技术特征：
1.一种外源args转移至块根或块茎类农作物内生菌中的评估方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)从块根或块茎类农作物种植土壤中分离土壤微生物保存、备用；(2)将p.putidakt2442供体菌、以及步骤(1)保存的土壤微生物淋入栽培基质中，将农作物的种子或种块播种在该栽培基质中培养；(3)在农作物成熟期后，取其农产品做显微切片，通过激光共聚焦显微镜观察，检测到有绿色荧光信号判断土壤中args成功转移进入块根或块茎农产品组织内生菌；分离农产品内生菌，对分离之后的农产品内生菌群进行dna提取，pcr扩增绿色荧光蛋白基因gfp，对gfp的拷贝数进行定量以判断外源args转移入块根或块茎组织内生菌中的水平。2.如权利要求1所述的评估方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述土壤微生物的分离过程为：将100g土壤加入到200ml、ph7.2磷酸缓冲液中，在室温、200r/min转速下震荡12h，静置2h，取上清液过0.45μm滤膜。3.如权利要求1所述的评估方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述p.putida kt2442供体菌具有氨苄青霉素、卡那霉素以及四环素抗性，其抗性基因与绿色荧光蛋白gfp基因在同一广宿主接合型质粒载体rp4上；该供体菌在其染色质上被标记了红色蛋白dsred基因。4.如权利要求1所述的评估方法，其特征在于，所述农作物选自胡萝卜、水萝卜、马铃薯、山药、牛蒡以及红薯中的任意一种。5.如权利要求1所述的评估方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述栽培基质的成分为按质量比20：20：50：10的草炭、蛭石、炉渣、珍珠岩混合而成，混合后进行高温高压灭菌。
技术总结
本发明公开了一种外源ARGs转移至块根或块茎类农作物内生菌中的评估方法，包括：(1)从块根或块茎类农作物种植土壤中分离土壤微生物保存、备用；(2)将PseudomonasputidaKT2442供体菌、以及步骤(1)保存的土壤微生物淋入栽培基质中，将农作物的种子或种块播种在该栽培基质中培养；(3)成熟后，取其块根或块茎进行内生菌分离，做显微切片，在激光共聚焦显微镜下检测到有绿色荧光信号，定性判断土壤中ARGs成功转移进入内生菌中；内生菌群分离，并进行DNA提取，PCR扩增绿色荧光蛋白基因gfp，对gfp的拷贝数进行定量以判断ARGs转移入农作物内生菌的水平。本发明方法既能对外源ARGs能否转移进入块根(茎)类农产品内生菌中进行定性评估，又能定量评估，结果准确可靠。结果准确可靠。结果准确可靠。
技术研发人员：张维国 高岩 张国良 常雅军 梁思洲 刘丽珠
受保护的技术使用者：江苏省农业科学院
技术研发日：2022.12.23
技术公布日：2023/3/21