技术特征：
1.一种7α-羟基类固醇脱氢酶的制备方法，其特征在于：通过对含7α-羟基类固醇脱氢酶的菌种进行超声破碎，从而获得。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)配制ph 7.0-11.0的磷酸盐缓冲液；(2)配制600ml营养肉汤培养基，接种含7α-羟基类固醇脱氢酶的菌种后，置于30℃、120rpm的摇床中培养；(3)将步骤(2)中生长至对数期的菌液在0-20℃、9000-12000rpm转速下离心5-15min，去除上清液，将菌体用无菌水进行重悬、离心洗涤2-3次；(4)将步骤(3)所得菌体用ph 7.0-11.0的磷酸盐缓冲液重悬，0-4℃冰浴下在超声波细胞破碎仪中进行超声破碎，获得破碎液；(5)将步骤(4)所得破碎液在0-20℃、9000-12000rpm转速下离心3-10min，所得上清液即为7α-羟基类固醇脱氢酶的粗酶液。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所述含7α-羟基类固醇脱氢酶的菌种为瘤胃球菌、嗜麦芽黄单胞菌、梭状芽胞杆菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌和双歧杆菌中的至少一种。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，超声波细胞破碎仪工作2s停2s，共超声35-60min，直至菌液澄清。5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/l。6.一种权利要求1～5中任意一项所述制备方法所制得的7α-羟基类固醇脱氢酶的催化转化应用，其特征在于：用于催化cdca或者cdca包合物转化为7-酮石胆酸7k-lca。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：在所述7α-羟基类固醇脱氢酶的粗酶液中加入甲醇，然后投入作为底物的cdca或者cdca包合物，再加入烟酰胺腺嘌呤二核苷酸nad
+
，获得转化体系，其中：cdca在转化体系中的浓度为0.5mg/ml-3mg/ml，甲醇在转化体系中的体积浓度为10-35vol％，nad+在转化体系中的浓度为0.5-2.5mg/ml；将转化体系置于25-55℃、120rpm摇床中进行转化，转化时间10-60h，转化结束后水浴煮沸终止反应。
技术总结
本发明公开了一种7α-羟基类固醇脱氢酶的制备方法及其催化转化应用，是利用野生菌通过超声破碎制得7α-羟基类固醇脱氢酶，并利用该酶催化CDCA或者CDCA包合物转化为7K-LCA。本发明的转化方法可以大大缩短转化时间、提高转化效率，且该步反应是鹅去氧胆酸到熊去氧胆酸两步酶法转化中的关键步骤，为酶法两步转化熊去氧胆酸奠定了基础。去氧胆酸奠定了基础。去氧胆酸奠定了基础。
技术研发人员：吴庆喜 王静 刘彩霞 吴迎超
受保护的技术使用者：安徽大学
技术研发日：2022.10.14
技术公布日：2022/11/25