一种经典树突状细胞亚群的体外诱导方法及其应用

文档序号:34583029发布日期:2023-06-28 14:48阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种经典树突状细胞亚群的体外诱导方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤1中还包括使用淋巴细胞分离液对所述脐带血进行密度梯度离心。

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤1中还包括使用cd34阳选kit(miltenyi biotec)分离得到所述cd34+的脐血干细胞。

4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤2中所述第一细胞因子组合为人的scf、flt3l和tpo细胞因子,所述人的scf、flt3l和tpo细胞因子在所述第一细胞因子组合中的浓度分别为100ng/ml。

5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述低密度为1x105/ml,所述基础培养基为stemcell technologies公司的sfemii。

6.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤3中所述第二细胞因子组合为人的scf细胞因子、人的flt3l细胞因子、人的gm-csf细胞因子、人的il4细胞因子;所述第二细胞因子组合还可以添加5ng/ml人的ifnγ细胞因子。

7.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤3中所述第二细胞因子组合中所述人的scf细胞因子的浓度为100ng/ml、所述人的flt3l细胞因子的浓度为100ng/ml、所述人的gm-csf细胞因子的浓度为2.5ng/ml、所述人的il4细胞因子的浓度为2.5ng/ml。

8.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤4中所述流式抗体包括由cd14,cd16,cd3,cd19,nk1.1,cd20抗体混合而成的标识谱系分化的抗体组合,hla-dr,cd141,cd1c,cd11c,xcr1。

9.如权利要求1所述的经典树突状细胞亚群的体外诱导方法在制备经典树突状细胞肿瘤疫苗中的应用。

10.如权利要求1所述的经典树突状细胞亚群的体外诱导方法在制备经典树突状细胞抗肿瘤药物中的应用。


技术总结
本发明公开了一种经典树突状细胞亚群的体外诱导方法及其应用,涉及细胞治疗、肿瘤防治、自身免疫病防治和疫苗开发领域。其中,体外诱导方法包括:获取脐血干细胞;脐血干细胞预扩增,低密度培养基;分化第10天收集并冻存;利用流式抗体检测分化情况,并对其中的cDC1和cDC2亚群进行流式分选。该方法在制备经典树突状细胞肿瘤疫苗或抗肿瘤药物中的应用。本发明体外诱导可以很容易达到10<supgt;8</supgt;级别的cDC细胞亚群,达到了现有报道的最高诱导效率的10000倍。通过流式细胞技术和功能检测证实cDC功能的特异性。因此,本发明为cDC亚群在抗肿瘤和自身免疫病等方面的应用铺平了道路。

技术研发人员:周海波,沈南,刘灿,王酉
受保护的技术使用者:上海交通大学医学院附属仁济医院
技术研发日:
技术公布日:2024/1/13
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