技术特征：
1.一种具有类分子伴侣功能的固定化载体的制备方法，其特征在于，所述制备方法的具体步骤为：(1)将n-叔丁基丙烯酰胺或n-苯基丙烯酰胺溶在乙醇中，将n-异丙基丙烯酰胺、功能单体、交联剂和引发剂溶在水中，以上反应物以不同比例混合，加入检测池中，超声通氮气5-10min脱除混合液中的氧气后，在检测池底原位聚合反应得到聚合物薄层；反应后用水清洗聚合物薄层3-5次，除去未反应的单体；(2)向检测池中加入酶溶液进行孵育，酶被固载到检测池底部的聚合物薄层上，除去上清液，测定固定在聚合物薄层上的酶的催化活力，筛选出对酶分子亲和力高和活力提升大的聚合物合成配方；(3)以步骤(2)筛选出来的配方配制原料，再加入模板剂和表面活性剂，超声通氮气5-10min脱除混合液中的氧气后，搅拌聚合反应得到聚合物纳米颗粒，洗脱模板剂并透析纯化，获得具有类分子伴侣功能的固定化载体。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的功能单体选自丙烯酸、衣康酸、甲基丙烯酸、n-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺、(3-丙烯酰胺丙基)三甲基氯化铵、1-乙烯基咪唑、n-[(3-(二甲氨基)丙基]甲基丙烯酰胺、4-乙烯基苯硼酸、丙烯酰胺、甲基丙烯酸羟乙酯、n-(2-氨基乙基)丙烯酰胺、2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸胆碱中的一种或几种；所述的交联剂为n,n'-亚甲基双丙烯酰胺、n,n'-乙烯基双丙烯酰胺和乙二醇二甲基丙烯酸酯中的一种或几种；所述的引发剂为过硫酸铵、偶氮二异丁腈或四甲基乙二胺。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)的聚合反应在密封或氮气氛围下进行，聚合反应温度为25℃-80℃，聚合反应时间为2-72h。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)测定固定在聚合物薄层上的酶的催化活力的方法为：向检测池中加入显色剂，反应2min后，使用酶标仪测定吸光度值，计算出聚合物对酶活的影响。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的表面活性剂为十二烷基硫酸钠或十六烷基三甲基溴化铵，所述的表面活性剂的用量为0.01-0.2mg/ml。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的模板剂为酶分子、酶分子的表位多肽、酶分子或酶分子表位多肽表面修饰的二氧化硅微球、四氧化三铁磁球或玻璃珠微球。7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)的聚合反应在密封或氮气氛围下进行，聚合反应温度为25℃-65℃，聚合反应时间为2-72h。8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤(3)的聚合反应完成后，通过升高温度到50-90℃、降低温度到0-10℃、或者加入浓度为0.5m-5m的nacl水溶液搅拌反应2-24h洗脱模板剂。9.一种酶固定的方法，其特征在于，所述方法的具体操作为：将具有类分子伴侣功能的固定化载体分散在水中，然后加入游离酶，在0-10℃下孵育1-48h，之后透析纯化，获得固相酶制剂。10.一种失活酶复性的方法，其特征在于，所述方法的具体操作为：将0.5-100mg/ml具有类分子伴侣功能的固定化载体与失活酶先35-40℃孵育0.5-2h，再3-5℃孵育20-30h。
技术总结
本发明公开了一种具有类分子伴侣功能的柔性智能固定化载体及应用。本发明基于高通量筛选方法得到的柔性聚合物固定化载体对酶蛋白具有较高的亲和力和良好的选择性，可以代替传统的固定化载体；该固定化载体是由化学方法制备的柔性聚合物，具有较高的稳定性、较长的使用寿命和较强的抗恶劣环境的能力，克服了传统固定化酶载体对酶蛋白选择性差、制备成本高、酶的催化活性降低等缺点。本发明制备的固定化载体为柔性聚合物，有利于适配酶的柔性构象，能够发挥分子伴侣功能，与变性失活的酶结合，利用柔性聚合物的特异性分子印迹空穴，无需外加条件和复杂的实验设备，能够恢复酶的结构和催化性能，实现变性酶的复性。实现变性酶的复性。实现变性酶的复性。
技术研发人员：吕永琴 李燕 殷德平
受保护的技术使用者：北京化工大学
技术研发日：2022.09.02
技术公布日：2022/12/23