技术特征：
1.一种体外高效扩增人黏膜相关恒定t细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将人外周血单个核细胞或人黏膜相关恒定t细胞重悬于不含外源物质及血清的t细胞扩增培养基中，同时培养体系中添加免疫细胞血清补充物、重组人白介素-12或重组人白介素-1b和重组人白介素-23，进行培养；2)在第0、5和10天，向培养体系中加入5-op-ru进行刺激，每2～3天更换t细胞扩增培养基，并补充与步骤1)相同浓度的免疫细胞血清补充物、重组人白介素-12或重组人白介素-1b和重组人白介素-23，在扩增第11天时，去除死细胞，流式细胞术检测mait细胞比率，当人黏膜相关恒定t细胞的细胞比率>70％时，收集细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述人黏膜相关恒定t细胞分离自人外周血或组织器官。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)的培养体系中还添加庆大霉素和normocin；优选地，所述庆大霉素的浓度为50μg/ml；优选地，所述normocin的浓度为100μg/ml。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)的培养体系中，所述免疫细胞血清补充物的终浓度为8％；所述重组人白介素-12或重组人白介素-1b的浓度为5～10ng/ml；所述重组人白介素-23的浓度为5～10ng/ml。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)培养体系中加入的5-op-ru终浓度为2～10nm；所述5-op-ru采用不含外源物质及血清的t细胞扩增培养基进行稀释；所述5-op-ru稀释和向培养体系的加入的过程，控制时间不超过5min；优选地，加入的5-op-ru终浓度为10nm。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括对收集细胞采用vα7.2磁珠进行提纯。7.权利要求1-5任一项所述方法扩增获得的人黏膜相关恒定t细胞。8.权利要求7所述的人黏膜相关恒定t细胞在制备治疗如下之一疾病的药物中的应用，其特征在于，所述疾病包括：1)感染性疾病；2)自身免疫性疾病；3)代谢性疾病；4)肿瘤。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述感染性疾病包括脓毒症、病毒和细菌感染；所述自身免疫性疾病包括炎症性肠病和多发性硬化症；所述代谢性疾病包括糖尿病和脂肪性肝病。10.权利要求7所述的人黏膜相关恒定t细胞作为细胞模型在研究人黏膜相关恒定t细胞在人类疾病中作用的应用；优选地，所述人类疾病包括感染性疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病和肿瘤；
优选地，所述感染性疾病包括脓毒症、病毒和细菌感染；优选地，所述自身免疫性疾病包括炎症性肠病和多发性硬化症；优选地，所述代谢性疾病包括糖尿病和脂肪性肝病。
技术总结
本发明公开了一种体外高效扩增人黏膜相关恒定T细胞的方法，包括：1)将人外周血单个核细胞或人MAIT细胞重悬于不含外源物质及血清的T细胞扩增培养基中，同时培养体系中添加免疫细胞血清补充物、IL-12或IL-1b和IL-23，进行培养；2)在第0、5和10天，加入5-OP-RU进行刺激，每2～3天更换培养基，并补充与步骤1)相同浓度的免疫细胞血清补充物、IL-12或IL-1b和IL-23，在扩增第11天时，去除死细胞，流式细胞术检测MAIT细胞比率，当MAIT细胞比率>70％时，收集细胞。本发明对于MAIT细胞比率小于5％的受试者同样可有效进行体外扩增，第10天MAIT细胞比率即可超过70％。即可超过70％。即可超过70％。
技术研发人员：李文森 韩菲 薛怡婷
受保护的技术使用者：清华大学深圳国际研究生院
技术研发日：2022.11.08
技术公布日：2023/3/7