技术特征：
1.一种用于多交叉恒温扩增结合纳米生物传感检测肺炎支原体的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括置换引物、交叉引物和扩增引物；所述置换引物包括序列如seq id no:1所示的置换引物f1和序列如seq id no:2所示的置换引物f2；所述交叉引物包括序列如seq id no:3所示的交叉引物cp1和序列如seq id no:4所示的交叉引物cp2；所述扩增引物包括序列如seq id no:5所示的扩增引物c1，序列如seq id no:6所示的扩增引物c2，序列如seq id no:7所示的扩增引物d1，序列如seq id no:8所示的扩增引物d2，序列如seq id no:9所示的扩增引物r1和序列如seq id no:10所示的扩增引物r2；其中在扩增引物c1或者c2的5’端标记半抗原，在扩增引物d1或者d2的5’端标记生物素。2.根据权利要求1所述的扩增引物，其特征在于，在所述扩增引物c1的5’端标记半抗原，标记半抗原后的引物定义为扩增引物c1*；在所述扩增引物d1的5’端标记生物素，标记生物素后的引物定为扩增引物d1*。3.根据权利要求2所述的扩增引物，其特征在于，在所述扩增引物c1*的5’端所标记的半抗原为荧光素。4.权利要求1～3任一项所述的引物组合在制备检测肺炎支原体的试剂盒中的应用。5.一种基于非诊断目的的多交叉恒温扩增结合纳米生物传感检测目的基因的方法，所述方法包括以下步骤：(1)提取待检测样品的基因组；(2)提供权利要求1所述的引物组合；(3)在链移位型聚合酶、解链温度调节剂、步骤(2)引物组合存在下，使用待检测样品的基因组核酸作为模板恒温扩增dna；(4)使用纳米生物传感器检测步骤(3)的扩增产物。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述纳米生物传感器包括一背板，在所述背板上依次设置装有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜及吸水垫，在所述硝酸纤维素膜上依次设置检测线及控制线，在结合垫、检测线及控制线区域依次包被有色基团修饰的亲和素化的高分子纳米粒子、羊抗fitc抗体及生物素偶联的牛血清蛋白。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述恒温扩增是在64-66℃的环境中进行的。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述恒温扩增是在65℃的环境中进行的。9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述恒温扩增的时间为30分钟。
技术总结
本发明公开了一种多交叉恒温扩增结合纳米生物传感检测肺炎支原体的引物组合，所述引物组合能够针对肺炎支原体P1基因进行特异性扩增。本发明还公开了多交叉恒温扩增结合纳米生物传感检测肺炎支原体的方法，可以在30分钟内完成整个MCDA扩增，在其对肺炎支原体的特异性基因P1的检测中，检测下限可以低至10fg，具有非常高的灵敏度。另外，本发明提供的扩增方法具有很高的扩增特异性。在对常见的致病菌、条件致病菌及非肺炎支原体DNA的检测中，均为阴性扩增，只有肺炎支原体呈特异性扩增，说明所建立的方法具有极高的特异性，能准确地鉴定肺炎支原体，无假阳性及假阴性结果产生。无假阳性及假阴性结果产生。无假阳性及假阴性结果产生。
技术研发人员：申阿东 王亚翠 焦伟伟
受保护的技术使用者：首都医科大学附属北京儿童医院
技术研发日：2019.03.19
技术公布日：2023/3/17