检测血液肿瘤融合基因的引物组和方法与流程

文档序号:33818394发布日期:2023-04-19 18:14阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测血液肿瘤融合基因的引物组,其特征在于,所述引物组包括:

2.权利要求1所述的引物组在制备检测血液肿瘤融合基因试剂盒中的应用。

3.一种检测血液肿瘤融合基因的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1所述的检测血液肿瘤融合基因的引物组。

4.根据权利要求3所述的检测血液肿瘤融合基因的试剂盒,其特征在于,所述引物组的工作浓度为0.08μm~0.12μm。

5.一种检测血液肿瘤融合基因的方法,其特征在于,包括以下步骤:以待测样本的cdna为模板,采用权利要求3或4所述试剂盒进行血液肿瘤融合基因的扩增,对扩增产物进行末端修复后,连接特异性接头,再进行文库扩增,对文库进行上机测序。

6.根据权利要求5所述的检测血液肿瘤融合基因的方法,其特征在于,所述pcr扩增的反应体系包括:ddh2o5.4±0.1μl、10×buffer2±0.1μl、mgcl21.2±0.1μl、dntpmix0.4±0.1μl、引物混合物0.8±0.1μl、dnapolymerase0.2±0.05μl、cdna10±0.2μl。

7.根据权利要求5所述的检测血液肿瘤融合基因的方法,其特征在于,所述pcr扩增的反应程序包括:95℃5min;95℃45s,60℃45s,72℃60s,35个循环;75℃10min;4℃∞。

8.根据权利要求5所述的检测血液肿瘤融合基因的方法,其特征在于,所述文库扩增的反应体系包括:pcrsupermixhighfidelity50±2μl、libraryamplificationprimermix2.5±0.5μl、unamplifiedlibrary12.5±0.5μl。

9.根据权利要求5所述的检测血液肿瘤融合基因的方法,其特征在于,所述文库扩增的反应程序包括:95℃5min;95℃15s,58℃15s,70℃60s,7个循环;4℃∞。

10.根据权利要求5所述的检测血液肿瘤融合基因的方法,其特征在于,采用iongenestudios5plus平台进行上机测序。


技术总结
本发明公开了一种检测血液肿瘤融合基因的引物组和方法。在本发明中,针对62对血液肿瘤融合基因,设计并筛选目标基因扩增的特异性引物组,并通过优化多重PCR扩增体系中引物的浓度和文库构建的条件,基于IonGeneStudioS5Plus高通量测序平台进行测序,建立了检测血液肿瘤融合基因的方法,检测覆盖面广,可以同时检测多种基因融合,且检出的融合型均可区分亚型,提升了诊疗精准度。

技术研发人员:郭慈琳,易煜庭,李露,胡昌明,王华文,甘立佳
受保护的技术使用者:广州金域医学检验中心有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/1/13
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