一种猪伪狂犬病自组装纳米颗粒及其制备的疫苗和制备方法以及应用

文档序号:33769462发布日期:2023-04-18 20:46阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种猪伪狂犬病自组装纳米颗粒,其特征在于,是重组蛋白scls和stgd自组装得到;

2.根据权利要求1所述猪伪狂犬病自组装纳米颗粒,其特征在于,所述重组蛋白stgd的n端包含蜂毒素信号肽,c端含有8×his标签;

3.一种权利要求1或2所述猪伪狂犬病自组装纳米颗粒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

4.根据权利要求3所述制备方法,其特征在于,所述编码重组蛋白scls的核苷酸序列如seq id no:1所示。

5.根据权利要求4所述制备方法,其特征在于,将编码重组蛋白scls的核苷酸序列插入载体中经原核表达系统表达和纯化的方法为将编码重组蛋白scls的核苷酸序列先插入puc57载体中,经过限制性内切酶nco i和xho i酶切处理,回收scls基因再插入相同酶切处理的原核表达质粒pet-28a(+)中,得到的重组质粒pet-28a(+)-scls转化至bl21(ed3)大肠杆菌感受态中,经iptg诱导表达,镍柱纯化,得到重组蛋白scls。

6.根据权利要求3所述制备方法,其特征在于,所述含酶位点、肽标签的prv gd蛋白的核苷酸序列包括含bamhi/ecor i酶位点、肽标签的prv gd蛋白的核苷酸序列和含spe i/hindiii酶位点、spytag003肽标签的prv gd蛋白的核苷酸序列;

7.根据权利要求6所述制备方法,其特征在于,所述将含酶位点、肽标签的prv gd蛋白的核苷酸序列以双拷贝的形式插入杆状病毒转移载体中的方法,包括将含bamhi/ecor i酶位点、spytag003肽标签的prv gd蛋白的核苷酸序列和含spe i/hindiii酶位点、spytag003肽标签的prv gd蛋白的核苷酸序列分别插入杆状病毒转移载体pfbd2ph-p10-egfp的bamhi/ecor i克隆位点处和spe i/hindiii克隆位点处;

8.权利要求1或2所述猪伪狂犬病自组装纳米颗粒或权利要求3~7任意一项所述制备方法得到的猪伪狂犬病自组装纳米颗粒在制备防控猪伪狂犬病的疫苗中的应用。

9.一种防控猪伪狂犬病的纳米颗粒疫苗,其特征在于,包括权利要求1或2所述猪伪狂犬病自组装纳米颗粒或权利要求3~7任意一项所述制备方法得到的猪伪狂犬病自组装纳米颗粒和佐剂。

10.根据权利要求9所述防控猪伪狂犬病的纳米颗粒疫苗,其特征在于,所述猪伪狂犬病自组装纳米颗粒的终浓度为160~400μg/ml。


技术总结
本发明提供了一种猪伪狂犬病自组装纳米颗粒及其制备的疫苗和制备方法以及应用,属于生物制品技术领域。本发明提供的猪伪狂犬病纳米颗粒LSgD免疫小鼠后能够产生很强的针对PRV的特异性抗体与中和抗体。利用本发明所述方法制备的PRV gD抗原可以与纳米颗粒载体LS在体外自装成六十聚体的纳米颗粒,制备的疫苗能够激起机体产生强烈的体液免疫与细胞免疫反应,并对小鼠产生很好的保护效果,可作为一种非常有前景的候选基因工程疫苗来预防猪伪狂犬病。

技术研发人员:钱平,任旭皎,李祥敏
受保护的技术使用者:华中农业大学
技术研发日:
技术公布日:2024/1/13
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