一种导致BRPS的致病基因ASXL3突变的应用及检测试剂和应用的制作方法

本发明属于基因诊断，具体涉及一种导致brps的致病基因asxl3突变的应用及检测试剂和应用。

背景技术：

1、bainbridge-ropers综合征(简称brps)(mim 615485)是一种常染色体显性遗传性疾病，2013年bainbridge等首次报道该疾病；临床表现主要为精神运动发育迟缓，严重智力障碍，语言能力差或缺乏，肌张力低下，进食困难，生长不良和面部畸形。

2、bainbridge-ropers综合征患儿大部分患儿出生时体检正常。几乎所有患儿存在运动、语言及智力发育迟缓，而且程度严重。肌张力低下、喂养困难、特征性面容也是该病征性临床表现。部分患儿因拒食、喂养困难需管饲喂养，肌张力低下表现为全身软弱无力，自主动作少，部分患者可表现为流涎，康复治疗效果欠佳。颅面部特征主要包括：窄长型脸、拱形眉可呈轻微连眉、小且柱状突出的鼻翼，嘴角向下，面部表情呆滞等。手部尺侧偏斜也是bainbridge-rorpers综合征的特征性姿势。除此之外，部分病例可合并癫痫、睡眠障碍、自闭倾向。

3、bainbridge-ropers综合征是asxl3基因(mim 615115)突变导致的一种常染色体显性遗传病。asxl3基因定位于染色体18q12.1，基因全长173.0kb，包含12个外显子和11个内含子；asxl3与asxl1、asxl2同属asxl基因家族；asxl3编码2248个氨基酸组成的asxl3蛋白，负责聚集表观调节因子及转录因子至特征性基因位点，进行组蛋白修饰，参与胚胎发育、细胞增殖及肿瘤形成等过程。omim数据库上该疾病是被收录为常染色体显性遗传疾病，若父母双方其中一人携带asxl3致病突变，其子女会有50％的概率遗传到相同的致病突变，从而致病。

4、基因突变是导致bainbridge-ropers综合征发生发展的重要遗传基础，基因诊断是确诊bainbridge-ropers综合征的金标准。临床上需要针对不同突变建立相应的检测技术并用于明确病因和疾病诊断。然而目前临床上用于诊断bainbridge-ropers综合征的基因突变的种类十分有限，例如目前仅有报道公开基因检测用于bainbridge-ropers综合征的早期诊断，具体为通过基因检测asxl3基因发现存在新发杂合无义突变，为c.3106(外显子12)c>t，导致蛋白质改变为p.(arg1036*)。丰富诊断bainbridge-ropers综合征的基因突变位点为全面高效准确筛查患bainbridge-ropers综合征的人群，为指导优生有十分重要意义。

5、现有技术中对基因突变位点基因型的检测方法，可以采用限制性酶切片段长度多态性、单链构象多态性、等位基因特异的寡聚核苷酸杂交等方法完成，但这些检测方法均不能同时满足定性、定量及明确突变基因的序列的目的，所以需要针对特异突变位点的特异性扩增引物。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种导致brps的致病基因asxl3突变的应用，丰富基因诊断bainbridge-ropers综合征的突变位点的同时还能作为靶点为药物筛选、药效评价及靶向治疗提供基础。

2、本发明的目的还在于提供一种检测导致brps的致病基因asxl3突变位点的试剂，助力bainbridge-ropers综合征基因突变的筛查和诊断。

3、本发明提供了一种基因asxl3突变位点在制备bainbridge-ropers综合征诊断试剂或制备防治bainbridge-ropers综合征的药物中的应用，所述致病基因asxl3突变位点为asxl3:nm_030632.3:exon12:c.3343c>t:p.q1115*。

4、本发明提供了一种用于检测导致brps的致病基因asxl3突变位点的试剂，包括检测asxl3基因突变位点c.3343c>t的引物；

5、所述引物包括核苷酸序列如seq id no:1所示的asxl3-f和核苷酸序列如seq idno:2所示的asxl3-r。

6、优选的，所述试剂还包括测序引物；

7、所述测序引物包括核苷酸序列如seq id no:3所示的asxl3-seqf和核苷酸序列如seq id no:4所示的asxl3-seqr。

8、本发明提供了一种bainbridge-ropers综合征诊断试剂盒，包括所述试剂和pcr扩增试剂。

9、优选的，所述pcr扩增试剂包括dntp、10×pcr缓冲液、镁离子和tap聚合酶；

10、所述10×pcr缓冲液包含以下组分的水溶液：500mmol/lkcl、ph 8.3的100mmol/ltris-cl和15mmol/lmgcl2。

11、本发明提供了所述试剂在制备检测导致brps的致病基因asxl3突变位点的试剂盒中的应用。

12、本发明提供了一种检测基因asxl3突变位点的引物在制备bainbridge-ropers综合征辅助诊断试剂盒中的应用，所述基因asxl3突变位点为asxl3:nm_030632.3:exon12:c.3343c>t:p.q1115*。

13、优选的，所述引物为所述试剂。

14、优选的，利用所述试剂盒辅助诊断bainbridge-ropers综合征的方法，包括以下步骤：

15、用所述试剂盒检测样本中基因突变位点的基因型来诊断个体是否患有bainbridge-ropers综合征的风险；

16、若检测基因型是“c.3343c>t杂合子突变”，则为患者；

17、若检测基因型是“野生型”，则个体为正常人。

18、优选的，所述样本为血液、羊水和活检组织中的至少一种。

19、本发明提供了一种基因asxl3突变位点在制备bainbridge-ropers综合征诊断试剂或制备防治bainbridge-ropers综合征的药物中的应用，所述致病基因asxl3突变位点为asxl3:nm_030632.3:exon12:c.3343c>t:p.q1115*。本发明通过外显子组测序技术首次发现了asxl3:nm_030632.3:exon12:c.3343c>t:p.q1115*位点突变可以导致bainbridge-ropers综合征发病。一方面，通过检测受试者是否携带有上述突变，用于筛查或诊断bainbridge-ropers综合征致病基因突变患者，以提供优生优育和治疗干预指导。另一方面，本发明为bainbridge-ropers综合征的发病机制研究奠定了重要基础，为bainbridge-ropers综合征患者的治疗提供全新的理论依据。第三方面，本发明可以为治疗bainbridge-ropers综合征提供可能的药物靶点。

20、本发明所提供的bainbridge-ropers综合征诊断试剂盒，通过优化检测致病基因asxl3突变位点的引物和反应体系，大大提高检测结果的准确性和可靠性，可用于快速、有效地预测或诊断bainbridge-ropers综合征，并为其药物筛选、药效评价及靶向治疗提供新的技术支持。