技术特征：
1.一种新型小鼠前脂肪细胞的分离方法，其特征在于，所述新型小鼠前脂肪细胞的分离方法包括：获取小鼠皮下腹股沟脂肪组织、性腺周围的脂肪组织以及肾周脂肪组织；将脂肪组织放在无菌培养皿中，将脂肪组织剪碎至肉糜状；取部分肉糜并置于离心管中，加入消化液轻柔颠倒混匀；置于水浴锅中水浴加热，于加热期间轻轻上下颠倒混匀组织样本。2.如权利要求1所述新型小鼠前脂肪细胞的分离方法，其特征在于，所述获取小鼠皮下腹股沟脂肪、性腺周围的脂肪以及肾周脂肪包括：获取小鼠皮下腹股沟脂肪，去除淋巴结；获取性腺周围的脂肪，去除结缔组织以及血管，同时获取肾周脂肪去除血管。3.如权利要求1所述新型小鼠前脂肪细胞的分离方法，其特征在于，所述取部分肉糜置于离心管中并加入消化液包括：将肉糜取3ml体积的量置于15ml离心管中，并加入10ml 10％的二型胶原酶加胰蛋白酶混合物。4.如权利要求1所述新型小鼠前脂肪细胞的分离方法，其特征在于，所述水浴加热的时间为45min。5.如权利要求1所述新型小鼠前脂肪细胞的分离方法，其特征在于，所述新型小鼠前脂肪细胞的分离方法包括以下步骤：步骤一，获取三周龄icr小鼠的皮下脂肪以及内脏脂肪，并去除薄膜、淋巴结、血管、结缔组织以及肌肉组织；步骤二，将脂肪组织置于无菌培养皿中用灭菌眼科剪剪至肉糜状，将脂肪组织团加入10％的二型胶原酶加胰蛋白酶混合物，消化；步骤三，消化完成后过筛，将细胞悬液离心弃上清，再次过滤后离心，用培养液冲匀，将细胞瓶置于培养箱中培养。6.如权利要求5所述新型小鼠前脂肪细胞的分离方法，其特征在于，所述步骤一中的内脏脂肪包括性腺脂肪以及肾周脂肪。7.如权利要求5所述新型小鼠前脂肪细胞的分离方法，其特征在于，所述步骤二中，按照1:10的体积比率添加10％的二型胶原酶加胰蛋白酶混合物，37℃消化40min。8.如权利要求5所述新型小鼠前脂肪细胞的分离方法，其特征在于，所述步骤三中，将细胞悬液二次离心后用10％fbs培养液冲匀。9.如权利要求5所述新型小鼠前脂肪细胞的分离方法，其特征在于，所述步骤三中，将细胞瓶置于37℃5％二氧化碳，湿度适宜的培养箱中培养。10.如权利要求5所述新型小鼠前脂肪细胞的分离方法，其特征在于，所述步骤三中，将细胞瓶置于培养箱培养12h后换液。
技术总结
本发明属于原代细胞分离技术领域，公开了一种新型小鼠前脂肪细胞的分离方法，获取三周龄ICR小鼠的皮下脂肪以及内脏脂肪，并去除薄膜、淋巴结、血管、结缔组织以及肌肉组织；将脂肪组织置于无菌培养皿中用灭菌眼科剪将脂肪组织剪至肉糜状，并将脂肪组织团加入10％的二型胶原酶加胰蛋白酶混合物，37℃消化40min；消化完成后过筛，将细胞悬液离心弃上清，再次过滤后离心，用10％FBS培养液冲匀；将细胞瓶置于37℃5％二氧化碳，湿度适宜的培养箱中培养，12h后换液。本发明提供的新型小鼠前脂肪细胞的分离方法，分离小鼠原代脂肪细胞的效率高且成功率高，解决了现有技术分离小鼠原代脂肪细胞的效率低、成功率低等问题。成功率低等问题。成功率低等问题。
技术研发人员：王梽名 王宇豪
受保护的技术使用者：王梽名
技术研发日：2022.10.13
技术公布日：2023/2/2