技术特征：
dna ligase buffer 1μl，taq dna ligase(30u/μl)0.25μl，rpa扩增产物1μl，超纯水5.75μl；优选地，所述步骤(2)ldr反应程序为：混合反应物瞬时离心后，先在95℃变性3min，接着在60℃连接5min。6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)qpcr反应体系包括以下组分，monamp
tm
chemohs qpcr mix 10μl，qpcr-正向引物0.4μl，qpcr-反向引物0.4μl，模板1μl，超纯水8.2μl；优选地，所述步骤(3)qpcr反应程序为：在95℃预变性10min，在95℃变性10s，在60℃下退火和延伸30s，40个循环。7.一种用于检测人apoe 526位点基因分型的方法，包括以下步骤：(1)利用扩增引物apoe 526-rpa-正向引物和apoe 526-rpa-反向引物，使用rpa反应体系扩增apoe 526位点基因片段；(2)利用探针apoe 526-ldr-c、apoe 526-ldr-t和apoe 526-ldr-m，使用ldr反应体系对步骤(1)扩增产物进行处理；(3)利用qpcr扩增引物qpcr-正向引物和qpcr-反向引物，使用qpcr反应体系对步骤(2)的反应产物判别基因分型结果。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)rpa反应体系中包含以下组分，2μl模板，apoe 526-rpa-正向引物(10μm)、apoe 526-rpa-反向引物(10μm)各2μl，所述模板为提取的患者dna；优选地，步骤(1)rpa反应程序为：添加2.5μl浓度为280mm的乙酸镁启动反应，并在37℃孵育30min。9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)ldr反应体系包含以下组分，apoe 526-ldr-c(30nm)或apoe 526-ldr-t(30nm)1μl，apoe 526-ldr-m(30nm)1μl，10
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taq dna ligase buffer 1μl，taq dna ligase(30u/μl)0.25μl，rpa扩增产物1μl，超纯水5.75μl；优选地，所述步骤(2)ldr反应程序为：混合反应物瞬时离心后，先在95℃变性3min，接着在60℃连接5min。10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)qpcr反应体系包括以下组分，monamp
tm
chemohs qpcr mix 10μl，qpcr-正向引物0.4μl，qpcr-反向引物0.4μl，模板1μl，超纯水8.2μl；优选地，所述步骤(3)qpcr反应程序为：在95℃预变性10min，在95℃变性10s，在60℃下退火和延伸30s，40个循环。
技术总结
本发明公开了一种可用于检测人APOE基因分型的引物组及检测方法。提供的引物组和探针可对APOE基因388T>C、526C>T位点的多态性进行检测，确定APOE基因分型，不涉及昂贵的NGS设备，整个过程可以在临床实验室中常见的仪器上进行。此外，该方法还具有高灵敏度、特异性强等优点。优点。
技术研发人员：司鑫鑫 张晓 张全 王训琨 田珍 汤新颖 高嵩 石晓
受保护的技术使用者：青岛华晶生物技术有限公司
技术研发日：2022.09.22
技术公布日：2022/12/22