技术特征：
1.基于era技术的对虾肝肠胞虫的引物与探针组合，其特征在于，包括一对era特异性引物和一条特异性荧光探针，所述引物的核苷酸序列如seq idno.1和seq id no.2所示，所述探针的核苷酸序列如seq id no.3和seq idno.4所示。2.根据权利要求1的基于era技术的对虾肝肠胞虫的引物与探针组合，其特征在于，核苷酸序列如seq id no.3所示的所述探针的3'端标记荧光报告基团，核苷酸序列如seq id no.4所示的所述探针的5'端标记荧光淬灭基团；在所述荧光报告基团和荧光淬灭基团之间插入一个四氢呋喃。3.根据权利要求2的基于era技术的对虾肝肠胞虫的引物与探针组合，其特征在于，所述荧光报告基团为fam，荧光淬灭基团为bhq1。4.根据权利要求2的基于era技术的对虾肝肠胞虫的引物与探针组合，其特征在于，核苷酸序列如seq id no.3所示的所述探针，自5'端起第30位碱基t标记荧光报告基团，核苷酸序列如seq id no.4所示的所述探针，自5'端起第1位碱基t标记荧光淬灭基团；核苷酸序列如seq id no.4所示的所述探针，3'端还标记阻抑聚合酶延伸或扩增的修饰基团。5.根据权利要求1～4任意一项所述的引物与探针组合用于era技术的对虾肝肠胞虫的快速检测方法，其特征在于，包括如下步骤：1)提取待测样本对虾的dna；2)以该dna为模板，采用上述引物对和荧光探针进行era扩增，用荧光检测装置检测扩增体系中荧光信号的变化，判断待测样本对虾是否感染肝肠胞虫。6.根据权利要求5所述的引物与探针组合用于era技术的对虾肝肠胞虫的快速检测方法，其特征在于，所述样本为成虾，则提取肝胰腺组织，所述样本为虾苗，则提取甲壳下组织。7.根据权利要求5所述的引物与探针组合用于era技术的对虾肝肠胞虫的快速检测方法，其特征在于，所述era扩增的温度为36～42℃。8.根据权利要求5所述的引物与探针组合用于era技术的对虾肝肠胞虫的快速检测方法，其特征在于，所述era扩增的反应时间为20min，共40个循环。9.根据权利要求5所述的引物与探针组合用于era技术的对虾肝肠胞虫的快速检测方法，其特征在于，所述era扩增的反应体系包括所述引物对、所述探针、溶解剂、dna模板和激活剂；所述引物的加量为2.0～3.0μl，探针加量为0.6～1.0μl。10.根据权利要求5所述的引物与探针组合用于era技术的对虾肝肠胞虫的快速检测方法，其特征在于，era扩增结果判定方法如下：era荧光扩增曲线呈“s”型且ct值≤35，判断为对虾肝肠胞虫阳性结果；era荧光扩增曲线不呈“s”型或ct值＞35，判断为对虾肝肠胞虫阴性结果。
技术总结
本发明提出了基于ERA技术的对虾肝肠胞虫快速检测方法及引物与探针组合，包括一对ERA特异性引物和一条特异性荧光探针，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。本发明建立的ERA技术的对虾肝肠胞虫快速检测方法，可以明显缩短对虾肝肠胞虫的检测时间；同时操作简单，灵敏度高、特异性强，可满足快速检测的需求，且检测成本低。且检测成本低。
技术研发人员：王孟强 李姣冰 胡景杰 包振民 王燕
受保护的技术使用者：中国海洋大学
技术研发日：2022.12.21
技术公布日：2023/3/28