技术特征：
1.一种t细胞的富集方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)提供清洁且干燥的网状基材，所述网状基材包括多个网线，所述网线相互交叉形成多个筛孔；(2)在所述网状基体上孵育二抗获得富集芯片；(3)获取来自外周血的pbmc细胞，制备为pbmc细胞悬液；(4)向所述pbmc细胞悬液中加入一抗，并孵育，所述一抗包括cd14、cd19和cd20中的至少一种、及cd16和cd56中的至少一种；(5)使孵育一抗后的pbmc细胞悬液流过所述富集芯片，非t细胞特异性结合至所述富集芯片，取剩余细胞液获得富集后的t细胞。2.根据权利要求1所述的富集方法，其特征在于，所述二抗为二抗羊抗鼠抗体。3.根据权利要求1所述的富集方法，其特征在于，步骤(2)中，将二抗通过traut试剂连接至所述网状基体上。4.根据权利要求3所述的富集方法，其特征在于，步骤(2)中，将二抗、traut试剂、pbs-edta溶液混合，孵育；将所述网状基体置于培养皿中，使二抗-traut混合液浸没所述网状基体，孵育；将所述网状基体转入bsa溶液中，孵育，制得包被有二抗的富集芯片。5.根据权利要求1所述的富集方法，其特征在于，步骤(3)中，将人外周血和淋巴细胞分离液混合，进行离心处理，获得pbmc层；洗涤；洗涤后加入红细胞裂解液，混匀裂解，离心且离心后弃上清；洗涤；洗涤后制备为pbmc细胞悬液。6.根据权利要求5所述的富集方法，其特征在于，步骤(3)具体实施如下：将人外周血分离稀释后加入置有淋巴细胞分离液的离心管内，离心处理，血液样本自上至下依次分为血浆层、乳白色pbmc层、分离液层和红细胞层；弃去血浆层，吸取pbmc层并置于离心管中；加入pbs洗涤；加入红细胞裂解液，充分混匀室温裂解，离心；弃上清，加入pbs对pbmc洗涤，离心；弃上清，加入pbs重悬pbmc，获得所述pbmc细胞悬液。7.根据权利要求1所述的富集方法，其特征在于，步骤(4)中，将步骤(3)的pbmc细胞混合液放于离心管中，加入cd14、cd19、cd20、cd16和cd56抗体，3～5℃孵育10～30min。8.根据权利要求7所述的富集方法，其特征在于，步骤(4)具体如下：将步骤(3)的pbmc细胞混合液放于离心管中，加入cd14、cd19、cd20、cd16和cd56抗体，3～5℃孵育10～30min，离心后弃上清，洗涤，将pbmc重悬获得孵育一抗后的pbmc细胞悬液。9.根据权利要求1所述的富集方法，其特征在于，步骤(5)中，将所述富集芯片装入富集装置的富集腔中，该富集装置具有和所述富集腔连通的加样口和排液口，所述加样口和所述排液口分别位于所述富集芯片的相对两侧；自所述加样口中加入孵育一抗后的pbmc细胞悬液，孵育；对富集腔进行抽吸，使pbmc细胞悬液流过富集芯片；自排液口将剩余细胞液排出，获得富集后的t细胞。10.根据权利要求1所述的富集方法，其特征在于，步骤(1)中，所述网线包括基底层及包被于所述基底层表面的惰性金属层，所述筛孔的面积为10-50
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10-50μm，所述网状基体的直径为10-100mm；对所述网状基体清洁及干燥的具体过程为：a、将milliq水、氨水和双氧水混合并加热，对所述网状基体清洗；b、使用milliq水浸泡所述网状基体；c、使用氮气枪干燥所述网状基体；d、用乙醇浸泡所述网状基体；e、使用氮气枪干燥所述网状基体。
技术总结
本发明公开了一种T细胞的富集方法，包括如下步骤：提供清洁且干燥的网状基材，所述网状基材包括多个网线，所述网线相互交叉形成多个筛孔；在所述网状基体上孵育二抗获得富集芯片；获取来自外周血的PBMC细胞，制备为PBMC细胞悬液；向所述PBMC细胞悬液中加入一抗，并孵育，所述一抗包括CD14、CD19和CD20中的至少一种、及CD16和CD56中的至少一种；使孵育一抗后的PBMC细胞悬液流过所述富集芯片，非T细胞特异性结合至所述富集芯片，取剩余细胞液获得富集后的T细胞。本发明的T细胞的富集方法，在不使用磁珠的前提下自血液中分离富集T细胞，且富集后的T细胞具有较高的活率。富集后的T细胞具有较高的活率。
技术研发人员：颜菁 彭靖元 王伟 王珊珊
受保护的技术使用者：江苏汇先医药技术有限公司
技术研发日：2022.06.30
技术公布日：2022/11/3