一种Apaf1基因敲除HEK293细胞系及构建方法和应用

技术特征：
1.一种apaf1基因敲除hek293细胞系，其特征在于：对hek293细胞中的apaf1基因进行敲除，得到apaf1基因敲除的hek293细胞系。2.根据权利要求1所述的apaf1基因敲除hek293细胞系，其特征在于：所述敲除为利用crispr/cas9技术实现。3.根据权利要求1所述的apaf1基因敲除hek293细胞系，其特征在于：所述hek293细胞为hek293e细胞。4.一种如权利要求1所述的apaf1基因敲除hek293细胞系构建方法，其特征在于：包括以下步骤：根据人apaf1基因序列设计sgrna，将其分别插入到表达载体中构建sgrna表达载体；sgrna表达载体转染hek293细胞，经嘌呤霉素筛选、细胞单克隆化处理、鉴定后获得敲除apaf1基因的hek293细胞系。5.根据权利要求4所述的apaf1基因敲除hek293细胞系构建方法，其特征在于：所述sgrna的核苷酸序列如seq id no1～3所示。6.根据权利要求4所述的apaf1基因敲除hek293细胞系构建方法，其特征在于：所述sgrna的敲除靶点位于apaf1基因第三外显子上；所述apaf1基因第三外显子的核苷酸序列如seq id no5所示。7.根据权利要求4所述的apaf1基因敲除hek293细胞系构建方法，其特征在于：所述嘌呤霉素的浓度为1.0～1.5μg/ml。8.一种如权利要求1所述的apaf1基因敲除hek293细胞系在重组蛋白生产中的应用。

技术总结
本发明公开一种Apaf1基因敲除HEK293细胞系及构建方法和应用，属于分子生物学技术领域。采用CRISPR/Cas9技术对HEK293细胞中的Apaf1基因进行敲除，得到Apaf1基因敲除的HEK293细胞系。经验证，在Apaf1基因敲除的HEK293E细胞中，瞬时或稳定表达重组蛋白，与正常HEK293E细胞相比，Apaf1基因敲除的HEK293E细胞中的重组蛋白表达水平显著升高。本发明提供的Apaf1基因敲除的HEK293E细胞有望成为重组蛋白高效表达与生产的宿主细胞，也为重组蛋白高效表达提供了一种新的解决方案。白高效表达提供了一种新的解决方案。白高效表达提供了一种新的解决方案。


技术研发人员：张俊河 王天云 肖云喜 牛敬媛 徐红彦 马静 贾岩龙 王小引
受保护的技术使用者：新乡医学院
技术研发日：2022.12.08
技术公布日：2023/3/16