四环二倍半萜类化合物及其合成基因簇

文档序号:33745613发布日期:2023-04-06 11:27阅读:来源:国知局

技术特征:

1.四环二倍半萜类化合物,其特征在于,选自mangicol h至mangicol p中的一种,mangicol h至mangicol p的结构式分别如下所示:

2.权利要求1所述四环二倍半萜类化合物的生物合成基因簇fomd,其特征在于,含有6个基因,分别为编码二倍半萜合酶foms的基因fomde或其功能等同体,编码细胞色素p450酶fomda、fomdc、fomdd的基因fomda,fomdc,fomdd或其功能等同体,编码醛酮还原酶fomdb的基因fomdb或其功能等同体,编码水解酶fomdf的基因fomdf或其功能等同体,其中,所述fomda的核苷酸序列如seq id no.1所示,fomdb的核苷酸序列如seq id no.2所示,fomdc的核苷酸序列如seq id no.3所示,fomdd的核苷酸序列如seq id no.4所示,fomdf的核苷酸序列如seq id no.5所示,fomde的核苷酸序列如seq id no.6所示;

3.权利要求2所述四环二倍半萜类化合物的生物合成基因簇fomd在制备萜类化合物中的应用。

4.根据权利要求3所述四环二倍半萜类化合物的生物合成基因簇fomd在制备萜类化合物中的应用,其特征在于,四环二倍半萜类化合物mangicol h至mangicol p的生物合成基因簇fomd在合成四环二倍半萜类化合物mangicol h至mangicol p中的应用。

5.表达如权利要求2所述四环二倍半萜类化合物mangicol h至mangicol p的生物合成基因簇fomd的载体,其特征在于,为含有基因fomda、fomdb、fomdc、fomdd、fomdf和fomde的真核或原核表达载体。

6.权利要求1所述四环二倍半萜类化合物的制备方法,其特征在于,通过米曲霉aspergillus oryzae nsar1中异源表达的方法表达尖孢镰刀菌14005中如权利要求2所述四环二倍半萜类化合物的生物合成基因簇fomd中的基因来获得四环二倍半萜类化合物mangicol h至mangicol p。

7.根据权利要求6所述四环二倍半萜类化合物的制备方法,其特征在于,所述四环二倍半萜类化合物的制备方法包括以下步骤:

8.根据权利要求7所述四环二倍半萜类化合物的制备方法,其特征在于,

9.根据权利要求7所述四环二倍半萜类化合物的制备方法,其特征在于,步骤(3)中,将米曲霉转化子ao-fomdabcdef的菌丝体接种并培养的方法为:将米曲霉转化子ao-fomdabcdef的菌丝体接种于含0.1%腺嘌呤的mpy培养基中,于30℃,220rpm培养2天作为种子液,按照80g大米,120ml去离子水中加入5ml种子液的比例,接种于添加0.1%腺嘌呤的大米固体培养基中,30℃,静置培养18天。

10.根据权利要求7所述四环二倍半萜类化合物的制备方法,其特征在于,步骤(3)中,将米曲霉转化子ao-fomdabcdef的菌丝体接种并培养后,将ao-fomdabcdef的固体发酵物加入等体积的乙酸乙酯萃取3次,蒸干后获得浸膏;浸膏用石油醚萃取获得极性小的组分,石油醚萃取液蒸干后进行正相分离,以石油醚和乙酸乙酯为流动相进行洗脱并富集目标组分fr.5和fr.7;fr.5进行凝胶柱分离,最终用反相cholester色谱柱,乙腈/0.1%甲酸水体积比80:20为流动相洗脱获得mangicol k;fr.7进行凝胶柱分离获得三个馏分fr.7.1-fr.7.3.fr.7.2用ace c18-pfp色谱柱进行半制备,以乙腈/0.1%甲酸水体积比75:25为流动相洗脱获得mangicol o和馏分fr.7.2.1;馏分fr.7.2.1进一步用手型柱chiralpak ia,以正己烷/乙醇体积比95:5为流动相获得mangicols h和i,fr.7.3用phenomenex色谱柱进行半制备,以乙腈/0.1%甲酸水体积比80:20为流动相洗脱获得mangicol l,mangicol n和mangicol p以及馏分fr.7.3.1;馏分fr.7.3.1进一步用手型柱chiralpak ia,以正己烷/乙醇体积比94:6为流动相获得mangicol j和mangicol m。


技术总结
本发明涉及四环二倍半萜类化合物及其合成基因簇,属于基因工程领域。该四环二倍半萜类化合物合成基因簇来源于尖孢镰刀菌14005,所述基因簇含有6个基因,分别为编码二倍半萜合酶FoMS的基因fomdE或其功能等同体,编码细胞色素P450酶fomdA,fomdC,fomdD的基因fomdA,fomdC,fomdD其功能等同体,编码醛酮还原酶fomdB的基因fomdB或其功能等同体,编码水解酶fomdF的基因fomdF或其功能等同体。本发明发现的Mangicols基因簇催化产生新的四环二倍半萜类化合物,为丰富天然产物化合物库、发现新抗生素提供了宝贵的先导化合物资源。

技术研发人员:刘雪婷,蒋岚,邢翠平,杨欢婷,吕康杰,黎晓莹,兰珂盈,邹可可,丛展任,马晨洋,张立新
受保护的技术使用者:华东理工大学
技术研发日:
技术公布日:2024/1/12
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