技术特征：
1.一种脐带来源间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、细胞选择：选取在对数生长期的五代以内，脐带来源的间充质干细胞；s2、细胞培养：选择高糖培养基和血小板裂解物制备成细胞培养基，高糖培养基的质量分数在95%以上，将步骤s1选取的间充质干细胞置于细胞培养基中培养，直至细胞融合度达到90％以上；s3、外泌体促分泌：将步骤s2得到的含间充质干细胞的培养基，吸除上层培养基，并清洗，而后补充加入高糖培养基，放入二氧化碳培养箱中培养；s4、外泌体分离：将步骤s3得到的含间充质干细胞的培养基，吸除培养基后，用微孔水系过滤膜滤除细胞及其它杂质，取上清液封装，制得脐带来源的间充质干细胞外泌体。2.根据权利要求1所述的脐带来源间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述步骤s2中，所述细胞培养基中，高糖培养基的质量分数在97%，血小板裂解物的质量分数在3%。3.根据权利要求2所述的脐带来源间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述步骤s2中，所述高糖培养基选择gibco dmem高糖培养基，货号c11995500bt、90013或12100，所述血小板裂解物选择bi血小板裂解物，货号pltgold500r。4.根据权利要求1所述的脐带来源间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述步骤s3中，所述清洗采用pbs缓冲液清洗，清洗两次以上。5.根据权利要求1所述的脐带来源间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述步骤s3中，所述高糖培养基选择gibco dmem高糖培养基，货号31053036、90013或12100。6.根据权利要求6所述的脐带来源间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述步骤s3中，所述高糖培养基的加入量不低于20ml，所述二氧化碳培养箱中培养的时间控制在5天。7.根据权利要求1所述的脐带来源间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述步骤s4中，所述微孔水系过滤膜采用0.2微米的过滤膜。8.根据权利要求1所述的脐带来源间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述步骤s4中，所述取上清液封装前需进行无菌检测。9.一种权利要求1~8任意一项所述的脐带来源间充质干细胞外泌体的制备方法制备的脐带来源间充质干细胞外泌体。10.一种权利要求9所述的脐带来源间充质干细胞外泌体在糖尿病慢性创口修复产品和/或美容产品领域的应用。
技术总结
本申请一方面提供了一种脐带来源间充质干细胞外泌体的制备方法，包括以下步骤：选取在对数生长期的五代以内，脐带来源的间充质干细胞；选择高糖培养基和血小板裂解物制备成细胞培养基，将间充质干细胞置于细胞培养基中培养，直至细胞融合度达到90％以上；将经培养得到的含间充质干细胞的培养基，吸除上层培养基并清洗，而后补充加入高糖培养基，放入二氧化碳培养箱中培养；将再次培养得到的含间充质干细胞的培养基，吸除培养基后，用微孔水系过滤膜滤除细胞及杂质，取上清液封装。本申请另一方面还提供了上述方法制备的外泌体及应用。本申请培养过程简单、易于控制，分离过程易于操控，分离出的外泌体纯度较高，符合糖尿病慢性创口修复要求。创口修复要求。创口修复要求。
技术研发人员：张飞
受保护的技术使用者：北京泓凯生物科技有限公司
技术研发日：2022.12.07
技术公布日：2023/1/31