技术特征：
1.一种引物，用于检测2019-ncov的e基因，其特征在于，核苷酸序列为：上游引物序列：cgtttcggaagagayaggtacgttaatagt；下游引物序列：[5
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biotin]-agatcaggaactctagaagaattcagattttta。2.一种探针，用于检测2019-ncov的e基因，其特征在于，核苷酸序列为：探针序列：[5’fam]-tcgattgtgtgcgtactgctgcaatattgt[thf]aacgtgagtcttgt-[3’c3spacer]。3.一种组合物，是用于检测sars-ncov病毒的引物探针组合物，所述引物探针组合物特异性扩增并检测sars-ncov病毒的e基因；其特征在于：扩增所述e基因的特异性引物的核苷酸序列为：上游引物序列：cgtttcggaagagayaggtacgttaatagt；下游引物序列：[5
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biotin]-agatcaggaactctagaagaattcagattttta；所述探针的核苷酸序列为：探针序列：[5’fam]-tcgattgtgtgcgtactgctgcaatattgt[thf]aacgtgagtcttgt-[3’c3spacer]。4.一种层析试纸，其特征在于，包括pvc底板、样品垫、结合垫、检测垫、吸水垫；样品垫、结合垫、检测垫、吸水垫沿着溶液流动方向依次布置在所述底板上，样品垫与结合垫部分重合，结合垫与检测垫部分重合，吸水垫与检测垫部分重合；结合垫与检测垫重合1mm，吸水垫与检测垫重合1mm；其中，所述结合垫中包含：fam抗体-显色颗粒复合物、dnp-显色颗粒复合物，所述fam抗体-显色颗粒复合物经由显色乳胶微球与fam抗体混合反应形成；所述dnp-显色颗粒复合物经由显色乳胶微球与dnp混合反应形成；其中，所述检测垫包括硝酸纤维素膜，在检测垫上设置检测区域、、质控区域；检测区域经由链霉亲和素加载在硝酸纤维素膜上形成；质控区域其经由对dnp抗体加载在硝酸纤维素膜上形成。5.根据权利要求4所述的一种层析试纸，其特征在于，dnp抗体由dnp多克隆抗体与磷酸缓冲液组成。6.根据权利要求5所述的一种层析试纸，其特征在于，所述的显色颗粒均为红色乳胶微球。7.根据权利要求6所述的一种层析试纸，其特征在于，所述乳胶微球粒径为400nm。8.如权利要求4所述的一种层析试纸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：第一步骤，制备显色颗粒溶液，将显色颗粒溶液与fam抗体混合反应形成fam抗体-显色颗粒复合物，将显色颗粒溶液与dnp混合反应形成dnp-显色颗粒复合物，将fam抗体-显色颗粒复合物、dnp-显色颗粒复合物加载到结合垫上；第二步骤，链霉亲和素和dnp抗体分别加载在检测垫上的检测区域和质控区域；第三步骤，制备试纸大板：样本垫、结合垫、检测垫、吸水垫依次布置在pvc底板上形成试纸大板；其中，结合垫与检测垫两者部分重合，吸水垫与检测垫两者部分重合；
第四步骤，制备层析试纸，将步骤三中制备的试纸大板进行裁切，制备成检测试纸。9.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求3所述的组合物。10.一种试剂盒，其用于检测2019-ncov，其特征在于，所述试剂盒包括：扩增反应液、酶冻干粉及层析试纸；所述扩增反应液中包含：缓冲液
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29.4μl10μm上游引物
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2μl10μm下游引物
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2μl10μm探针
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0.6μldepc-h2o
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3.5μl激活剂
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2.5μl总rna
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10μl；上游引物序列为：cgtttcggaagagayaggtacgttaatagt；下游引物序列为：[5
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biotin]-agatcaggaactctagaagaattcagattttta；探针序列：[5’fam]-tcgattgtgtgcgtactgctgcaatattgt[thf]aacgtgagtcttgt-[3’c3spacer]；所述层析试纸包括如权利要求4至7任意一项所述的层析试纸。
技术总结
本申请公开了一种引物、探针、组合物、层析试纸及制备方法、试剂盒；属于生物检测技术领域；所述检测SARS-nCoV病毒的引物探针组合特异性扩增并检测SARS-nCoV病毒的E基因。本申请研发的引物探针可以保证快速、高效、特异性地对目的片段进行扩增，扩增时间仅需10min，最低检测拷贝数可达200 copies/ml；扩增产物检测型式为试纸条，肉眼鉴定，无需仪器辅助；且扩增过程无需变温和类似于PCR仪等复杂装置，只需要将反应温度控制在42℃即可。要将反应温度控制在42℃即可。要将反应温度控制在42℃即可。
技术研发人员：陈新利 魏爱琪 李美琼 傅明华 张亭 聂晶
受保护的技术使用者：江苏迅睿生物技术有限公司
技术研发日：2022.09.27
技术公布日：2022/12/30