技术特征：
1.一种去除脐带血细胞中细菌的方法，其特征在于：包括以下步骤步骤一、脐带血造血干细胞复融：提选已污染的脐带血造血干细胞，在37℃恒温水浴锅中快速复苏，75%酒精进行表面消毒，放至超净工作台进行后续处理；步骤二、洗涤离心：将血液转移至离心管中，加入生理盐水至血液中，对脐带血造血干细胞进行洗涤；通过离心作用，去除红细胞，上清抽取血培养；步骤三、获取单个核细胞：步骤二中离心后，血液分两层，上层为红色澄清液体，下层为单个核细胞；步骤四、二次洗涤：步骤三中获得的单个核细胞，加入含有一定浓度头孢他啶和甲硝唑的磷酸盐缓冲液，洗涤单个核细胞；离心后，分两层，上层透明液体，下层为单个核细胞，上清抽取血培养；步骤五、细胞与抗生素共培养：根据抗生素添加浓度设定分组，添加培养基置于co2培养箱中每天观察细菌的去除情况及细胞的生长情况；步骤六、鉴定：每天取样进行营养琼脂培养、革兰氏染色进行，用于细菌去除鉴定；流式细胞仪检测细胞周期，用于细胞鉴定。2.根据权利要求1所述的一种去除脐带血细胞中细菌的方法，其特征在于：所述步骤一中，脐带血复苏要求血液全部复融。3.根据权利要求1所述的一种去除脐带血细胞中细菌的方法，其特征在于：所述步骤二中，使用0.9%生理盐水对血液进行稀释，生理盐水的量为血液体积的1/3，离心1800prm/10min，除去血液中已经溶血的红细胞。4.根据权利要求1所述的一种去除脐带血细胞中细菌的方法，其特征在于：所述步骤四中，二次洗涤细胞使用磷酸盐缓冲液，添加抗生素浓度100mg/l头孢他啶和50mg/l甲硝唑，混匀室温静止30min；离心2000rpm/5min，弃去上清。5.根据权利要求1所述的一种去除脐带血细胞中细菌的方法，其特征在于：所述步骤五中，依据抗生物浓度进行分四组，另设阴性对照组、阳性对照组；分别加入gt-561培养基，每天在倒置显微镜下观察细胞的生长状态及细菌除去情况。6.根据权利要求1所述的一种去除脐带血细胞中细菌的方法，其特征在于：所述步骤六中，每日取样进行革兰氏染色、营养琼脂平板检测细菌去除情况；抽取各组细胞进行细胞周期的检测，碘化丙啶标记分析细胞，流式细胞仪进行细胞周期分析。
技术总结
本发明公开了一种去除脐带血细胞中细菌的方法，包括脐带血造血干细胞复融、洗涤离心、获取单个核细胞、二次洗涤、细胞与抗生素共培养、鉴定。本发明的有益效果是：经过稀释、洗涤，二次洗涤中加入抗生素的常规用量进行预处理；在除菌处理中，设定四组抗生素浓度与细胞进行共培养。洗涤离心血培养抽样结果表明，细菌的浓度随着多次洗涤逐步降低；鉴定结果表明，四组抗生素浓度最佳的组合：厌氧菌感染的脐带血50mg/L头孢他啶和100mg/L甲硝唑，作用时间7天；需氧菌感染的脐带血100mg/L头孢他啶和12.5mg/L甲硝唑，作用时间10天。作用时间10天。作用时间10天。
技术研发人员：王迎耀 薛晓锋 袁鸿梅 韦丹 朱学义
受保护的技术使用者：河南省遗传资源细胞库有限公司
技术研发日：2022.08.04
技术公布日：2022/11/2