一种具有预防或缓解血压升高功效的复合益生菌剂及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于益生菌剂技术领域，涉及一种具有预防或缓解血压升高功效的复合益生菌剂及其制备方法和应用。


背景技术：

2.高血压是迄今为止发现的最为普遍的心血管类疾病，同时也是是脑猝死、冠心病及肾脏功能衰竭等疾病的主要致病机理，因此防范与治疗高血压可以减少心血管系统疾病的危险性。目前，人们对高血压的研究、预防和治疗都日益重视，在降血压方面的多功能食品研究具有重要作用。高血压已经证明是由多种原因导致的，包含神经、遗传、精神、内分泌和血管紧张素转化酶(ace)等。
3.人体的降血压机理，一般是经过肾素血管紧张素系统和激肽-激肽再产生酶体系这组拮抗体系相互调控的。在人体中，肾元素流入血浆后将对血浆中的血管紧张素原进行水解过程，获得毛细血管张紧素ⅰ(at1)；由于血管紧张素转化酶ace的功能使得毛细血管张紧素ⅰ转化成毛细血管张紧素ⅱ(angⅱ)，因此毛细血管张紧素ⅱ既可以提高心脏的收缩能力，同时也可以导致血管平滑肌收缩而导致的高压增加。与此同时，ace也进行了调节激肽-激肽释放酶系统，从而导致具有血管舒缓功能的缓激肽转化为无活性的缓控释肽。ace协同作用于这二种体系，引起了人体内高压的上升。要想实现血压下降，就必须要抑制ace活性。
4.ace还会直接激活肾上腺皮质从而释放醛固酮，醛固酮的主要作用机制是通过减少了肾脏对盐分和水份的排泄，从而提高了细胞外液容量和人体血浆量，从而增加了静脉回电流，间接诱发了高血压。植物乳杆菌所产生的蛋白酶把部分活力片断剪切下来，并同时放出，这部分活力片断会同ace的活力中心融合在一起，ace活力被竞争性地控制，血管紧张素ⅰ就不可以转变为血管紧张素ⅱ，进而实现了降血压的目的。
5.当今提出的一级抗高血压药物为β受体阻断剂、利尿剂、毛细血管张紧素转化酶抑制药物(acei)、钙通道阻滞剂、毛细血管张紧素ⅱ二受体结合抑制药等五大类。每一种药物都有各自的特点，还有一定的副作用。
6.acei对各个时期的高血压病人均有一定疗效，既不致引起心率的增加，亦不致干扰副交感神经系统对血管平滑肌的调节作用，但经合成的acei主要不良反应是容易产生蛋白尿、皮疹、白细胞减少等。使用抗血压药物治疗是导致冠心病发病率增加的原因；药物治疗过程中会影响代谢方面的改变，特别是对糖、脂肪和尿酸代谢方面有潜在不利影响；药物治疗引发的血压下降出现脑血液减少的概率增加，同时会引发视力障碍、脑缺血和缺血性脑卒等。因此，通过非药物治疗高血压得到了越来越多的关注。


技术实现要素：

7.针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种具有预防或缓解血压升高功效的复合益生菌剂及其制备方法和应用。
8.为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
9.第一方面，本发明提供一种具有预防或缓解血压升高功效的复合益生菌剂，所述复合益生菌剂中的益生菌包括植物乳杆菌lactobacillus plantarum lp05菌株、干酪乳杆菌lactobacillus casei lc89菌株和瑞士乳杆菌lactobacillus helveticus lh76菌株。
10.本发明创造性地将植物乳杆菌lactobacillus plantarum lp05菌株、干酪乳杆菌lactobacillus casei lc89菌株和瑞士乳杆菌lactobacillus helveticus lh76菌株三种菌株进行复配，得到一种复合益生菌剂，各组分相互配合协同增效，与单一菌株相比，该复合益生菌剂具有更加显著的缓解血压升高的效果。
11.优选地，所述植物乳杆菌lactobacillus plantarum lp05菌株、干酪乳杆菌lactobacillus casei lc89菌株和瑞士乳杆菌lactobacillus helveticus lh76菌株的活菌数之比为(10-20):(5-10):(15-30)。
12.所述(10-20)中的具体点值可以选择10、12、14、15、16、17、18、20等。
13.所述(5-10)中的具体点值可以选择5、6、7、8、9、10等。
14.所述(15-30)中的具体点值可以选择15、17、18、20、22、25、28、30等。
15.上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
16.优选地，所述复合益生菌剂还包括保护剂。
17.优选地，所述保护剂包括脱脂乳和/或脱脂乳粉。
18.优选地，所述复合益生菌剂还包括载体。
19.优选地，所述载体包括微晶纤维素、菊粉、硬脂酸镁、糖醇或淀粉中的任意一种或至少两种的组合。
20.优选地，所述载体为微晶纤维素、糖醇、菊粉和淀粉的组合。
21.所述载体更优选微晶纤维素、糖醇、菊粉和淀粉的组合是因为在该组合方式下，复合益生菌剂更加稳定，能够长时间地保持产品形态和口感。
22.优选地，所述糖醇选自木糖醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇、山梨糖醇、异麦芽酮糖醇或乳糖醇中的任意一种或至少两种的组合。
23.优选地，所述淀粉选自醋酸酯淀粉、辛烯基琥珀酸淀粉钠、羟丙基二淀粉磷酸酯、磷酸酯双淀粉、酸处理淀粉、氧化淀粉、氧化羟丙基淀粉、乙酰化二淀粉磷酸酯或乙酰化双淀粉己二酸酯中的任意一种或至少两种的组合。
24.本发明所涉及的复合益生菌剂的剂型可以为冻干粉剂、片剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂等。
25.第二方面，本发明提供根据第一方面所述的具有预防或缓解血压升高功效的复合益生菌剂的制备方法，所述制备方法包括：
26.(1)将植物乳杆菌lactobacillus plantarum lp05、干酪乳杆菌lactobacillus casei lc89和瑞士乳杆菌lactobacillus helveticus lh76按配比与保护剂混合，得到乳化液；
27.(2)将步骤(1)得到的乳化液与载体混合，进行微包埋处理，得到包埋混合物；
28.(3)将步骤(2)得到的包埋混合物进行静电喷雾干燥，得到所述具有预防或缓解血压升高功效的复合益生菌剂。
29.第三方面，本发明提供根据第一方面所述的具有预防或缓解血压升高功效的复合
半胱氨酸1g，使用去离子水溶解，再加入1ml吐温80，定容至1l，灭菌冷却后，倒入灭菌后的培养皿中备用。
46.下述涉及的mrs液体培养基：称取蛋白胨10g、牛肉膏10g、葡萄糖20g、乳糖10g、酵母浸膏5g、柠檬酸氢二铵2g、k2po4·
3h2o 2g、mgso4·
7h2o 0.6g、mnso
4 0.01g和l-半胱氨酸1g，使用去离子水溶解，再加入1ml吐温80，定容至1l，灭菌冷却后，倒入灭菌后的培养皿中备用。
47.下述涉及的植物乳杆菌lp05、瑞士乳杆菌lh76、干酪乳杆菌lc89菌悬液：将菌接种于mrs液体培养基中，38℃下培养18h进行活化，连续活化2次，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于mrs液体培养基中，38℃下培养18h，得到菌液；将菌液在8000g下离心10min，取上清液过0.22μm无菌滤膜，得到上清液；使用pbs重悬菌体，即得。
48.以下实施例中各组分来源如下所示：
[0049][0050][0051]
实施例1
[0052]
本实施例验证三种菌的耐胃酸能力，步骤如下：
[0053]
(1)制备人工胃液：
[0054]
以质量分数计，人工胃液中含有0.20％的nacl以及0.30％的胃蛋白酶，使用hcl调节ph为3.0，过滤除菌备用。
[0055]
(2)耐胃酸能力测试：
[0056]
取1.0ml植物乳杆菌lp05、瑞士乳杆菌lh76、干酪乳杆菌lc89菌悬液(浓度为1
×
109cfu/ml，采用国标《gb4789.35-2016食品安全国家标准食品微生物学检测乳酸菌检测》中的方法测量菌液浓度)，分别与9.0ml ph为3.0的人工胃液混合，在37℃下厌氧静置培养，分别在开始0h和处理3h后取样，通过倾注培养法测定活菌数并计算其存活率，公式如下：
[0057]
存活率(％)＝n1/n0
×
100％，
[0058]
其中，n1：人工胃液处理3h后的活菌数；n0：0h的活菌数。测试结果见表1。
[0059]
表1
[0060][0061]
由表1数据可知：本发明所述的益生菌具有良好的耐胃酸能力，良好的耐酸能力为其制备预防或缓解高血压升高的产品创造了条件。
[0062]
实施例2
[0063]
本实施例验证三种菌的耐胆盐能力，步骤如下：
[0064]
菌液含量调整至108cfu/ml，3000r/min离心10min，清除上清液，另取含有0.3％胆盐的灭菌mrs液培养基添加于离心后的菌体，经震荡均匀后放入37℃恒温培养箱，连续取0h、3h内的样品，用灭菌pbs稀释并涂布于mrs平板，在37℃培育至36h后计数。公式如下：
[0065]
存活率(％)＝n1/n0
×
100％，
[0066]
其中，n1：处理3h后的活菌数；n0：0h的活菌数。测试结果见表2。
[0067]
表2
[0068]
菌株活菌数n0(0h)活菌数n1(3h)存活率(％)植物乳杆菌lp05(7.98
±
0.06)
×
108(7.04
±
0.10)
×
10890.3％瑞士乳杆菌lh76(7.25
±
0.12)
×
108(6.56
±
0.08)
×
10890.5％干酪乳杆菌lc89(7.16
±
0.09)
×
108(6.51
±
0.13)
×
10891.0％
[0069]
由表2数据可知：本发明所述的益生菌具有良好的耐胆盐能力，良好的耐胆盐能力为其制备预防或缓解高血压升高的产品创造了条件。
[0070]
实施例3
[0071]
本实施例提供一种具有预防或缓解血压升高功效的复合益生菌剂，制备方法如下：
[0072]
(1)将40份菌粉(植物乳杆菌lactobacillus plantarum lp05、干酪乳杆菌lactobacillus casei lc89和瑞士乳杆菌lactobacillus helveticus lh76的活菌数为15:5:20)与10份脱脂乳混合，得到乳化液；
[0073]
(2)将步骤(1)得到的乳化液与载体(微晶纤维素5份、糖醇5份、菊粉10份和淀粉10份)混合，进行微包埋处理，得到包埋混合物；
[0074]
(3)将步骤(2)得到的包埋混合物进行静电喷雾干燥，得到所述具有预防或缓解血压升高功效的复合益生菌剂。
[0075]
实施例4
[0076]
本实施例提供一种具有预防或缓解血压升高功效的复合益生菌剂，制备方法与实施例3的区别仅在于40份菌粉为活菌数为15:5的植物乳杆菌lactobacillus plantarum lp05和干酪乳杆菌lactobacillus casei lc89。其他步骤均保持不变。
[0077]
实施例5
[0078]
本实施例提供一种具有预防或缓解血压升高功效的复合益生菌剂，制备方法与实
施例3的区别仅在于40份菌粉为活菌数为15:20的植物乳杆菌lactobacillus plantarum lp05和瑞士乳杆菌lactobacillus helveticus lh76。其他步骤均保持不变。
[0079]
实施例6
[0080]
本实施例提供一种具有预防或缓解血压升高功效的复合益生菌剂，制备方法与实施例3的区别仅在于40份菌粉为活菌数为5:20的干酪乳杆菌lactobacillus casei lc89和瑞士乳杆菌lactobacillus helveticus lh76。其他步骤均保持不变。
[0081]
实施例7
[0082]
本实施例提供一种具有预防或缓解血压升高功效的复合益生菌剂，制备方法与实施例3的区别仅在于步骤(2)中的载体为糖醇10份、菊粉10份和淀粉10份。其他步骤均保持不变。
[0083]
实施例8
[0084]
本实施例提供一种具有预防或缓解血压升高功效的复合益生菌剂，制备方法与实施例3的区别仅在于步骤(2)中的载体为微晶纤维素10份、菊粉10份和淀粉10份。其他步骤均保持不变。
[0085]
实施例9
[0086]
本实施例提供一种具有预防或缓解血压升高功效的复合益生菌剂，制备方法与实施例3的区别仅在于步骤(2)中的载体为微晶纤维素5份、糖醇5份、淀粉20份。其他步骤均保持不变。
[0087]
实施例10
[0088]
本实施例提供一种具有预防或缓解血压升高功效的复合益生菌剂，制备方法与实施例3的区别仅在于步骤(2)中的载体为微晶纤维素5份、糖醇5份、菊粉20份。其他步骤均保持不变。
[0089]
测试例1
[0090]
复合益生菌剂的降血压效果测定：
[0091]
(1)实验动物：雄性原发性严重高血压大鼠(shr)，约八周龄，平均重量170～210g，由中科院上海市实验室动物管理中心供应，动物合格证编号：沪动合证字152号。雄性sd大鼠，8周龄，重量170～210g，由中科院上海市试验哺乳动物管理中心供应，动物符合资格证编号：沪动合证字152号。动物室内照明为12h照明，室内通风和空调设备正常，室温控制在22
±
3℃，相对湿度约为50～70％。
[0092]
(2)实验动物适应环境7天，并进行适应性测压，血压稳定后，开始进行连续灌胃，实验灌胃时间为每天上午9:00。把40只shr大鼠随机分为5组：模型对照组，实施例3组，实施例4组，实施例5组，实施例6组；将8只sd大鼠作为sd对照组。对照组灌胃生理盐水，实施例组灌胃各实施例制备的复合益生菌剂10mg/kg。
[0093]
(3)大鼠则在给药的前一周进行试压，待降压平稳之后进行试验，首先测量对大鼠的给药前降压，而后灌胃治疗，每日灌胃治疗一次，持续灌胃治疗4周，用bp-98a智能无创血压计测量shr尾部动脉的高压，反复三次，取得平均值，实测数值以平均值形式显示。如表3所示。
[0094]
表3
[0095][0096]
由表3的数据结果可知：本发明所涉及的复合益生菌剂具有显著的缓解血压升高的功效，且复合益生菌剂中植物乳杆菌lp05菌株、干酪乳杆菌lc89菌株和瑞士乳杆菌lh76菌株在上述功效上具有协同增效作用。
[0097]
应用例1
[0098]
本应用例提供一种益生菌饮料，所述益生菌饮料的制备原料以质量百分含量计包括：实施例3制得的复合益生菌剂5％、低聚果糖5％、果胶0.5％、大豆多糖0.5％、三氯蔗糖0.04％、余量为水。
[0099]
应用例2-8
[0100]
本应用例提供七种益生菌饮料，所述益生菌饮料的制备原料与应用例1的区别仅在于将实施例3制得的复合益生菌剂分别替换为等量的实施例4-10制得的复合益生菌剂，其他原料及含量均保持不变。
[0101]
测试例2
[0102]
测试益生菌饮料的稳定性：
[0103]
于4℃的条件下冷藏储存应用例1-8的益生菌饮料21天，目测观察组织状态。对各组产品进行打分，1分为分层现象明显，2分为具有分层现象但不明显，3分为无分层现象，非常均匀。结果如表4所示。
[0104]
表4
[0105]
样品打分应用例13应用例23应用例33应用例43应用例52应用例61应用例71应用例82
[0106]
由表4结果可知：使用本发明所涉及的复合益生菌剂制备的饮料产品具有良好的稳定性，其中复合益生菌剂中载体材料的组成方式显著影响饮料产品的稳定性。
[0107]
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种具有预防或缓解血压升高功效的复合益生菌剂及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
[0108]
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
[0109]
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。