技术特征：
1.一种i型内含子核酶，其特征在于，其为1)～3)中任意一种：1)核苷酸序列如seq id no.1所示的核酸；2)在seq id no.1所示的核酸中取代、缺失或添加一个或多个核苷酸，且与seq id no.1所示的核酸的调控功能相同或相似的核酸；3)与seq id no.1所示的核苷酸序列具有至少60％同源性的核酸。2.编码所述的i型内含子核酶的dna片段，其核苷酸序列如seq id no.2所示。3.dna表达框，其特征在于，从5’端到3’端依次包括反义核酸序列、igs序列、权利要求2所述的dna片段、目的靶标序列和anti-sense region的反向互补链；所述igs序列从5’端到3’端依次包括：与目的靶标序列的5’末端部分碱基反向互补的序列、固定序列和与目的靶标序列的3’末端部分碱基反向互补的序列；所述固定序列为碱基g；所述反义核酸序列由20～80个碱基随机组成。4.根据权利要求3所述的dna表达框，其特征在于，所述反义核酸序列和igs序列之间还包括随机序列1，所述随机序列1由0～20个碱基随机组成。5.根据权利要求3所述的dna表达框，其特征在于，所述目的靶标序列和所述anti-sense region的反向互补链之间还包括随机序列2；所述随机序列2由8～30个碱基随机组成。6.根据权利要求3所述的dna表达框，其特征在于，所述igs序列的长度为8-30bp；所述与目的靶标序列的5’末端部分碱基反向互补的序列的长度为3～15bp；所述与目的靶标序列的3’末端部分碱基反向互补的序列的长度为3～20bp。7.表达载体，包含启动子和权利要求3～6任一项所述的dna表达框。8.权利要求1所述的i型内含子核酶、权利要求2所述的dna片段、权利要求3～6任一项所述的表达载体或权利要求7所述的表达载体，在制备环状rna分子中的应用。9.环状rna分子的制备方法，其特征在于，以权利要求3～6任一项所述的dna表达框为模板，经体外成环，获得环状rna分子。10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述成环的反应体系包括：所述成环为：0-70℃下，反应0.5-24h。
技术总结
本发明提供了一种I型内含子核酶、其制备方法和在调控RNA成环中的应用。该环状RNA的核苷酸序列如SEQ ID1所示。本发明提供的I型反式内含子自剪接型核酶短小精湛，体外成环方法简单，成环效率高，所形成的环不引入额外核苷酸，在室温下能够长时间稳定存在。所形成的环在各种真核细胞内均能被高效转染，从而有效且便捷的用于外源性蛋白表达或者发挥miRNA调控、蛋白调控等ncRNA的功能。白调控等ncRNA的功能。
技术研发人员：肖飞 邹丽辉 吴萌 张兰馨 蒋琳
受保护的技术使用者：瑞思高科生物科技（北京）有限公司
技术研发日：2022.10.10
技术公布日：2023/3/14