述荧光基团为fam、hex、vic、rox或cy5；所述猝灭基团为mgb、bhq1或bhq2。3.一种检测人nras基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的引物和探针，还包括内参体系，所述内参体系引物和探针的序列为：正向引物gf1：5
′‑
gctccctctttctttgcag-3
′
；反向引物gr1：5
′‑
agtccttccacgataccaa-3
′
；内参探针gp1：5
′
荧光基团-tcctgcaccaccaactgcttag-3
′
猝灭基团。4.根据权利要求3所述检测人nras基因突变的试剂盒，其特征在于，所述荧光基团为fam、hex、vic、rox或cy5；所述猝灭基团为mgb或taqman探针。5.根据权利要求3所述检测人nras基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括10
×
dpcr buffer和dpcr酶。6.根据权利要求5所述检测人nras基因突变的试剂盒，其特征在于，所述10
×
dpcr buffer包括mg
2+
、dntp；所述dpcr酶包括taq酶和udg酶。7.根据权利要求6所述检测人nras基因突变的试剂盒，其特征在于，所述dntp包括datp、dgtp、dctp和dutp。
8.根据权利要求3所述检测人nras基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括微流控芯片，所述微流控芯片中的微腔室用于承载pcr反应体系进行pcr扩增反应。9.根据权利要求3所述检测人nras基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括油相a和油相b，按照1∶3的体积比混合后，通过50℃的加热后凝固，用于封闭微流控芯片中的微腔室。
技术总结
本发明公开了一种检测人NRAS基因突变的引物、探针和试剂盒，属于分子生物学及生物技术领域。引物和探针针对2号外显子上的Codon12突变G12D、Codon13突变G13D、3号外显子上的Codon61突变Q61K及3号外显子上的Codon61突变Q61R，试剂盒包含上述的引物和探针，还包括内参体系、10
技术研发人员：徐进 张京红 赵哲浩 张媛媛 徐刚伟 谭凯妮 姚湾 林曜华
受保护的技术使用者：湖南圣洲生物科技有限公司
技术研发日：2022.06.24
技术公布日：2022/9/8