作为RSK2抑制剂的化合物及其应用的制作方法

作为rsk2抑制剂的化合物及其应用
技术领域
1.本发明属于医药化学领域，具体涉及作为rsk2抑制剂的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药，它们的制备方法以及含有这些化合物的药物组合物和这些化合物或组合物用于治疗与rsk2相关的疾病的用途。


背景技术：

2.乳腺癌是导致女性死亡的第二大原因，仅次于肺癌，是最常见的女性肿瘤。世界范围内每年约新增100万乳腺癌患者，其中大约190000名患者是三阴乳腺癌表型，比例为15％-25％。其中三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer，简称tnbc)是其中恶性程度较高的类型，主要特征为雌激素受体(estrogen receptor，简称er)、孕激素受体(progesterone receptor，pr)、人表皮生长因子-2(human epidermal growth factor receptor 2，简称her2)均为阴性(homero等人，clinical medicine insights:oncology，2018，12，1
–
10)。目前针对三阴性乳腺癌的治疗方案主要为紫杉类和蒽环类联用化疗；复发转移的晚期三阴性乳腺癌，可选择吉西他滨加卡铂或顺铂(《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范(2017版)》)，暂未有特定靶向药。因此，缺少针对三阴性乳腺癌特异靶点的小分子抑制剂的问题亟待解决。
3.p90核糖体s6激酶(rsk)家族是高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶，包括四个成员rsk1-4，他们虽然序列同源性高(73-80％)(rafael cuesta1和marina k.holz，oncotarget，2015，19，27567-27583)，但具有功能特异性。rsk蛋白包括两个不同功能结构域：c端的ctkd介导rsk活化；n端的ntkd介导底物磷酸化。其中rsk2在tnbc中高表达，并与tnbc的发展，转移和预后相关。当上游生长因子受体被激活后，主要通过两条信号通路激活rsk2：1)mek激活后促进erk磷酸化并进一步促进rsk2磷酸化；2)磷酸化pdk-1促进rsk2磷酸化。rsk被磷酸化激活后促进下游多种转录因子激活，与肿瘤细胞增殖，迁移和代谢等生物学过程密切相关。其中转录因子yb-1是一种致癌转录因子，且参与多种肿瘤的发生发展。yb-1在73％的基底样乳腺癌(blbc)中高表达，某些tnbc中p-akt缺失，但存在p-rsk和p-yb-1的激活(anna l stratford和christopher j fry，breast cancer res，2008，10(6)，r99)。p-yb-1被磷酸化后入核，启动多个基因表达，如egfr，pdl1，cd44等，这些基因在肿瘤的发展，转移，免疫逃逸和耐药等方面发挥重要作用(rama jain和michelle mathur，j.med.chem.2015，58，6766-6783；zhen tao和hailong ruan，cancer immunol res，2019，7(7)，1135-1147)。


技术实现要素：

4.本发明的一个目的是提供通式(i)所示的一类具有rsk2抑制活性的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药，
[0005][0006]
其中，
[0007]
r1选自卤代烷氧基和氨基磺酰基；
[0008]
r2选自氢、卤素、羟基、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基烷氧基、硝基、羧基、氰基、氨基、单烷基氨基、烷基酰基氨基、烷基酰基、烷基磺酰基、氨基酰基、烷基氨基酰基、双烷基氨基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基和杂芳基烷基，所述基团被一个或多个选自卤素、羟基、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基烷氧基、硝基、羧基、氰基、氨基、单烷基氨基、单烷基氨基烷基、烷基酰基氨基、烷基酰基、烷基磺酰基、氨基酰基、烷基氨基酰基、双烷基氨基、双烷基氨基烷基、烯基、炔基、卤代烷基酰基、羟基烷基酰基、环烷基酰基、杂环基酰基、环烷基、卤代环烷基、杂环基、芳基、杂芳基和氧代基团的基团取代；
[0009]
r3、r4、r5、r6、r7各自独立地选自氢、卤素、羟基、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基烷氧基、硝基、羧基、氰基、氨基、单烷基氨基、烷基酰基氨基、烷基酰基、氨基酰基、烷基氨基酰基、双烷基氨基、杂环基和环烷基；和
[0010]
x、y、z各自独立地选自n和c(r8)，其中r8各自独立地选自氢、卤素、羟基、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基烷氧基、硝基、羧基、氰基、氨基、单烷基氨基、烷基酰基氨基、烷基酰基、氨基酰基、烷基氨基酰基、双烷基氨基、杂环基和环烷基。
[0011]
本发明的另一个目的是提供制备本发明的通式(i)的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药的方法。
[0012]
本发明的再一个目的是提供包含本发明的通式(i)的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药和可药用载体的组合物，以及包含本发明的通式(i)的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药和另一种或多种药物的组合物。
[0013]
本发明的还一个目的是提供本发明的通式(i)的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药治疗rsk2介导的疾病的方法，以及本发明的通式(i)的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药在制备用于治疗rsk2介导的疾病的药物中的应用。
[0014]
针对上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
[0015]
第一方面，本发明提供通式(i)所示的一类具有rsk2抑制活性的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药，
[0016]
[0017]
其中，
[0018]
r1选自卤代烷氧基和氨基磺酰基；
[0019]
r2选自氢、卤素、羟基、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基烷氧基、硝基、羧基、氰基、氨基、单烷基氨基、烷基酰基氨基、烷基酰基、烷基磺酰基、氨基酰基、烷基氨基酰基、双烷基氨基、环烷基、环烷基烷基、杂环基、杂环基烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基和杂芳基烷基，所述基团被一个或多个选自卤素、羟基、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基烷氧基、硝基、羧基、氰基、氨基、单烷基氨基、单烷基氨基烷基、烷基酰基氨基、烷基酰基、烷基磺酰基、氨基酰基、烷基氨基酰基、双烷基氨基、双烷基氨基烷基、烯基、炔基、卤代烷基酰基、羟基烷基酰基、环烷基酰基、杂环基酰基、环烷基、卤代环烷基、杂环基、芳基、杂芳基和氧代基团的基团取代；
[0020]
r3、r4、r5、r6、r7各自独立地选自氢、卤素、羟基、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基烷氧基、硝基、羧基、氰基、氨基、单烷基氨基、烷基酰基氨基、烷基酰基、氨基酰基、烷基氨基酰基、双烷基氨基、杂环基和环烷基；和
[0021]
x、y、z各自独立地选自n和c(r8)，其中r8各自独立地选自氢、卤素、羟基、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟基烷氧基、硝基、羧基、氰基、氨基、单烷基氨基、烷基酰基氨基、烷基酰基、氨基酰基、烷基氨基酰基、双烷基氨基、杂环基和环烷基。
[0022]
在一些优选的实施方案中，本发明的化合物为通式(i)的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药，其中：
[0023]
r1选自卤代c
1-6
烷氧基和氨基磺酰基；
[0024]
进一步优选地，卤代c
1-3
烷氧基和氨基磺酰基；
[0025]
更进一步优选地，r1选自卤代甲氧基、卤代乙氧基、卤代丙氧基和氨基磺酰基。
[0026]
在一些优选的实施方案中，本发明的化合物为通式(i)的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药，其中：
[0027]
r2选自氢、卤素、羟基、c
1-6
烷基、卤代c
1-6
烷基、羟基c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷氧基、羟基c
1-6
烷氧基、硝基、羧基、氰基、氨基、单c
1-6
烷基氨基、c
1-6
烷基酰基氨基、c
1-6
烷基酰基、c
1-6
烷基磺酰基、氨基酰基、c
1-6
烷基氨基酰基、双c
1-6
烷基氨基、3-8元环烷基、3-8元环烷基c
1-6
烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基c
1-6
烷基、6-8元芳基、6-8元芳基c
1-6
烷基、5-8元杂芳基和5-8元杂芳基c
1-6
烷基，所述基团被一个或多个选自卤素、羟基、c
1-6
烷基、卤代c
1-6
烷基、羟基c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷氧基、羟基c
1-6
烷氧基、硝基、羧基、氰基、氨基、单c
1-6
烷基氨基、单c
1-6
烷基氨基c
1-6
烷基、c
1-6
烷基酰基氨基、c
1-6
烷基酰基、c
1-6
烷基磺酰基、氨基酰基、c
1-6
烷基氨基酰基、双c
1-6
烷基氨基、双c
1-6
烷基氨基c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、卤代c
1-6
烷基酰基、羟基c
1-6
烷基酰基、3-8元环烷基酰基、3-8元杂环基酰基、3-8元环烷基、卤代3-8元环烷基、3-8元杂环基、6-8元芳基、5-8元杂芳基和氧代基团的基团取代；
[0028]
进一步优选地，r2选自氢、卤素、羟基、c
1-3
烷基、卤代c
1-3
烷基、羟基c
1-3
烷基、c
1-3
烷氧基、卤代c
1-3
烷氧基、羟基c
1-3
烷氧基、硝基、羧基、氰基、氨基、单c
1-3
烷基氨基、c
1-3
烷基酰基氨基、c
1-3
烷基酰基、c
1-3
烷基磺酰基、氨基酰基、c
1-3
烷基氨基酰基、双c
1-3
烷基氨基、3-6元环烷基、3-6元环烷基c
1-3
烷基、3-6元杂环基、3-6元杂环基c
1-3
烷基、芳基、芳基c
1-3
烷基、5-6元杂芳基和5-6元杂芳基c
1-3
烷基，所述基团被一个或多个选自卤素、羟基、c
1-3
烷基、卤代c
1-3
烷基、羟基c
1-3
烷基、c
1-3
烷氧基、卤代c
1-3
烷氧基、羟基c
1-3
烷氧基、硝基、羧基、氰基、氨
基、单c
1-3
烷基氨基、单c
1-3
烷基氨基c
1-3
烷基、c
1-3
烷基酰基氨基、c
1-3
烷基酰基、c
1-3
烷基磺酰基、氨基酰基、c
1-3
烷基氨基酰基、双c
1-3
烷基氨基、双c
1-3
烷基氨基c
1-3
烷基、c
2-3
烯基、c
2-3
炔基、卤代c
1-3
烷基酰基、羟基c
1-3
烷基酰基、3-6元环烷基酰基、3-6元杂环基酰基、3-6元环烷基、卤代3-6元环烷基、3-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基和氧代基团的基团取代；
[0029]
更一步优选地，r2选自氢、氟、氯、溴、羟基、甲基、乙基、丙基、三氟甲基、羟甲基、羟乙基、2-羟乙基、羟丙基、2-羟丙基、羟异丙基、2-羟异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、卤代甲氧基、卤代乙氧基、卤代丙氧基、羟甲氧基、羟乙氧基、2-羟乙氧基、羟丙氧基、2-羟丙氧基、羟异丙氧基、硝基、羧基、氰基、氨基、甲氨基、甲酰基氨基、甲酰基、甲基磺酰基、氨基酰基、甲基氨基酰基、二甲氨基、环丙基、环丁基、3-6元环烷基c
1-3
烷基、3-6元杂环基、3-6元杂环基c
1-3
烷基、芳基、芳基c
1-3
烷基、5-6元杂芳基和5-6元杂芳基c
1-3
烷基，所述基团被一个或多个选自卤素、羟基、c
1-3
烷基、卤代c
1-3
烷基、羟基c
1-3
烷基、c
1-3
烷氧基、卤代c
1-3
烷氧基、羟基c
1-3
烷氧基、硝基、羧基、氰基、氨基、单c
1-3
烷基氨基、单c
1-3
烷基氨基c
1-3
烷基、c
1-3
烷基酰基氨基、c
1-3
烷基酰基、c
1-3
烷基磺酰基、氨基酰基、c
1-3
烷基氨基酰基、双c
1-3
烷基氨基、双c
1-3
烷基氨基c
1-3
烷基、c
2-3
烯基、c
2-3
炔基、卤代c
1-3
烷基酰基、羟基c
1-3
烷基酰基、3-6元环烷基酰基、3-6元杂环基酰基、3-6元环烷基、卤代3-6元环烷基、3-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基和氧代基团的基团取代。
[0030]
在一些优选的实施方案中，本发明的化合物为通式(i)的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药，其中：
[0031]
r3、r4、r5、r6、r7各自独立地选自氢、卤素、羟基、c
1-6
烷基、卤代c
1-6
烷基、羟基c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、卤代c
1-6
烷氧基、羟基c
1-6
烷氧基、硝基、羧基、氰基、氨基、单c
1-6
烷基氨基、c
1-6
烷基酰基氨基、c
1-6
烷基酰基、氨基酰基、c
1-6
烷基氨基酰基、双c
1-6
烷基氨基、3-8元杂环基和3-8元环烷基；
[0032]
进一步优选地，r3、r4、r5、r6、r7各自独立地选自氢、卤素、羟基、c
1-3
烷基、卤代c
1-3
烷基、羟基c
1-3
烷基、c
1-3
烷氧基、卤代c
1-3
烷氧基、羟基c
1-3
烷氧基、硝基、羧基、氰基、氨基、单c
1-3
烷基氨基、c
1-3
烷基酰基氨基、c
1-3
烷基酰基、氨基酰基、c
1-3
烷基氨基酰基、双c
1-3
烷基氨基、3-6元杂环基和3-6元环烷基；
[0033]
更进一步优选地，r3、r4、r5、r6、r7各自独立地选自氢、卤素、羟基、甲基、乙基、丙基、异丙基、卤代c
1-3
烷基、羟基c
1-3
烷基、c
1-3
烷氧基、卤代c
1-3
烷氧基、羟基c
1-3
烷氧基、硝基、羧基、氰基、氨基、单c
1-3
烷基氨基、c
1-3
烷基酰基氨基、c
1-3
烷基酰基、氨基酰基、c
1-3
烷基氨基酰基、双c
1-3
烷基氨基、3-6元杂环基和3-6元环烷基。
[0034]
根据本发明的化合物为通式(i)的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药，在一些优选的实施方案中，x为n，y为c(r8)，z为n；在一些优选的实施方案中，x为n，y为c(r8)，z为c(r8)；在一些优选的实施方案中，x为n，y为n，z为n；在一些优选的实施方案中，x为n，y为n，z为c(r8)；在一些实施方案中，x为c(r8)，y为n，z为n；在一些实施方案中，x为c(r8)，y为n，z为c(r8)；在一些实施方案中，x为c(r8)，y为c(r8)，z为n；在一些实施方案中，x为c(r8)，y为c(r8)，z为c(r8)。
[0035]
在一些优选的实施方案中，本发明的化合物为通式(i)的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药，其中：
[0036]
r8各自独立地选自氢、卤素、羟基、c
1-6
烷基、卤代c
1-6
烷基、羟基c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧
基、卤代c
1-6
烷氧基、羟基c
1-6
烷氧基、硝基、羧基、氰基、氨基、单c
1-6
烷基氨基、c
1-6
烷基酰基氨基、c
1-6
烷基酰基、氨基酰基、c
1-6
烷基氨基酰基、双c
1-6
烷基氨基、3-8元杂环基和3-8元环烷基；
[0037]
进一步优选地，r8各自独立地选自氢、卤素、羟基、c
1-3
烷基、卤代c
1-3
烷基、羟基c
1-3
烷基、c
1-3
烷氧基、卤代c
1-3
烷氧基、羟基c
1-3
烷氧基、硝基、羧基、氰基、氨基、单c
1-3
烷基氨基、c
1-3
烷基酰基氨基、c
1-3
烷基酰基、氨基酰基、c
1-3
烷基氨基酰基、双c
1-3
烷基氨基、3-6元杂环基和3-6元环烷基；
[0038]
更进一步优选地，r8各自独立地选自氢、卤素、羟基、甲基、乙基、丙基、异丙基、卤代c
1-3
烷基、羟基c
1-3
烷基、c
1-3
烷氧基、卤代c
1-3
烷氧基、羟基c
1-3
烷氧基、硝基、羧基、氰基、氨基、单c
1-3
烷基氨基、c
1-3
烷基酰基氨基、c
1-3
烷基酰基、氨基酰基、c
1-3
烷基氨基酰基、双c
1-3
烷基氨基、3-6元杂环基和3-6元环烷基。
[0039]
在一些优选的实施方案中，本发明的化合物为通式(i)的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药，其中：
[0040]
r2选自氢、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、选自氢、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、选自氢、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、和
[0041]
本发明提供以下具体化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药：
[0042]
[0043]
[0044]
[0045]
[0046]
[0047]
[0048][0049]
另一方面，本发明提供本发明的通式(i)的化合物的制备方法，包括如下步骤：
[0050][0051]
1)式(1)的化合物经反应生成式(2)的化合物；
[0052]
2)式(2)的化合物和式(3)的化合物反应生成式(4)的化合物；
[0053]
3)式(4)的化合物经反应制得式(5)的化合物；
[0054]
4)式(5)的化合物经酯水解反应制得式(6)的化合物；
[0055]
5)式(7)的化合物经还原反应制得式(8)的化合物；
[0056]
4)式(6)的化合物和式(8)的化合物经反应制得式(i)的化合物；
[0057]
其中，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、x、y和z具有通式(i)所述的定义，m不存在或为氨基保护基，式(1)的化合物、式(3)的化合物、式(7)的化合物为市售化合物或可采用本领域技术人员惯用的其它技术手段进行合成。
[0058]
第三方面，本发明提供药物组合物，其包含本发明的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药。
[0059]
在一些实施方案中，本发明提供本发明的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药及包含本发明的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药的药物组合物，所述化合物或药物组合物用于治疗与rsk2相关的疾病。
[0060]
在一些实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含本发明的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药和可药用载体。
[0061]
可以将本发明的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药与可药用载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂，以适合于经口或胃肠外给药。给药方法包括，但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内和经口途径。所述制剂可以通过任何途径施用，例如通过输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜(例如口腔粘膜或直肠等)吸收的途径施用。给药可以是全身的或局部的。经口施用制剂的实例包括固体或液体剂型，具体而言，包括片剂、丸剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、糖浆、乳剂、混悬剂等。所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂。
[0062]
第四方面，本发明提供本发明式(i)、式(ia)所示的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药，或包含其的药物组合物用于治疗与rsk2相关的疾病的方法以及在制备治疗与rsk2相关的疾病的药物中的用途。
[0063]
在一些优选的实施方案中，本发明提供本发明式(i)、式(ia)所示的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药，或包含其的药物组合物用于治疗与rsk2相关的疾病的方法以及在制备治疗与rsk2相关的疾病的药物中的用途，其中所述的rsk2相关的疾病包括但不限于癌症。在一些实施方案中，本发明所述的rsk2相关的疾病为癌症。
[0064]
在一些实施方案中，本发明所述的rsk2相关的疾病包括但不限于：乳腺癌、前列腺癌、肺癌、脑癌、皮肤癌、骨癌、卵巢癌、多发性骨髓瘤或白血病。
[0065]
在一些实施方案中，本发明提供治疗哺乳动物中与rsk活性相关的疾病或病况的方法，其中该方法包括向该哺乳动物施用治疗有效量的本发明提供的化合物或其异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、结晶或前药；在一些实施方案中，所述方法进一步包括施用第二治疗剂。在一些实施方案中，第二治疗剂为化疗剂、激素治疗剂或免疫治疗剂。在一些实施方案中，第二治疗剂为聚adp-核糖聚合酶(parp)抑制剂、stat 3抑制剂、janus激酶抑制剂或egfr抑制剂。在一些实施方案中，第二治疗剂为化疗剂(小分子或抗体)。在一些实施方案中，第二治疗剂为紫杉醇。在一些实施方案中，第二治疗剂为氨甲蝶呤。在一些实施方案中，第二治疗剂为5_氟尿嘧啶。在一些实施方案中，第二治疗剂为多柔比星。
[0066]
术语定义
[0067]
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
[0068]
本发明化合物中的“氢”、“碳”、“氧”包括其所有同位素。同位素应理解为包括具有相同原子数但具有不同质量数的那些原子。举例来说，氢的同位素包括氕、氚和氘，碳的同位素包括
12
c、
13
c和
14
c，氧的同位素包括
16
o和
18
o等。
[0069]
本发明的“异构体”是指原子组成及连接方式相同，而其三维空间排列不同的分子，包括但不限于非对映体，对映异构体，顺反异构体，和它们的混合物，如外消旋混合物。很多有机化合物都以光学活性形式存在，即它们有能力旋转平面偏振光的平面。在描述光学活性化合物时，前缀d、l或r、s用来表示分子手性中心的绝对构型。前缀d、l或(+)、(-)用来命名化合物平面偏振光旋转的符号，(-)或l是指化合物是左旋的，前缀(+)或d是指化合物是右旋的。这些立体异构体的化学结构是相同的，但其立体结构不一样。特定的立体异构体可以是对映体，异构体的混合物通常称为对映异构体混合物。50:50的对映体混合物被称为外消旋混合物或外消旋体，这可能导致化学反应过程中没有立体选择性或立体定向性。术语“外消旋混合物”和“外消旋体”是指等摩尔的两个对映异构体的混合物，缺乏光学活性。
[0070]
依据起始物料和方法的选择，本发明化合物可以以可能的异构体中的一个或它们的混合物，例如外消旋体和非对应异构体混合物(这取决于不对称碳原子的数量)的形式存在。光学活性的(r)-或(s)-异构体可使用手性合成子或手性试剂制备，或使用常规技术拆分。
[0071]
所得的任何立体异构体的混合物可以依据组分物理化学性质上的差异被分离成纯的或基本纯的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，例如，通过色谱法和/或分步结晶法。
[0072]
本发明的“卤素”是指氟、氯、溴、碘。本发明的“卤代”是指被氟、氯、溴或碘取代。
[0073]
本发明的“烷基”指直链或支链的饱和脂肪烃基团，优选含1至6个碳原子的直链或支链基团，进一步优选含有1至3个碳原子的直链或支链基团，非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基等。烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上。
[0074]
本发明的“羰基”、“酰基”均指-c(o)-。
[0075]
本发明的“磺酰基”是指-s(o)
2-。
[0076]
本发明的“磺酰胺基”是指-s(o)2nh-。
[0077]
本发明的“卤代烷基”是指至少被一个卤素取代的烷基。
[0078]
本发明的“羟基烷基”是指至少被一个羟基取代的烷基。
[0079]
本发明的“烷氧基”是指-o-烷基。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、正丙氧基、异丙氧基、异丁氧基、仲丁氧基等。烷氧基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上。
[0080]
本发明的“环烷基”是指环状的饱和烃基。合适的环烷基可以为取代或未取代的具有3-12个碳原子的单环、二环或三环饱和烃基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基。
[0081]
本发明的“杂环基”是指具有1至4个环杂原子(其中每个杂原子独立地选自氮、氧、硫、硼、磷以及硅)的3-至12-元非芳香族环系统的基团(“3-12元杂环基”)。在包含一个或多个氮原子的杂环基基团中，连接点可以是碳或氮原子，只要化合价许可。杂环基基团或者可以是单环的(“单环杂环基”)或者是融合的、桥联的或螺的环系统(例如二环系统(又称“二环杂环基”))并且可以是饱和的或可以是部分不饱和的，其中，所述的二环杂环基包括但不限于苯并氮杂环基、苯并氧杂环基、苯并硫杂环基、苯并二氮杂环基、苯并二氧杂环基、苯并
二硫杂环基、苯并氧氮杂环基、苯并硫氮杂环基。合适的杂环基包括但不限于哌啶基、氮杂环丁烷基、氮杂环丙烷基、四氢吡咯基、哌嗪基、二氢喹唑啉基、氧杂环丙基、氧杂环丁基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、二氢苯并氧杂环己烯基、二氢喹啉基、四氢喹啉基、二氢异喹啉基和四氢异喹啉基等。杂环基的每个实例可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上。
[0082]
本发明的“芳基”是指可以包含单环或稠合多环的芳香体系，优选包含单环或稠合双环的芳香体系，其含有6个至12个碳原子，优选含有约6至约10个碳原子。合适的芳基包括但不限于苯基、萘基、蒽基、芴基、茚满基。芳基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上。
[0083]
本发明的“杂芳基”是指至少有一个碳原子被杂原子替代的芳基，优选由5-12个原子构成(5-12元杂芳基)，进一步优选由5-10个原子组成(5-10元杂芳基)，所述的杂原子为o、s、n。所述杂芳基包括但不限于咪唑基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、四唑基、吲哚基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基、异吲哚基、苯并吡唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、噌啉基、喹喔啉基、苯并噁嗪基、苯并噻嗪基、咪唑并吡啶基、嘧啶并吡唑基、嘧啶并咪唑基等。杂芳基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上。
[0084]
本发明的“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。
[0085]
本发明的“溶剂化物”在常规意义上是指溶质(如活性化合物、活性化合物的盐)和溶剂(如水)组合形成的复合物。溶剂是指本领域的技术人员所知的或容易确定的溶剂。如果是水，则溶剂化物通常被称作水合物，例如半水合物、一水合物、二水合物、三水合物或其替代量等。
[0086]
具有化学式(i)的化合物的体内作用可以部分地由在给予具有化学式(i)的化合物之后在人体或动物体内形成的一种或多种代谢物来发挥。如上所述，具有化学式(i)的化合物的体内作用也可以经由前体化合物(“前药”)代谢来发挥。本发明的“前药”是指在生物体中的生理条件下，由于与酶、胃酸等反应而转化成本发明化合物的化合物，即通过酶的氧化、还原、水解等转化成本发明化合物的化合物和/或通过胃酸等的水解反应等转化成本发明化合物的化合物等。
[0087]
本发明的“结晶”是指其内部结构是在三维上规律地重复构成原子(或其集团)而形成的固体，有别于不具有这种规律的内部结构的无定形固体。
[0088]
本发明的“药物组合物”是指包含任何一种本发明所述的化合物，包括对应的异构体、前药、溶剂化物、药学上可接受的盐或其化学的保护形式，和一种或多种可药用载体和/或另一种或多种药物的混合物。药用组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。所述组合物通常用于制备治疗和/或预防由一种或多种激酶介导的疾病的药物。
[0089]
本发明的“可药用载体”是指对有机体不引起明显刺激性和不干扰所给予化合物的生物活性和性质的载体，包含所有的溶剂、稀释剂或其它赋形剂、分散剂、表面活性剂等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。除非任何常规载体介质与本发明化
合物不相容。可以作为药学上可接受的载体的一些实例包括，但不限于糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、以及纤维素和乙酸纤维素；麦芽、明胶等。
[0090]
本发明的“赋形剂”指加入到药用组合物中以进一步促进给予化合物的惰性物质。赋形剂可以包括碳酸钙、磷酸钙、多种糖类和多种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油、聚乙二醇。
具体实施方式
[0091]
下面结合实施例对本发明作进一步详细阐述，但本发明不限于这些实施例。以下实施例中使用的材料如无特殊说明均为商购获得。
[0092]
实施例1:(r)-n-(4-溴-2-(二氟甲氧基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0093][0094]
步骤1 2-乙基6-甲基1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-2,6-二羧酸酯的制备
[0095][0096]
将6-溴-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸乙酯(1.4g,5.02mmol)溶于无水二氧六环(40ml)，无水甲醇(20ml)的混合溶液中，加入醋酸钯(122mg,0.502mmol,)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(290mg,1.85mmol)，碳酸钾(3.835g,27.75mmol)。加入完毕后，在一氧化碳气体下，将反应置于70℃油浴搅拌过夜。反应完全后，将混合物抽滤，滤液用稀盐酸(2m)调节ph至4左右，减压浓缩，柱层析得标题化合物0.9g。esi-ms m/z:249.1[m+h]
+
.
[0097]
步骤2 2-乙基6-甲基(r)-1-(1-((叔丁氧羰基)氨基)丙烷-2-基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-2,6-二羧酸酯的制备
[0098][0099]
将2-乙基6-甲基1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-2,6-二羧酸酯(100mg,0.4mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(3ml)中，加入化合物(s)-5-甲基-1,2,3-氧代噻唑烷-3-甲酸叔丁酯-2,2-二氧化物(100.5mg,0.42mmol)以及碳酸铯(260.6mg,0.8mmol)。在氩气保护下，将反应置于80℃油浴搅拌过夜。反应完全后，将反应混合物抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用饱和氯化钠水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到标题化合物110mg。esi-ms m/z:406.2[m+h]
+
.
[0100]
步骤3(r)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酸甲酯的制备
[0101][0102]
将2-乙基6-甲基(r)-1-(1-((叔丁氧羰基)氨基)丙烷-2-基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-2,6-二羧酸酯(500mg,1.23mmol)溶于盐酸-二氧六环(4m,4ml)，并在室温下搅拌2小时。减压浓缩后，重新溶于乙醇(20ml)中，并加入碳酸钾(680mg,4.92mmol)，随后在80℃搅拌12小时。反应完全后，将反应混合物抽滤，用甲醇(20ml)洗涤滤饼。将滤液减压浓缩后得标题化合物250mg。esi-ms m/z:260.0[m+h]
+
.
[0103]
步骤4(r)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酸的制备
[0104][0105]
将(r)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酸甲酯(900mg，3.47mmol)溶于水(2ml)，甲醇(8ml)的混合溶液中，缓慢加入氢氧化锂(332.5mg，13.88mmol)，加入完毕后，室温搅拌12小时。反应完全后，抽滤，并将滤液减压浓缩。在浓缩物中加入甲醇(10ml)溶解，并用稀盐酸(2m)调节ph至4左右，柱层析纯化得标题化合物700mg。esi-ms m/z:246.1[m+h]
+
.
[0106]
步骤5 4-溴-2-(二氟甲氧基)-1-硝基苯的制备
[0107][0108]
将5-溴-2-硝基苯酚(500mg，2.30mmol)溶于四氢呋喃(15ml)，并在冰浴下，分三次加入氢化钠(60％，185mg，4.62mmol)。搅拌30分钟后，加入(溴二氟甲基)膦酸二乙酯(1.23g，4.61mmol)并室温搅拌12小时。反应完全后，将反应液用冰水混合物淬灭，乙酸乙酯萃取，减压浓缩得到标题化合物粗产物1.7g。esi-ms m/z:268.0[m+h]
+
,270.0[m+h]
+
.
[0109]
步骤6 4-溴-2-(二氟甲氧基)-1-苯胺的制备
[0110][0111]
将4-溴-2-(二氟甲氧基)-1-硝基苯(1.70g，6.34mmol)和氯化镍(2.47g，19.03mmol)加入乙醇(30ml)中。在冰浴搅拌下，分次加入硼氢化钠(2.40g，63.43mmol)，室温搅拌3个小时。反应完全后，过滤，减压蒸馏母液。柱层析纯化得到标题化合物200mg。esi-ms m/z:237.9[m+h]
+
,239.9[m+h]
+
.
[0112]
步骤7(r)-n-(4-溴-2-(二氟甲氧基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0113][0114]
4-溴-2-(二氟甲氧基)-1-苯胺(55mg，0.231mmol)和(r)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酸(57mg，0.231mmol)，2-氯-1-甲基吡啶碘化物(118mg，0.462mmol)，4-二甲氨基吡啶(28mg，0.231mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(5ml)，随后滴加n,n-二异丙基乙胺(90mg，0.693mmol)并在室温下搅拌12小时。反应结束后，加压浓缩，反相柱柱层析纯化，得目标化合物13mg。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.64(s,1h),8.47(d,1h,j＝8.7hz,),8.40(d,2h,j＝8.1hz,),8.02(d,1h,j＝8.2hz,),7.63(s,1h),7.58(d,1h,j＝8.6hz,),7.44(d,j＝56hz,1h),7.19(s,1h),5.05(m,1h),3.98
–
3.88(m,1h),3.54
–
3.45(m,1h),1.49(d,3h,j＝6.6hz,).esi-ms m/z:463.0[m-h]-.
[0115]
实施例2:(r)-n-(4-环丙基-2-(二氟甲氧基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0116][0117]
步骤1 4-环丙基-2-(二氟甲氧基)-1-硝基苯的制备
[0118][0119]
将4-溴-2-(二氟甲氧基)-1-硝基苯(400mg,1.49mmol)和环丙基硼酸(333mg,3.880mmol)，碳酸钾(413mg,2.985mmol)，三环己基膦(84mg,2.985mmol)，醋酸钯(34mg,0.149mmol)溶于甲苯(6ml)和水(2.5ml)中。在氩气保护下，90℃微波反应2个小时。反应完成后，减压浓缩，柱层析纯化得标题化合物312mg。esi-ms m/z:230.1[m+h]
+
.
[0120]
步骤2 4-环丙基-2-(二氟甲氧基)苯胺的制备
[0121][0122]
将4-环丙基-2-(二氟甲氧基)-1-硝基苯(312mg,1.361mmol)溶于乙醇(10ml)，随后加入钯碳(156mg,50wt％)。在氢气下，30℃搅拌12小时。反应完成后，减压浓缩，柱层析纯化得标题化合物270mg。esi-ms m/z:200.1[m+h]
+
.
[0123]
步骤3(r)-n-(4-环丙基-2-(二氟甲氧基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0124][0125]
将4-环丙基-2-(二氟甲氧基)苯胺(100mg,0.50mmol)和(r)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酸(246mg,1.0mmol)，2-氯-1-甲基吡啶碘化物(257mg,1.0mmol)，4-二甲氨基吡啶(61mg,0.50mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(5ml)，随后滴加n,n-二异丙基乙胺(195mg,1.506mmol)。反应液在室温下搅拌4小时。反应完成后，减压浓缩，反向柱层析纯化得标题化合物70mg。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.55(s,1h),8.37-8.50(m,3h),8.00(d,1h,j＝6.8hz),7.54-7.18(m,1h),7.30(d,j＝55hz,1h),7.17-6.90(m,2h),5.06-5.02(m,1h),3.95-3.92(m,1h),3.51-3.48(m,1h),1.98-1.94(m,1h),1.49(d,3h,j＝6.6hz,),0.98-0.91(m,2h),0.75-0.70(m,2h).esi-ms m/z:427.1[m+h]
+
.
[0126]
实施例3：(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-吗啉代苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0127][0128]
步骤1 4-(3-(二氟甲氧基)-4-硝基苯基)吗啉的制备
[0129][0130]
将吗啉(195mg,2.239mmol)，4-溴-2-(二氟甲氧基)-1-硝基苯(400mg,1.492mmol)，碳酸铯(973mg,2.985mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(137mg,0.149mmol)和2-二环己膦基-2'-(n,n-二甲胺)-联苯(117mg,0.298mmol)，加入1,4-二氧六环(12ml)和水(2ml)混合液中。在氩气保护下，100℃微波反应2小时。反应完成后，减压浓缩，柱层析纯化得标题化合物270mg。esi-ms m/z:275.1[m+h]
+
.
[0131]
步骤2 4-(3-(二氟甲氧基)-4-氨基苯基)吗啉的制备
[0132][0133]
将4-(3-(二氟甲氧基)-4-硝基苯基)吗啉(270mg,0.985mmol)溶于乙醇(10ml)，加
入钯碳(81mg)，并在氢气条件下，室温搅拌2小时。反应完成后，减压浓缩，柱层析纯化得标题化合物240mg。esi-ms m/z:245.1[m+h]
+
.
[0134]
步骤3(r)-n-(2-((二氟甲氧基)-4-吗啉代苯基))-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0135][0136]
将4-(3-(二氟甲氧基)-4-氨基苯基)吗啉(73mg,0.297mmol)和(r)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酸(80mg,0.326mmol)，2-氯-1-甲基吡啶碘化物(152mg,0.593mmol)，4-二甲氨基吡啶(36mg,0.297mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(5ml)，随后滴加n,n-二异丙基乙胺(115mg,0.890mmol)。反应液在室温下搅拌2小时。反应完成后，减压浓缩，柱层析纯化得标题化合物45mg。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.42(s,1h),8.35-8.40(m,2h),8.28(d,1h,j＝9.6hz),7.99(d,1h,j＝8.2hz),7.32(d,1h,j＝50hz),7.17(s,1h),7.02-6.93(m,2h),5.11-5.01(m,1h),3.97-3.88(m,1h),3.76-3.16(m,4h),3.53-3.43(m,1h),3.14-3.10(m,4h),1.49(d,3h,j＝6.5hz).esi-ms m/z:472.2[m+h]
+
.
[0137]
实施例4：(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-(4,7-二氮螺环[2.5]辛烷-7-基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0138][0139]
步骤1 7-(3-(二氟甲氧基)-4-硝基苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯的制备
[0140][0141]
将4-溴-2-(二氟甲氧基)-1-硝基苯(100mg,0.37mmol)和4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯(87mg,0.41mmol)，2-二环己膦基-2'-(n,n-二甲胺)-联苯(29mg,0.075mmol)，三(二亚苄基茚丙酮)二钯(34mg,0.037mmol)，碳酸铯(243mg,0.74mmol)，溶于1,4-二氧六环(10ml)。在氩气保护下，100℃微波反应2小时。反应结束后，过滤并将滤液中的溶剂旋干，柱层析纯化得到目标化合物50mg。esi-ms m/z:400.2[m+h]
+
.
[0142]
步骤2 7-(4-氨基-3-(二氟甲氧基)苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯的制备
[0143][0144]
将7-(3-(二氟甲氧基)-4-硝基苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯(500mg,1.25mmol)和pd/c(250mg)溶于乙醇(25ml)，并在氢气条件下，室温搅拌12个小时。反应结束后，过滤并将滤液中的溶剂旋干，柱层析纯化得到目标化合物120mg。esi-ms m/z:370.1[m+h]
+
.
[0145]
步骤3(r)-7-(3-(二氟甲氧基)-4-(9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺基)苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯的制备
[0146][0147]
将7-(4-氨基-3-(二氟甲氧基)苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯(120mg,0.32mmol)和(r)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酸(159mg,0.65mmol)，2-氯-1-甲基吡啶碘化物(166mg,0.65mmol)，4-二甲氨基吡啶(40mg,0.32mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(5ml)，随后滴加n,n'-二异丙基乙胺(126mg,0.97mmol)。反应液在室温下搅拌12小时。反应结束后，旋蒸除去溶剂，反相柱层析纯化得到目标化合物160mg。esi-ms m/z:597.2[m+h]
+
.
[0148]
步骤4(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-(4,7-二氮螺环[2.5]辛烷-7-基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0149][0150]
将(r)-7-(3-(二氟甲氧基)-4-(9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3'，2'：4,5]吡咯并[1，2-a]吡嗪-2-羧酰胺基)苯基)-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-羧酸叔丁酯(161mg,0.270mmol)溶于二氯甲烷(5ml)。然后加入氯化氢的1,4-二氧六环溶液(0.5ml，2.0mmol)，并室温搅拌2个小时。反应结束后，旋蒸除去溶剂，反相柱层析纯化得目标化合物105mg。，1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.44(s,1h),9.60(s,1h),8.30-8.40(m,2h),8.30(d,1h,j＝8.9hz),7.99(d,1h,j＝8.2hz),7.30(d,1h,j＝56hz),7.18(s,1h),7.04
–
6.93(m,2h),5.01-5.06(m,1h),3.97
–
3.85(m,1h),3.50-3.40(m,3h),3.40-3.34(m,4h),1.49(d,3h,j＝6.5hz),1.13-1.08(m,2h),1.02-0.94(m,2h).esi-ms m/z:497.1[m+h]
+
.
[0151]
实施例5：(r)-9-甲基-6-氧代-n-(2-氨磺酰基苯基)-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0152][0153]
在冰浴下，向(r)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酸(50.00mg,0.204mmol)的n,n-二甲基甲酰胺/二氯甲烷(n,n-二甲基甲酰胺1ml，二氯甲烷3ml)溶液中缓慢加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(43.0mg,0.224mmol)和1-羟基苯并三唑(30.3mg,0.224mmol)，室温下搅拌2h后加入邻氨基苯磺酰胺(35.1mg,0.204mmol)，加入完毕后，反应混合物在室温搅拌过夜。反应完毕后，减压浓缩，柱层析分离得标题化合物39mg。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ12.02(s,1h),8.69(d,1h,j＝7.1hz),8.38(s,2h),7.99-7.90(m,2h),7.65-7.60(m,3h),7.32(s,1h),7.17(s,1h),5.17-5.12(m,1h),3.95-3.89(m,1h),3.52-3.46(m,1h),1.38(d,3h,j＝67.6hz).esi-ms m/z:400.1[m+h]
+
；
[0154]
实施例6：(r)-n-(4-环丙基-2-氨磺酰基苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0155][0156]
步骤1 4-环丙基-2-氟-1-硝基苯的制备
[0157][0158]
将环丙基硼酸(2.55g,29.55mmol)，碳酸钾(6.25g,45.50mmol)，三环己基膦(1.28g,4.55mmol)和醋酸钯(0.51g,2.28mmol)加入到4-溴-2-氟-1-硝基苯(5.0g,22.75mmol)的甲苯/水(60ml甲苯，25ml水)溶液中。置换氩气3次后将反应在80℃下搅拌过夜。反应结束后，硅藻土抽滤后将滤液减压浓缩。柱层析分离得到标题化合物3.4g。esi-ms m/z:182.0[m+h]
+
.
[0159]
步骤2 5-环丙基-2-硝基苯磺酸的制备
[0160][0161]
将4-环丙基-2-氟-1-硝基苯(2.80g,15.46mmol)的乙醇(30ml)溶液加入到亚硫酸钠(4.48g,35.55mmol)的乙醇/水(40/50ml)悬浮液中。随后该反应在90℃下搅拌过夜。反应完毕后，减压浓缩体系后加入氯化氢二氧六环溶液(4n，40ml)并常温搅拌2小时。抽滤并用甲醇洗涤滤饼后减压浓缩滤液得标题化合物1.5g。esi-ms m/z:242.0[m-h]-.
[0162]
步骤3 5-环丙基-2-硝基苯磺酰胺的制备
[0163][0164]
将n,n-二甲基甲酰胺(0.2ml)加入到5-环丙基-2-硝基苯磺酸(1.50g,6.17mmol)的氯化亚砜(15ml)中。随后反应在90℃下搅拌3小时。反应结束后，减压浓缩，并将浓缩液加入到氨甲醇溶液(7n，50ml，350.0mmol)中，在常温下搅拌2个小时。反应完毕后，抽滤并将滤液减压浓缩得标题化合物1.5g。esi-ms m/z:241.0[m-h]-.
[0165]
步骤4((5-环丙基-2-硝基苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯的制备
[0166][0167]
将三乙胺(937mg,9.26mmol)，4-二甲氨基吡啶(75mg,0.62mmol)和二碳酸二叔丁酯(1.41g,6.48mmol)加入到4-氯-2硝基苯磺酰胺(1.50g,6.17mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中。随后反应在常温搅拌过夜。反应完毕后，加入水并用二氯甲烷萃取。有机相用饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥。减压浓缩得标题化合物2.00g。esi-ms m/z:341.1[m-h]-.
[0168]
步骤5((2-氨基-5-环丙基苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯的制备
[0169][0170]
在冰水浴下，将硼氢化钠(221.0mg,5.84mmol)加入氯化镍(151.4mg,1.17mmol)和((5-环丙基-2-硝基苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯(200.0mg,0.58mmol)的乙醇(4ml)溶液中。随后反应在室温下搅拌过夜。反应完毕后，硅藻土抽滤，减压浓缩后用柱层析分离纯化得到标题化合物100mg。esi-ms m/z:311.1[m-h]-.
[0171]
步骤6(r)-((5-环丙基-2-(9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺基)苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯的制备
[0172][0173]
将((2-氨基-5-环丙基苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯(55.8mg,0.18mmol)，2-氯-1-甲基吡啶碘化物(93.6mg,0.37mmol)，n,n-二异丙基乙胺(71.1mg,0.55mmol)和4-二甲氨基吡啶(1.8mg,0.02mmol)加入到(r)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酸(45.0mg,0.18mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(1.5ml)溶液中。随后反应在常温下搅拌过夜。反应完毕后，加入水和二氯甲烷萃取，有机相用饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥。减压浓缩后得标题化合物30mg。esi-ms m/z:540.2[m+h]
+
.
[0174]
步骤7(r)-n-(4-环丙基-2-氨磺酰基苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0175][0176]
将氯化氢二氧六环溶液(5ml，4n，20mmol)加入到(r)-((5-环丙基-2-(9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺基)苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯(97.1mg,0.18mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液中。随后反应在常温搅拌过夜。反应完毕后，减压浓缩并柱层析分离纯化得标题化合物10mg。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.95(s,1h),8.58(d,1h,j＝8.4hz),8.37-8.36(m,2h),8.01(d,1h,j＝8.0hz),7.73-7.51(m,3h),7.40(d,1h,j＝7.6hz),7.17(s,1h),5.15(s,1h),3.94(d,1h,j＝13.6hz),3.52(d,1h,j＝8.8hz),2.03-2.00(m,1h),1.47(d,3h j＝5.2hz),1.02(d,2h,j＝7.2hz),0.07(d,2h,j＝1.2hz).esi-ms m/z:440.1[m+h
+
]
+
.
[0177]
实施例7：(r)-9-甲基-n-(4-吗啉代-2-氨磺酰基苯基)-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0178][0179]
步骤1((5-溴-2-硝基苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯的制备
[0180][0181]
制备方法同实施例6的步骤2-4，不同的是将原料4-环丙基-2-氟-1-硝基苯替换为4-溴-2-氟-1-硝基苯，制得标题化合物。esi-ms m/z:381.0[m+h]
+
,383.0[m+h]
+
[0182]
步骤2((5-吗啉代-2-硝基苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯的制备
[0183][0184]
将化合物((5-溴-2-硝基苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯(500mg,1.31mmol)，吗啉(230mg,2.62mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(120mg,0.131mmol)，2-二环己膦基-2'-(n,n-二甲胺)-联苯(100mg,0.262mmol),碳酸铯(850mg,2.6mmol)加入1,4-二氧六环(10ml)与水(2ml)的混合溶剂之中。在氩气保护下，升温100℃搅拌反应12小时。反应结束后，硅藻土抽滤，减压除去溶剂后，加入乙酸乙酯溶解。该有机溶液用水洗两次后，用无水硫酸钠干燥，减压除去乙酸乙酯得到标题化合物500mg。esi-ms m/z:386.1[m-h]-.
[0185]
步骤3(2-氨基-5-吗啉代苯基)磺酰基氨基甲酸叔丁酯的制备
[0186][0187]
将化合物((5-吗啉代-2-硝基苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯(500mg,1.3mmol)溶于乙醇(20ml)之中，再加入氯化镍(510mg,3.9mmol)。然后在冰浴下加入硼氢化钠(490mg,13mmol)，并室温搅拌反应2小时。反应结束后，硅藻土抽滤，旋干滤液后，柱层析分离纯化得目标化合物335mg。esi-ms m/z:356.1[m-h]-.
[0188]
步骤4(r)-((2-(9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺基)-5-吗啉代苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁基酯的制备
[0189][0190]
将化合物(2-氨基-5-吗啉代苯基)磺酰基氨基甲酸叔丁酯(110mg,0.3mmol)，化合物(r)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酸(50mg,0.2mmol)，2-氯-1-甲基吡啶碘化物(80mg,0.3mmol)，n,n-二异丙基乙胺(62mg,0.48mmol)，4-二甲氨基吡啶(2.4mg,0.02mmol)加入无水n,n-二甲基甲酰胺(2ml)之中，室温下搅拌反应3小时。反应完毕后，加入水和二氯甲烷萃取，有机相用饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥。减压除去溶剂后，柱层析分离纯化得到目标化合物60mg。esi-ms m/z:585.2[m+h]
+
.
[0191]
步骤5(r)-9-甲基-n-(4-吗啉代-2-氨磺酰基苯基)-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0192][0193]
将(r)-((2-(9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺基)-5-吗啉代苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯(60mg,0.10mmol)，溶于二氯甲烷(5ml)之中。随后加入氯化氢二氧六环(4n,10ml,40mmol)，室温搅拌反应3个小时。反应结束后，减压除去溶剂，柱层析分离纯化得到标题化合物12mg。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.82(s,1h),8.55(d,1h,j＝8.9hz),8.36(s,2h),7.99(d,1h,j＝8.1hz),7.60-7.50(m,2h),7.44(s,1h),7.29(d,1h,j＝9.0hz),7.16(s,1h),3.99
–
3.87(m,1h),3.84
–
3.70(m,4h),3.57
–
3.45(m,2h),3.19
–
3.12(m,4h),1.47(d,3h,j＝5.5hz).esi-ms m/z:485.0[m+h]
+
[0194]
实施例8：(r)-n-(4-(环丙基甲氧基)-2-氨磺酰基苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0195]
[0196]
步骤1 4-(环丙基甲氧基)-2-氟-1-硝基苯的制备
[0197][0198]
将3-氟-4-硝基苯酚(10.00g,63.69mmol)加入到乙腈(150ml)中，随后加入碳酸钾(11.00g,79.61mmol)，在室温搅拌下加入溴甲基环丙烷(,12.89g,95.48mmol)。加入完毕后，反应体系于80℃搅拌过夜。反应完毕后，将反应液抽滤，滤液减压浓缩，柱层析分离纯化得标题化合物18g。esi-ms m/z:212.2[m+h]
+
.
[0199]
步骤2 5-(环丙基甲氧基)-2-硝基苯磺酸的制备
[0200][0201]
将亚硫酸钠(17.86g,141.60mmol)加入到乙醇/水(160/200ml)中，室温搅拌下加入4-(环丙基甲氧基)-2-氟-1-硝基苯(13.00g,61.50mmol)的乙醇(40ml)溶液，加入完毕后，反应体系于70℃搅拌过夜。反应完毕后，用盐酸水溶液(2n)将反应液ph值调至2后减压除去溶剂。所得到的粗产物中加入饱和氯化钠溶液(40ml)，并在100℃下加热搅拌2小时。冷却至室温后，在冰浴下加入甲醇(200ml)。抽滤反应混合物后，减压蒸馏除去滤液中的有机溶剂，得到标题化合物16.10g。esi-ms m/z:272.0[m-h]-.
[0202]
步骤3 5-(环丙基甲氧基)-2-硝基苯磺酰胺的制备
[0203][0204]
室温搅拌下，向5-(环丙基甲氧基)-2-硝基苯磺酸(5.20g,19.0mmol)的氯化亚砜(40ml)溶液中加入n,n-二甲基甲酰胺(0.5ml)，加入完毕后，反应体系于70℃搅拌1小时。反应完毕后，减压浓缩，反应体系加水和二氯甲烷萃取，有机相用饱和碳酸氢钠洗1次，饱和氯化钠溶液洗1次，无水硫酸钠干燥，抽滤并减压浓缩。随后加入甲醇(20ml)，并缓慢加入nh3(35ml)甲醇溶液。加入完毕后，反应体系室温下搅拌1小时。反应完毕后，减压浓缩得标题化合物4.20g。esi-ms m/z:271.0[m-h]-.
[0205]
步骤4((5-(环丙基甲氧基)-2-硝基苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯的制备
[0206][0207]
在室温搅拌下，向5-(环丙基甲氧基)-2-硝基苯磺酰胺(250.00mg,0.92mmol)的二氯甲烷(8ml)溶液中缓慢加入4-二甲氨基吡啶(11.23mg,0.092mmol)和三乙胺(139.50mg,1.38mmol)。随后加入二碳酸二叔丁酯(220.60mg,1.01mmol)，加入完毕后，反应体系在室温下搅拌3小时。反应完毕后，反应体系水洗2次，饱和氯化钠溶液洗1次，有机相用无水硫酸钠干燥，抽滤。将滤液减压浓缩得标题化合物320mg。esi-ms m/z:371.1[m-h]-.
[0208]
步骤5((2-氨基-5-(环丙基甲氧基)苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯的制备
[0209][0210]
室温搅拌下，向((5-(环丙基甲氧基)-2-硝基苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯(400.00mg,1.10mmol)的乙醇(12ml)溶液中缓慢加入氯化镍(417.90mg,3.20mmol)。随后在冰浴冷却后，将硼氢化钠(406.60mg,10.7mmol)分3批次加入到反应液中。加入完毕后，反应体系在室温下搅拌2小时。反应完毕后，抽滤，并将滤液减压浓缩，反向柱层析得标题化合物80mg。esi-ms m/z:341.1[m-h]-.
[0211]
步骤6(r)-((5-(环丙基甲氧基)-2-(9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺基)苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯的制备
[0212][0213]
制备方法同实施例6的步骤6，不同的是将原料((2-氨基-5-环丙基苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯替换为((2-氨基-5-(环丙基甲氧基)苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯，制得标题化合物。esi-ms m/z:568.3[m-h]-.
[0214]
步骤7:(r)-n-(4-(环丙基甲氧基)-2-氨磺酰基苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0215][0216]
制备方法同实施例6的步骤7，不同的是将原料(r)-((5-环丙基-2-(9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺基)苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯替换为(r)-((5-(环丙基甲氧基)-2-(9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺基)苯基)磺酰基)氨基甲酸叔丁酯，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.83(s,1h),8.58(d,1h,j＝9.1hz),8.36(d,2h,j＝8.2hz),7.99(d,1h,j＝8.2hz),7.66(s,2h),7.44(s,1h),7.27(d,1h,j＝9.1hz),7.16(s,1h),5.14(m,1h),3.91(m,3h),3.51(m,1h,j＝8.4hz),1.46(d,3h,j＝6.5hz),1.25(m,1h),0.60(m,2h),0.36(m,2h).esi-ms m/z:470.1[m+h]
+
.
[0217]
实施例9:(r)-n-(2-(二氟甲氧基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0218][0219]
制备方法同实施例1的制备方法，不同的是将原料5-溴-2-硝基苯酚替换为2-硝基苯酚，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.65(s,1h),8.52(d,1h,j＝7.7hz),8.40(d,1h,j＝8.2hz),8.39(s,1h),8.02(d,1h,j＝8.2hz),7.36(t,1h,j＝54hz,),7.30-7.35(m,2h),7.27-7.15(m,2h),5.07-5.0(m,1h),3.98-3.87(m,1h),3.54-3.42(m,1h),1.50(d,3h,j＝6.5hz).esi-ms m/z:387.0[m+h]
+
.
[0220]
实施例10:(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-(四氢-2h-吡喃-4-基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0221][0222]
制备方法同实施例2的制备方法，不同的是将步骤1中的原料环丙基硼酸替换为3,6-二氢-2h-吡喃-4-硼酸频哪醇酯，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.58(s,1h),8.48-8.31(m,3h),8.01(d,1h,j＝8.1hz),7.38(t,1h,j＝72hz),7.26(d,2h,j＝7.1hz),7.18(s,1h),5.06(s,1h),3.97-3.90(m,2h),3.58-3.38(m,4h),2.85-2.76(m,1h),1.79-1.63(m,4h),1.49(d,3h,j＝6.3hz).esi-ms m/z:469.1[m-h]-[0223]
实施例11:(r)-n-(4-(1-乙酰基哌啶-4-基)-2-(二氟甲氧基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0224][0225]
制备方法同实施例2的制备方法，不同的是将步骤1中的原料环丙基硼酸替换为1-乙酰基-5,6-二氢-2h-吡啶-4-硼酸频哪醇酯，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.58(s,1h),8.46-8.31(m,3h),8.01(d,1h,j＝8.2hz),7.37(t,1h,j＝76hz),7.25(d,2h,j＝13.1hz),7.18(s,1h),5.05(s,1h),4.63-4.49(m,1h),4.01-3.87(m,2h),3.57-3.44(m,1h),3.20-3.08(m,1h),2.85-2.75(m,1h),2.65-2.54(m,1h),2.04(s,3h),1.88-1.75(m,2h),1.67-1.56(m,1h),1.49(d,3h,j＝6.4hz),1.46-1.40(m,1h).esi-ms m/z:512.2[m+h]
+
[0226]
实施例12:(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0227][0228]
制备方法同实施例2的制备方法，不同的是将步骤1中的原料环丙基硼酸替换为1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1h-吡唑，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.62(s,1h),8.48(d,1h,j＝8.3hz),8.39(d,2h,j＝7.2hz),8.19(s,1h),8.02(d,1h,j＝8.1hz),7.91(s,1h),7.55(d,2h,j＝9.4hz),7.42(t,1h,j＝76hz),7.19(s,1h),5.13-5.01(m,1h),4.01-3.91(m,1h),3.88(s,3h),3.55-3.48(m,1h),1.51(d,3h,j＝6.3hz).esi-ms m/z:467.2[m+h]
+
[0229]
实施例13:(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-(1,3,5-三甲基-1h-吡唑-4-基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0230][0231]
制备方法同实施例2的制备方法，不同的是将步骤1中的原料环丙基硼酸替换为1,3,5-三甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)-1h-吡唑，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.65(s,1h),8.54(d,1h,j＝8.3hz),8.40(d,2h,j＝8.0hz),8.03(d,1h,j＝8.2hz),7.41(t,1h,j＝76hz),7.35-7.16(m,3h),5.17-4.99(m,1h),4.01-3.89(m,1h),3.72(s,3h),3.55-3.47(m,1h),2.30(d,3h,j＝25.9hz),2.17(s,3h),1.51(d,3h,j＝6.4hz).esi-ms m/z:495.2[m+h]
+
[0232]
实施例14:(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-(3,5-二甲基异噁唑-4-基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0233][0234]
制备方法同实施例2的制备方法，不同的是将步骤1中的原料环丙基硼酸替换为3,5-二甲基异噁唑-4-硼酸频哪醇酯，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.71(s,1h),8.61(d,1h,j＝8.8hz),8.41(d,2h,j＝8.2hz),8.04(d,1h,j＝8.2hz),7.44(t,1h,j＝72hz),7.40(s,2h),7.20(s,1h),5.11-5.03(m,1h),3.99-3.89(m,1h),3.54-3.46(m,1h),2.45(s,3h),2.28(s,3h),1.51(d,3h,j＝6.4hz).esi-ms m/z:482.2[m+h]
+
[0235]
实施例15:(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7，8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0236][0237]
制备方法同实施例2的制备方法，不同的是将步骤1中的原料环丙基硼酸替换为n,n-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1h-吡唑-1-乙胺，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.63(s,1h),8.50(d,1h,j＝8.9hz),8.40(d,2h,j＝8.1hz),8.29(s,1h),8.05-7.99(m,2h),7.59(t,2h,j＝7.6hz),7.42(t,1h,j＝84hz),7.19(s,1h),5.11-5.04(m,1h),4.39(s,2h),3.96-3.91(m,1h),3.51-3.49(m,1h),3.32-3.31(m,6h),3.15(s,2h),1.50(d,3h,j＝6.5hz).esi-ms m/z:524.2[m+h]
+
[0238]
实施例16：(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-(1-(3-(二甲基氨基)丙基)-1h-吡唑-4-基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7，8,9-四氢吡啶并[3',2':4.5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0239][0240]
制备方法同实施例2的制备方法，不同的是将步骤1中的原料环丙基硼酸替换为n,n-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1h-吡唑-1-丙胺，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.62(s,1h),8.48(d,1h,j＝8.2hz),8.40(d,2h,j＝8.1hz),8.24(s,1h),8.17(s,1h),8.02(d,1h,j＝8.2hz),7.93(s,1h),7.58(s,1h),7.42(t,1h,j＝56hz),7.19(s,1h),5.13-4.97(m,1h),4.16(t,2h,j＝6.8hz),3.98-3.89(m,1h),3.54-3.45(m,1h),2.35-2.25(m,2h),2.21(s,6h),2.00-1.92(m,2h),1.50(d,3h,j＝6.5hz).esi-ms m/z:538.2[m+h]
+
[0241]
实施例17：(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-6-(四氢-2h-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0242][0243]
制备方法同实施例2的制备方法，不同的是将原料4-溴-2-(二氟甲氧基)-1-硝基苯和环丙基硼酸替换为6-氯-2-(二氟甲氧基)-3-硝基吡啶3,6-二氢-2h-吡喃-4-硼酸频哪
醇酯，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.42(s,1h),8.65(d,1h,j＝8.1hz),8.39(d,2h,j＝8.0hz),8.00(d,1h,j＝8.1hz),7.81(t,1h,j＝80hz),7.26(d,1h,j＝8.1hz),7.19(s,1h),5.12-4.97(m,1h),4.01-3.92(m,2h),3.92-3.85(m,1h),3.57-3.38(m,3h),2.97-2.81(m,1h),1.86-1.67(m,4h),1.54(d,3h,j＝6.4hz).esi-ms m/z:472.2[m+h]
+
[0244]
实施例18：(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-(1-(3-(二甲基氨基)丙基)-1h-吡唑-4-基)-5-氟苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0245][0246]
制备方法同实施例2的制备方法，不同的是将步骤1中的原料4-溴-2-(二氟甲氧基)-1-硝基苯和环丙基硼酸替换为1-溴-5-(二氟甲氧基)-2-氟-4-硝基苯和n,n-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1h-吡唑-1-丙胺，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.68(s,1h),8.41(d,3h,j＝8.8hz),8.22(s,1h),8.03(d,1h,j＝8.1hz),7.96(s,1h),7.75(d,1h,j＝6.8hz),7.40(t,1h,j＝72hz),7.20(s,1h),5.10-5.02(m,1h),4.19(t,2h,j＝6.7hz),3.97-3.91(m,1h),3.51-3.48(m,1h),2.26(d,2h,j＝6.8hz),2.19(s,6h),2.00-1.93(m,2h),1.50(d,3h,j＝6.5hz).esi-ms m/z:556.2[m+h]
+
[0247]
实施例19：(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0248][0249]
制备方法同实施例3的制备方法，不同的是将步骤1中的原料吗啉替换为n-甲基哌嗪，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.42(s,1h),8.37(d,2h,j＝7.9hz),8.27(d,1h,j＝9.6hz),7.99(d,1h,j＝8.2hz),7.34(t,1h,j＝76hz),7.16(d,1h,j＝7.5hz),6.93(s,2h),5.15-5.05(m,1h),3.96-3.89(m,1h),3.52-3.47(m,1h),3.24-3.15(m,4h),2.61-2.54(m,4h),2.32(s,3h),1.49(d,3h,j＝6.4hz).esi-ms m/z:485.2[m+h]
+
[0250]
实施例20:(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-((s)-2,4-二甲基哌嗪-1-基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0251][0252]
制备方法同实施例3的制备方法，不同的是将步骤1中的原料吗啉替换为3-(s)-1,3-二甲基哌嗪，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.41(s,1h),8.37(d,2h,j＝8.1hz),8.27(d,1h,j＝8.7hz),7.99(d,1h,j＝8.2hz),7.33(t,1h,j＝78hz),7.17(s,1h),6.89(d,2h,j＝9.6hz),5.11-5.01(m,1h),4.03(s,1h),3.97-3.88(m,1h),3.52-3.46(m,1h),3.40(m,1h),3.16(s,1h),3.01(m,2h),2.86(m,2h),2.35(s,3h),1.48(d,3h,j＝6.5hz),1.05(d,3h,j＝6.4hz).esi-ms m/z:499.2[m+h]
+
[0253]
实施例21:(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-((r)-2,4-二甲基哌嗪-1-基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0254][0255]
制备方法同实施例3的制备方法，不同的是将步骤1中的原料吗啉替换为(r)-1,3-二甲基哌嗪二盐酸盐，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.40(s,1h),8.37(d,2h,j＝7.8hz),8.25(d,1h,j＝8.7hz),7.99(d,1h,j＝8.1hz),7.33(t,1h,j＝78hz),7.17(s,1h),6.88(d,2h,j＝8.4hz),5.11-5.00(m,1h),4.02(s,1h),3.97-3.89(m,1h),3.51-3.45(m,1h),3.10-2.94(m,2h),2.87(s,1h),2.71(d,1h,j＝23.4hz),2.28(s,3h),2.06-1.91(m,2h),1.48(d,3h,j＝6.5hz),1.05(d,3h,j＝6.4hz).esi-ms m/z:499.2[m+h]
+
[0256]
实施例22:(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-(4,4-二氟哌啶-1-基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0257][0258]
制备方法同实施例3的制备方法，不同的是将步骤1中的原料吗啉替换为4,4-二氟哌啶，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.43(s,1h),8.37(d,2h,j＝7.8hz),
8.28(d,1h,j＝8.7hz),7.99(d,1h,j＝8.2hz),7.35(t,1h,j＝78hz),7.17(s,1h),7.00(d,2h,j＝8.2hz),5.11-5.01(m,1h),3.98-3.88(m,1h),3.52-3.45(m,1h),3.37(s,4h),2.07(t,4h,j＝13.5hz),1.49(d,3h,j＝6.4hz).esi-ms m/z:506.2[m+h]
+
.
[0259]
实施例23:(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0260][0261]
制备方法同实施例3的制备方法，不同的是将步骤1中的原料吗啉替换为n-羟乙基哌嗪，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,meod):δ8.36(m,3h),8.06(d,1h j＝7.5hz),7.27(s,1h),7.00(t,1h,j＝72hz),6.96(d,2h,j＝12.2hz),6.81(s,1h),5.23-5.18(m,1h),4.05-3.99(m,1h),3.86-3.79(m,2h),3.63-3.56(m,2h),3.39-3.34(m,4h),3.14-3.07(m,4h),2.99-2.94(m,2h),1.57(d,3h j＝5.1hz).esi-ms m/z:515.3[m+h]
+
[0262]
实施例24:(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)哌嗪-1-基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0263][0264]
制备方法同实施例3的制备方法，不同的是将步骤1中的原料吗啉替换为n,n-二甲基-2-(哌嗪-1-基)乙-1-胺，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,meod):δ8.53(s,1h),8.38-8.30(m,2h),8.06(d,1h,j＝8.2hz),7.27(s,1h),6.98(t,1h,j＝78hz),6.96-6.85(m,2h),5.23-5.17(m,1h),4.06-3.99(m,1h),3.62-3.57(m,1h),3.26(s,8h),3.07(s,2h),2.73(s,8h),1.57(d,3h,j＝6.6hz).esi-ms m/z:542.3[m+h]
+
.
[0265]
实施例25:(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0266]
[0267]
制备方法同实施例3的制备方法，不同的是将步骤1中的原料吗啉替换为4-二甲氨基哌啶，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.42(s,1h),9.39(s,1h),8.37(d,2h,j＝7.6hz),8.27(d,1h,j＝9.7hz),7.99(d,1h,j＝8.2hz),7.34(t,1h,j＝72hz),7.18(s,1h),6.96(s,2h),5.11-5.01(m,1h),3.97-3.81(m,3h),3.52-3.43(m,1h),2.92-2.61(m,8h),2.11-2.01(m,2h),1.74-1.60(m,2h),1.49(d,3h,j＝6.5hz).esi-ms m/z:513.3[m+h]
+
.
[0268]
实施例26：(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-(4-羟基-4-(三氟甲基)哌啶-1-基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0269][0270]
制备方法同实施例3的制备方法，不同的是将步骤1中的原料吗啉替换为4-(三氟甲基)哌啶-4-醇，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.42(s,1h),8.37(d,2h,j＝7.9hz),8.26(d,1h,j＝9.6hz),7.99(d,1h,j＝8.2hz),7.35(t,1h,j＝78hz),7.17(s,1h),6.96(s,2h),6.02(s,1h),5.11-5.01(m,1h),3.97-3.89(m,1h),3.67(d,2h,j＝12.5hz),3.52-3.46(m,1h),2.99(t,2h,j＝11.2hz),1.87-1.68(m,4h),1.49(d,3h,j＝6.4hz).esi-ms m/z:554.2[m+h]
+
.
[0271]
实施例27：(r)-n-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-(二氟甲氧基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0272][0273]
制备方法同实施例3的制备方法，不同的是将步骤1中的原料吗啉替换为1-乙酰哌嗪，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.43(s,1h),8.37(d,2h,j＝8.2hz),8.29(d,1h,j＝9.2hz),7.99(d,1h,j＝8.2hz),7.34(t,1h,j＝72hz),7.17(s,1h),6.95(d,2h,j＝7.7hz),5.06(m,1h),3.98-3.85(m,1h),3.64-3.55(m,4h),3.53-3.44(m,1h),3.20-3.14(m,4h),2.05(s,3h),1.49(d,3h,j＝6.5hz).esi-ms m/z:513.2[m+h]
+
.
[0274]
实施例28：(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0275][0276]
制备方法同实施例3的制备方法，不同的是将步骤1中的原料吗啉替换为4-甲基-4-羟基哌啶，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.39(s,1h),8.36(d,2h,j＝7.9hz),8.23(d,1h,j＝8.6hz),7.98(d,1h,j＝8.2hz),7.33(t,1h,j＝76hz),7.17(s,1h),6.91(d,2h,j＝8.8hz),5.06(s,1h),4.33(s,1h),3.97-3.88(m,1h),3.53-3.44(m,1h),3.38-3.34(m,2h),3.20-3.09(m,2h),1.63-1.53(m,4h),1.49(d,3h,j＝6.5hz),1.16(s,3h).esi-ms m/z:500.2[m+h]
+
.
[0277]
实施例29：(r)-n-(2-(二氟甲氧基)-4-(4-甲氧基哌啶-1-基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并
[0278]
[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0279][0280]
制备方法同实施例3的制备方法，不同的是将步骤1中的原料吗啉替换为4-甲氧基哌啶，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.40(s,1h),8.36(d,2h,j＝6.9hz),8.24(d,1h,j＝9.0hz),7.98(d,1h,j＝8.2hz),7.33(t,1h,j＝72hz),7.17(s,1h),6.98-6.88(m,2h),5.11-5.00(m,1h),3.98-3.87(m,1h),3.52-3.46(m,3h),3.28(s,3h),3.00-2.87(m,3h),2.00-1.89(m,2h),1.59-1.51(m,2h),1.48(d,3h,j＝6.1hz).esi-ms m/z:500.2[m+h]
+
.
[0281]
实施例30：(r)-n-(4-(4-(2,2-二氟乙基)哌嗪-1-基)-2-(二氟甲氧基)苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0282][0283]
制备方法同实施例3的制备方法，不同的是将步骤1中的原料吗啉替换为1-(2,2-二氟乙基)哌嗪，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.41(s,1h),8.36(d,2h,j＝8.2hz),8.27(d,1h,j＝9.3hz),7.99(d,1h,j＝8.2hz),7.34(t,1h,j＝78hz),7.17(d,1h,j＝6.3hz),6.92(d,2h,j＝7.0hz),6.10-6.40(m,1h),5.12-5.02(m,1h),3.97-3.87(m,1h),3.51-3.47(m,1h),3.18(s,4h),2.84-2.79(m,2h),2.71(d,4h,j＝18.4hz),1.49(d,3h,j＝6.4hz).esi-ms m/z:535.3[m+h]
+
.
5-氯苯磺酰胺，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ12.03(s,1h),8.74(d,1h,j＝6.6hz),8.38(s,2h),8.03-7.81(m,5h),7.18(s,1h),5.25-5.05(m,1h),4.02-3.87(m,1h),3.57-3.49(m,1h),1.39(d,3h,j＝6.6hz).esi-ms m/z:434.1[m+h]
+
[0293]
实施例34：(r)-9-甲基-6-氧代-n-(2-氨磺酰基-5-(三氟甲基)苯基)-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0294][0295]
制备方法同实施例5的制备方法，不同的是将原料邻氨基苯磺酰胺替换为2-氨基-4-(三氟甲基)苯磺酰胺，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ12.19(s,1h),9.11(s,1h),8.41-8.39(m,2h),8.14(d,1h,j＝8.3hz),8.03(d,1h,j＝8.2hz),7.92(s,2h),7.72(d,1h,j＝8.2hz),7.19(s,1h),5.17-5.15(m,1h),3.95-3.89(m,1h),3.55-3.51(m,1h),1.48(d,3h,j＝6.5hz).esi-ms m/z:468.1[m+h]
+
[0296]
实施例35：(r)-9-甲基-n-(4-甲基-2-氨磺酰基苯基)-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0297][0298]
制备方法同实施例5的制备方法，不同的是将原料邻氨基苯磺酰胺替换为2-氨基-5-甲基苯磺酰胺，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.94(s,1h),8.58(d,1h,j＝8.4hz),8.42-8.29(m,2h),8.00(d,1h,j＝8.2hz),7.74(s,1h),7.59(s,2h),7.49(d,1h,j＝8.4hz),7.17(s,1h),5.16-5.14(m,1h),3.95-3.90(m,1h),3.53-3.49(m,1h),2.35(s,3h),1.47(d,3h,j＝6.5hz).esi-ms m/z:414.1[m+h]
+
[0299]
实施例36：(r)-n-(4-氟-2-氨磺酰基苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0300][0301]
制备方法同实施例5的制备方法，不同的是将原料邻氨基苯磺酰胺替换为2-氨基-5-甲基苯磺酰胺，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.93(s,1h),8.73-8.69(m,1h),8.37(d,2h,j＝7.9hz),8.01(d,1h,j＝8.1hz),7.69(m,3h),7.59(d,1h,j＝8.4hz),7.17(s,1h),5.16-5.14(m,1h),3.95-3.90(m,1h),3.53-3.49(m,1h),1.47(d,3h,j＝6.4hz).esi-ms m/z:418.1[m+h]
+
[0302]
实施例37：(r)-n-(4,5-二氟-2-氨磺酰基苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
4-氯苯磺酰胺，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ12.11(s,1h),8.80(s,1h),8.40(d,2h,j＝7.2hz),8.03(d,1h,j＝8.0hz),7.94(d,1h,j＝8.0hz),7.77(s,2h),7.43-7.41(m,1h),7.18(s,1h),5.20-5.11(m,1h),3.95-3.90(m,1h),3.54-3.50(m,1h),1.47(d,3h,j＝6.4hz).esi-ms m/z:434.1[m+h]
+
[0314]
实施例41：(r)-9-甲基-6-氧代-n-(2-氨磺酰基吡啶-3-基)-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0315][0316]
制备方法同实施例5的制备方法，不同的是将原料邻氨基苯磺酰胺替换为3-胺基吡啶-2-磺酰胺，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ12.20(s,1h),9.16(d,1h,j＝8.3hz),8.45(s,1h),8.39(d,2h,j＝7.6hz),8.02(d,1h,j＝8.1hz),7.89(s,2h),7.78-7.68(m,1h),7.19(s,1h),5.17-5.74(m,1h),3.96-3.93(m,1h),3.55-3.51(m,1h),1.48(d,3h,j＝6.2hz).esi-ms m/z:401.1[m+h]
+
[0317]
实施例42：(r)-n-(5-氟-2-氨磺酰基苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0318][0319]
制备方法同实施例5的制备方法，不同的是将原料邻氨基苯磺酰胺替换为2-氨基-4-氟苯磺酰胺，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.93(s,1h),8.73-8.69(m,1h),8.37(d,2h,j＝8.0hz),8.01(d,1h,j＝8.0hz),7.79(s,2h),7.73-7.66(m,1h),7.63-7.55(m,1h),7.17(s,1h),5.20-5.11(m,1h),3.95-3.90(m,1h),3.54-3.50(m,1h),1.47(d,3h,j＝6.4hz).esi-ms m/z:416.1[m+h]
+
[0320]
实施例43：(r)-n-(4-甲氧基-2-氨磺酰基苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺的制备
[0321][0322]
制备方法同实施例5的制备方法，不同的是将原料邻氨基苯磺酰胺替换为2-氨基-5-甲氧基苯磺酰胺，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.82(s,1h),8.59(d,1h,j＝9.0hz),8.36(d,2h,j＝6.4hz),8.00(d,1h,j＝8.1hz),7.67(s,2h),7.45(s,1h),7.28(d,1h,j＝7.5hz),7.16(s,1h),5.20-5.11(m,1h),3.95-3.90(m,1h),3.83(s,3h),3.54-3.50(m,1h),1.47(d,3h,j＝6.4hz).esi-ms m/z:430.1[m+h]
+
[0323]
实施例44：(r)-n-(5-环丙基-2-氨磺酰基苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺的制备
[0324][0325]
制备方法同实施例6的制备方法，不同的是将原料4-溴-2-氟-1-硝基苯替换为5-溴-2-氟-1-硝基苯，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.98(s,1h),8.44(s,1h),8.37(d,2h,j＝7.1hz),8.01(d,1h,j＝8.1hz),7.78(d,1h,j＝8.0hz),7.53(s,2h),7.17(s,1h),7.01(d,1h,j＝8.4hz),5.21-5.07(m,1h),3.94-3.91(m,1h),3.54-3.51(m,1h),2.10-1.98(m,1h),1.46(d,3h,j＝6.1hz),1.13-1.00(m,2h),0.82-0.70(m,2h).esi-ms m/z:438.1[m-h]-[0326]
实施例45：(r)-9-甲基-6-氧代-n-(2-氨磺酰基-4-(四氢-2h-吡喃-4-基)苯基)-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0327][0328]
制备方法同实施例6的制备方法，不同的是将原料环丙基硼酸替换为2-(3,6-二氢-2h-吡喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.97(s,1h),8.62(d,1h,j＝8.5hz),8.37(d,2h,j＝7.4hz),8.01(d,1h,j＝8.2hz),7.81(s,1h),7.64(s,2h),7.59(d,1h,j＝8.5hz),7.17(s,1h),5.21-5.08(m,1h),4.07-3.85(m,3h),3.56-3.43(m,3h),2.93-2.79(m,1h),1.86-1.59(m,4h),1.47(d,3h,j＝6.3hz).esi-ms m/z:482.2[m-h]-[0329]
实施例46：(r)-n-(4-(4,4-二氟环己基)-2-氨磺酰基苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺的制备
[0330][0331]
制备方法同实施例6的制备方法，不同的是将原料环丙基硼酸替换为4,4-二氟环己-1-烯基硼酸频那醇酯，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.99(s,1h),8.62(d,1h,j＝8.4hz),8.37(d,2h,j＝6.9hz),8.01(d,1h,j＝8.1hz),7.82(s,1h),7.72-7.50(m,3h),7.17(s,1h),5.18-5.14(m,1h),3.94-3.92(m,1h),3.50-3.45(m,1h),2.81(t,1h,j＝6.9hz),2.07(m,3h),2.03-1.87(m,3h),1.71(m,2h),1.48(d,3h,j＝5.9hz).esi-ms m/z:516.2[m-h]-[0332]
实施例47：(r)-n-(4-环戊基-2-氨磺酰基苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0333][0334]
制备方法同实施例6的制备方法，不同的是将原料环丙基硼酸替换为2-(环戊-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.96(s,1h),8.59(d,1h,j＝8.5hz),8.36(d,2h,j＝7.8hz),8.00(d,1h,j＝8.2hz),7.79(s,1h),7.61(s,2h),7.56(d,1h,j＝8.3hz),7.16(s,1h),5.15(s,1h),3.99-3.86(m,1h),3.57-3.45(m,1h),3.10-2.98(m,1h),2.13-2.02(m,2h),1.87-1.74(m,2h),1.74-1.62(m,2h),1.62-1.50(m,2h),1.47(d,3h,j＝6.4hz).esi-ms m/z:466.2[m-h]-实施例48：(r)-9-甲基-6-氧代-n-(4-(哌啶-4-基)-2-氨磺酰基苯基)-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺的制备
[0335][0336]
制备方法同实施例6的制备方法，不同的是将原料环丙基硼酸替换为1,2,3,6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.96(s,1h),8.63(d,1h,j＝8.2hz),8.35(d,2h,j＝19.4hz),8.01(d,1h,j＝8.4hz),7.79(s,1h),7.56(s,1h),7.17(s,1h),5.18-5.14(m,1h),3.94-3.92(m,1h),3.50-3.45(m,1h),2.86-2.67(m,4h),1.99-1.86(m,3h),1.71-1.68(m,2h),1.46(d,3h,j＝8hz).esi-ms m/z:483.2[m+h]
+
[0337]
实施例49；(r)-9-甲基-6-氧代-n-(3-氨磺酰基-[1,1'-联苯基]-4-基)-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺的制备
[0338][0339]
制备方法同实施例6的制备方法，不同的是将原料环丙基硼酸替换为苯硼酸，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ12.14(s,1h),8.82(d,1h,j＝8.8hz),8.38(d,2h，j＝8.2hz),8.22(s,1h),8.05-8.00(m,2h),7.74-7.27(m,4h),7.53(t,2h，j＝7.6hz),7.42(t,1h,j＝7.3hz),7.18(s,1h),5.22-5.11(m,1h),3.96-3.92(m,1h),3.55-3.51(m,1h),1.49(d,3h,j＝6.5hz).esi-ms m/z:474.1[m-h]-[0340]
实施例50：(r)-n-(4'-氟-3-磺胺基-[1,1'-联苯]-4-基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0341][0342]
制备方法同实施例6的制备方法，不同的是将原料环丙基硼酸替换为2-(4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ12.13(s,1h),8.81(d,1h,j＝8.7hz,),8.40-8.38(m,2h),8.19(s,1h),8.05-7.99(m,2h),7.78-7.76(m,4h),7.37(t,2h,j＝8.7hz),7.20(s,1h),5.23-5.12(m,1h),3.99-3.89(m,1h),3.17-3.17(m,1h),1.48(d,3h,j＝6.4hz).esi-ms m/z:494.1[m+h]
+
[0343]
实施例51：(r)-9-甲基-6-氧代-n-(2-氨磺酰基-4-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)苯基)-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0344][0345]
制备方法同实施例6的制备方法，不同的是将原料环丙基硼酸替换为2-三氟甲基吡啶-4-硼酸频哪醇酯，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ12.21(s,1h),9.16(s,1h),8.91(d,1h,j＝8.7hz),8.41(t,3h,j＝10.2hz),8.34(s,1h),8.19(d,1h,j＝8.4hz),8.11-8.00(m,2h),7.81(s,2h),7.19(s,1h),5.26-5.09(m,1h),4.03-3.86(m,1h),3.65-3.47(m,1h),1.49(d,3h,j＝6.4hz).esi-ms m/z:543.1[m-h]-[0346]
实施例52：(r)-n-(4-(1h-吡唑-4-基)-2-氨磺酰基苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺的制备
[0347][0348]
制备方法同实施例6的制备方法，不同的是将原料环丙基硼酸替换为4-吡唑硼酸频哪醇酯，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ13.08(s,1h),12.05(s,1h),8.69(d,1h,j＝7.3hz),8.46-8.17(m,3h),8.13(s,1h),8.07-7.85(m,3h),7.70(s,2h),7.18(s,1h),5.18-5.14(m,1h),3.94-3.92(m,1h),3.50-3.45(m,1h),1.48(d,3h,j＝4hz).esi-ms m/z:466.2[m+h]
+
[0349]
实施例53：(r)-9-甲基-n-(4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-2-氨磺酰基苯基)-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺的制备
[0350]
三氟硼酸三甲基哌嗪，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.97(s,1h),8.62(d,1h,j＝7.8hz),8.38(s,2h),8.01(d,1h,j＝7.7hz),7.85(s,1h),7.63(s,2h),7.57(d,1h,j＝7.6hz),7.17(s,1h),5.25-5.04(m,1h),4.01-3.85(m,2h),3.45-3.32(m,6h),2.42-2.32(m,4h),2.17(s,3h),1.47(d,3h,j＝4.5hz).esi-ms m/z:512.1[m+h]
+
[0362]
实施例57：(r)-n-(4-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-氨磺酰基苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0363][0364]
制备方法同实施例7的制备方法，不同的是将原料吗啉替换为4,4-二氟哌啶，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.84(s,1h),8.55(d,1h,j＝8.7hz),8.36(d,2h,j＝8.9hz),7.99(d,1h,j＝7.8hz),7.64(s,2h),7.50(s,1h),7.35(d,1h,j＝8.2hz),7.16(s,1h),5.18-5.14(m,1h),3.94-3.92(m,1h),3.50-3.45(m,5h),2.18-2.00(m,4h),1.47(d,3h,j＝5.1hz).esi-ms m/z:517.1[m-h]-实施例58：(r)-9-甲基-6-氧代-n-(4-(吡咯烷-1-基)-2-氨磺酰基苯基)-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0365][0366]
制备方法同实施例7的制备方法，不同的是将原料吗啉替换为四氢吡咯，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.67(s,1h),8.45(d,1h,j＝8.7hz),8.34(d,2h,j＝8.2hz),7.97(d,1h,j＝8.2hz),7.54(s,2h),7.15(s,1h),7.06(d,1h,j＝8.2hz),6.84(d,1h,j＝8.2hz),5.18-5.08(m,1h),3.99-3.86(m,1h),3.53-3.48(m,1h),3.33-3.23(m,4h),2.07-1.99(m,4h),1.46(d,3h,j＝6.5hz).esi-ms m/z:469.1[m+h]
+
[0367]
实施例59：(r)-n-(4-(4-(二甲氨基)哌啶-1-基)-2-氨磺酰基苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0368][0369]
制备方法同实施例7的制备方法，不同的是将原料吗啉替换为n,n-二甲基哌啶-4-胺，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.80(s,1h),8.52(d,1h,j＝9.0hz),8.35(d,2h,j＝8.1hz),7.98(d,1h,j＝8.2hz),7.60(s,2h),7.44(s,1h),7.28(d,1h,j＝8.5hz),7.16(s,1h),5.15-5.12(m,1h),3.96-3.88(m,1h),3.79-3.77(m,2h),3.56-3.47(m,1h),2.79-2.67(m,3h),2.36(s,6h),1.95-1.92(m,2h),1.57-1.54(m,2h),1.46(d,3h,j
四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0380][0381]
制备方法同实施例7的制备方法，不同的是将原料吗啉替换为叔丁基哌嗪-1-羧酸酯，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.81(s,1h),8.53(d,1h,j＝8.9hz),8.35(d,1h,j＝7.8hz),8.19(s,1h),7.98(d,1h,j＝8.4hz),7.59(s,2h),7.43(s,1h),7.27(d,1h,j＝8.9hz),7.16(s,1h),5.19-5.06(m,1h),3.95-3.91(m,1h),3.52-3.48(m,1h),3.21-3.11(m,4h),3.04-2.90(m,4h),1.46(d,3h,j＝6.5hz),1.24(s,1h).esi-ms m/z:484.1[m+h]
+
[0382]
实施例64：(r)-9-甲基-n-(4-(2-甲基哌嗪-1-基)-2-氨磺酰基苯基)-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0383][0384]
制备方法同实施例7的制备方法，不同的是将原料吗啉替换为4-叔丁氧羰基-2-甲基哌嗪，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.80(s,1h),8.53(d,1h,j＝9.0hz),8.35(d,2h,j＝8.4hz),8.24(s,1h),7.99(d,1h,j＝8.1hz),7.61(s,2h),7.41(s,1h),7.25(d,1h,j＝8.7hz),7.16(s,1h),5.20-5.07(m,1h),3.93(d,2h,j＝12.9hz),3.57-3.44(m,1h),3.32-3.22(m,1h),3.15-2.80(m,5h),1.47(d,3h,j＝6.1hz),1.05(d,3h,j＝5.8hz).esi-ms m/z:498.1[m+h]
+
[0385]
实施例65：(r)-9-甲基-n-(4-(3-甲基哌嗪-1-基)-2-氨磺酰基苯基)-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺的制备
[0386][0387]
制备方法同实施例7的制备方法，不同的是将原料吗啉替换为2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.82(s,1h),8.54(d,1h,j＝9.1hz),8.35(d,2h,j＝6.5hz),8.26(s,1h),8.02-7.93(m,1h),7.61(s,2h),7.44(s,1h),7.29(d,1h),7.16(s,1h),5.16-5.12(m,1h),3.98-3.85(m,1h),3.64-3.59(m,2h),3.55-3.42(m,1h),3.14-2.91(m,3h),2.75-2.70(m,2h),1.46(d,3h,j＝6.5hz),1.13(d,3h,j＝5.1hz).esi-ms m/z:498.0[m+h]
+
[0388]
实施例66：(r)-n-(4-((3s,5r)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)-2-氨磺酰基苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺的制备
[0389][0390]
制备方法同实施例7的制备方法，不同的是将原料吗啉替换为(3s,5r)-3,5-二甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.83(s,1h),8.53(d,1h,j＝8.8hz),8.43-8.31(m,2h),7.98(d,1h,j＝8.2hz),7.62(s,2h),7.42(s,1h),7.30-7.27(m,1h),7.16(s,1h),5.17-5.09(m,1h),3.94-3.91(m,2h),3.64-3.59(m,2h),3.05-3.03(m,2h),2.31-2.19(m,2h),1.44(d,3h,j＝8.7hz),1.23(s,1h),1.11(d,6h,j＝8.2hz).esi-ms m/z:512.1[m+h]
+
[0391]
实施例67：(r)-n-(4-(4,7-二氮螺环[2.5]辛烷-7-基)-2-氨磺酰苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺的制备
[0392][0393]
制备方法同实施例7的制备方法，不同的是将原料吗啉替换为4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-甲酸叔丁酯，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.81(s,1h),8.51(d,1h,j＝9.1hz),8.35(d,2h,j＝8.1hz),8.16(s,1h),7.98(d,1h,j＝8.2hz),7.58(s,2h),7.38(s,1h),7.23(d,1h,j＝8.4hz),7.16(s,1h),5.19-5.09(m,1h),3.94-3.90(m,2h),3.16-3.12(m,2h),3.05-3.01(m,2h),2.98-2.94(m,2h),1.46(d,3h,j＝6.5hz),0.58-0.53(m,4h).esi-ms m/z:510.1[m+h]
+
[0394]
实施例68：(r)-n-(4-(3,3-二甲基哌嗪-1-基)-2-氨磺酰基苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0395][0396]
制备方法同实施例7的制备方法，不同的是将原料吗啉替换为2,2-二甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.83(s,1h),8.54(d,1h,j＝9.0hz),8.35(d,1h,j＝7.4hz),8.28(s,1h),7.99(d,1h,j＝8.2hz),7.62(s,2h),7.43(s,1h),7.28(d,1h,j＝8.3hz),7.16(s,1h),5.18-5.08(m,1h),3.94-3.89(m,1h),3.53-3.50(m,2h),3.41-3.36(m,1h),3.08(s,2h),3.06-3.02(m,2h),1.46(d,3h,j＝6.2hz),1.25(s,6h),0.85(s,1h).esi-ms m/z:512.1[m+h]
+
[0397]
实施例69：(r)-n-(4-((4,4-二氟环己基)氨基)-2-氨磺酰基苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0398][0399]
制备方法同实施例7的制备方法，不同的是将原料吗啉替换为4,4-二氟环己基胺，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.61(s,1h),8.37-8.34(m,3h),7.97(d,1h,j＝8.1hz),7.49(s,2h),7.16(d,2h,j＝4.5hz),6.90(d,1h,j＝8.3hz),6.04(s,1h),5.17-5.06(m,1h),3.97-3.86(m,1h),3.51-3.48(m,1h),2.55-2.50(m,1h),2.03-2.00(m,6h),1.50-1.46(m,5h).esi-ms m/z:533.0[m+h]
+
.
[0400]
实施例70：(r)-n-(4-(2-甲氧基乙氧基)-2-氨磺酰基苯基)-9-甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺的制备
[0401][0402]
制备方法同实施例8的制备方法，不同的是将原料溴甲基环丙烷替换为2-溴乙基甲基醚，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.84(s,1h),8.60(d,1h,j＝9.1hz),8.36(d,2h,j＝8.0hz),8.00(d,1h,j＝8.2hz),7.69(s,2h),7.47(s,1h),7.30(d,1h,j＝7.2hz),7.17(s,1h),5.16-5.12(m,1h),4.18-4.14(m,2h),3.95-3.92(m,1h),3.73-3.69(m,2h),3.54-3.52(m,1h),3.40(s,3h),1.47(d,3h,j＝6.3hz).esi-ms m/z:472.2[m-h]-.
[0403]
实施例71：(r)-9-甲基-6-氧代-n-(2-氨磺酰基-4-((四氢-2h-吡喃-4-基)甲氧基)苯基)-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-甲酰胺的制备
[0404][0405]
制备方法同实施例8的制备方法，不同的是将原料溴甲基环丙烷替换为4-(溴甲基)四氢-2h-吡喃，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.83(s,1h),8.59(d,1h,j＝9.1hz),8.36(d,2h,j＝7.8hz),7.99(d,1h,j＝8.2hz),7.66(s,2h),7.45(d,1h,j＝2.3hz),7.29(d,1h,j＝9.1hz),7.16(s,1h),5.14(s,1h),3.95-3.82(m,4h),3.57-3.44(m,1h),3.40-3.34(m,1h),3.17(d,2h,j＝5.2hz),2.09-1.96(m,1h),1.76-1.62(m,2h),1.47(d,3h,j＝6.5hz),1.40-1.29(m,2h).esi-ms m/z:512.2[m-h]-.
[0406]
实施例72：(r)-9-甲基-6-氧代-n-(2-氨磺酰基-4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)-6,7,8,9-四氢吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-羧酰胺的制备
[0407][0408]
制备方法同实施例8的制备方法，不同的是将原料溴甲基环丙烷替换为2,2,2-三氟乙基甲磺酸酯，制得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ11.88(s,1h),8.65(d,1h,j＝9.2hz),8.38-8.34(m,2h),8.01-7.99(m,1h),7.72(s,2h),7.56(s,1h),7.45-7.42(m,1h),7.17(s,1h),5.22-5.06(m,1h),4.95-4.68(m,2h),3.94-3.91(m,1h),3.53-3.50(m,1h),1.47(d,3h,j＝8.6hz).esi-ms m/z:496.1[m-h]-.
[0409]
实验例1化合物体外rsk2激酶活性评价
[0410]
1.实验材料
[0411]
化合物准备：以上实施例制备的本发明的化合物用dmso配制成10mm后，依次用dmso按1:3稀释至125μm、31.25μm、7.8125μm、1953.125nm、488.28125nm、122.07nm、30.518nm、7.629nm、1.907nm(50
×
)。
[0412]
试剂：rsk2，购自于carna公司，cat.no.01-150；peptide 11，购自于carna公司，cat.no.117885；dmso，购自于sigma公司，cat.no.d2650；edta，购自于sigma公司，cat.no.e5134；96孔板，购自于corning公司，cat.no.3365；96孔板，购自于corning公司，cat.no.3797；384孔板，购自于corning公司，cat.no.3573；staurosporine，购自于mce公司，cat.no.hy-15141。
[0413]
仪器：。
[0414]
2.实验方法
[0415]
2.1.配制1
×
kinase base缓冲液和1
×
终止液
[0416]1×
kinase base缓冲液：
[0417]
50mm hepes，ph 7.5
[0418]
0.0015％brij-35
[0419]1×
终止液：
[0420]
100mm hepes，ph 7.5
[0421]
0.015％brij-35
[0422]
0.2％coating reagent#3
[0423]
50mm edta
[0424]
2.2.用dmso将10mm化合物稀释至125μm，将100μl该溶液加入96孔板中，随后将20μl 125μm溶液和60μl dmso加入下一个孔，再以此类推进行4倍梯度稀释，一共稀释10个梯度。将100μl/孔dmso加入2个孔中作为无酶对照。将此版标记为来源板。
[0425]
2.3.准备中间板：将10μl来源板中各浓度溶液转移至一个新的96孔板中，将此版记为中间板。向中间板中每孔加入90μl 1
×
kinase base缓冲液，放至摇床上震动10min。
[0426]
2.4.吸取5μl中间板各孔溶液至新的384孔中，并设置2个复孔。记为检测板。
[0427]
2.5.配制2.5
×
肽溶液：将fam标记的肽和atp加入1
×
kinase base缓冲液。
[0428]
2.6.向检测板中每孔加入10μl 2.5
×
酶溶液，室温孵育10min。
[0429]
2.7向检测板中每孔加入10μl 2.5
×
肽溶液，28℃孵育一定时间。
[0430]
2.8每孔加入30μl终止液
[0431]
2.9读数并计算。抑制率％＝(最大值-测量值)/(最大值-最小值)*100。数据经xlfit处理，拟合得ic
50
，实验结果见表1。
[0432]
实验例2化合物体外细胞活性评价(乳腺癌细胞株mda-mb-468)
[0433]
1.实验材料
[0434]
受试化合物：以上实施例制备的本发明的化合物。用dmso配制成20mm储备液待用。
[0435]
乳腺癌细胞株mda-mb-468购于美国典型培养物保藏中心(atcc)。
[0436]
2.实验方法
[0437]
2.1细胞培养：
[0438]
细胞复苏：将细胞置于37度水浴中溶解，然后转移到15ml已预热的培养基中，1000rpm离心5分钟，弃去培养基，用15ml新鲜培养基重悬细胞，转移至10cm培养皿中，置于37℃，5％co2的培养箱中培养，24小时后细胞更换新鲜培养基。
[0439]
细胞传代：将上述复苏的细胞转移到50ml无菌离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去培养基，取分散均匀的细胞计数，调整合适的细胞浓度到15ml新鲜培养基，加入到10cm培养皿中，置于37度，5％co2的培养箱中培养。
[0440]
2.2实验步骤：
[0441]
细胞在培养瓶中细胞长至1
×
10
5-1
×
106个细胞/ml后，使用新鲜培养基(l-15+10％fbs+1％青霉素-链霉素溶液)重悬，并计数。将重悬的细胞调整细胞浓度至2
×
104个细胞/ml。将上述浓度的细胞悬液加入96孔细胞培养板中，每孔加入100μl(2
×
103个细胞/孔)。将铺细胞的96孔板置于37℃，5％co2的培养箱中培养，24小时后加入化合物。用dmso稀释各化合物配成200
×
溶液，再用新鲜培养基将各浓度化合物稀释为2
×
溶液，每孔加入100μl 2
×
溶液，每种浓度两复孔。7天后吸弃培养液，向待测孔加入100μlluminescent cell viability assay buffer。轻轻摇匀。10分钟后，在assay板底部贴上backseal膜，置于envison上读取荧光读数，并计算细胞存活率(cell survive(％))，计算公式为cell survive(％)＝(com-min)/(max-min)，其中max为溶媒对照组的读数，min为无细胞对照组的读数，com为化合物处理组的读数，数据经xlfit处理，拟合得ic
50
，实验结果见表1。
[0442]
表1
[0443]
[0444][0445]
“‑”
表示未测试
[0446]
实验结果表明，本发明的化合物具有较好的rsk2激酶抑制活性，且对乳腺癌细胞具有良好的抑制作用。
[0447]
尽管以上已经对本发明作了详细描述，但是本领域技术人员理解，在不偏离本发明的精神和范围的前提下可以对本发明进行各种修改和改变。本发明的权利范围并不限于上文所作的详细描述，而应归属于权利要求书。