细胞凋亡抑制剂5(API5)用于上皮重建的应用

发明领域本发明涉及重组细胞凋亡抑制剂5(api5)蛋白。本发明进一步涉及包含此类重组蛋白的组合物，以及这些重组蛋白用于上皮重建(epithelial restitution)和治疗相关疾病和病症的用途。序列表本技术含有序列表，所述序列表以ascii格式通过电子方式提交并且由此通过引用方式以其整体并入。所述ascii副本创建于2022年3月2日，名为243735_000245_sl.txt，并且大小为60,412字节。

背景技术：

1、免疫介导的上皮屏障损伤被认为是炎症性肠病(ibd)诸如克罗恩病的发病机制中的中心事件。虽然已经开发了许多针对免疫效应物的策略(包括那些阻断tnfα或淋巴细胞迁移的策略)，但是这些干预措施并不能区分病理性炎症和维持肠道微生物群稳态所需的免疫过程。增强上皮细胞对免疫介导的损伤的重建能力的策略可有效促进长期缓解而不损害免疫系统。然而，目前尚不存在此类疗法。本技术解决了这一需求和其他相关需求。

技术实现思路

1、在一方面，本文提供了包含细胞凋亡抑制剂5(api5)蛋白或其片段或变体的重组蛋白。在一些实施方案中，该api5蛋白包含seq id no:1或2的氨基酸序列，或者与seq idno:1或2的氨基酸序列具有至少90％同一性的序列。在一些实施方案中，api5的片段包含api5的n末端heat重复区。在一些实施方案中，api5的片段包含seq id no:1的残基1-448。在一些实施方案中，api5的片段包含seq id no:1的残基1-206。

2、在一些实施方案中，该api5蛋白或其片段或变体与一个或多个异源部分在遗传上融合和/或在化学上缀合。在一些实施方案中，该一个或多个异源部分包含一个或多个亲和标签。在一些实施方案中，该亲和标签是his标签、avi标签、血凝素(ha)标签、flag标签、myc标签、gst标签、mbp标签、几丁质结合蛋白标签、钙调蛋白标签、v5标签、抗生蛋白链菌素结合标签、绿色荧光蛋白(gfp)、yfp、rfp、cfp、mcherry、tdtomato、sumo标签、泛素标签或它们的组合。

3、在一些实施方案中，该一个或多个异源部分包含his6标签(seq id no:78)和avi标签，并且任选地包含mkhhhhhhssglndifeaqkiew he(seq id no:9)的氨基酸序列。在一些实施方案中，该重组蛋白进一步包含介于api5蛋白或其片段或变体和该一个或多个亲和标签之间的蛋白酶切割位点。在一些实施方案中，该蛋白酶切割位点是t ev蛋白酶的切割位点，并且任选地包含enlyfqgs(seq id no:10)的氨基酸序列。

4、在一个实施方案中，该重组抗体包含seq id no:3的氨基酸序列。

5、在一个实施方案中，该重组抗体包含seq id no:6的氨基酸序列。

6、在一些实施方案中，该一个或多个异源部分包含特异性地结合白蛋白的部分。在一些实施方案中，特异性地结合白蛋白的部分包含seq id no:12-66、76和77中任一项的氨基酸序列。在一些实施方案中，特异性地结合白蛋白的部分选自萘酰基磺酰胺、二苯基环己醇磷酸酯、9-芴基甲氧基羰基(fmoc)、通过马来酰亚胺基团与16-硫烷基十六烷酸连接的fmoc衍生物、具有马来酰亚胺的双香豆素衍生物、具有马来酰亚胺的伊文思蓝(evansblue)衍生物、二氟尼柳-γglu-lys(±o2oc)-吲哚美辛、与γglu接头偶联的石胆酸、6-(4-(对碘苯基)丁酰胺基)己酸酯、a083/b134、a099/b344、89d03(ac-wweqdrdwddfdvfgggtp-nh2，seq id no:67)、酰化的七肽f-标签(荧光素-eyek(棕榈酸酯)eye-nh2，seq id no:68)、二硫环化肽sa21(ac-rliediclprwgclwedd-nh2，seq id no:69)、头尾环化肽hsa-1(具有可变赖氨酸(k*)的ak*k*pgk*ak*pg，seq id no:70)、abd035、abdcon、darpin、albudab、dsfvca645、纳米抗体nb.b201和vnar e06。在一些实施方案中，该白蛋白是大鼠白蛋白、兔白蛋白或人白蛋白。在一些实施方案中，特异性地结合白蛋白的部分与该api5蛋白或其片段或变体的n末端在遗传上融合或在化学上缀合。在一些实施方案中，特异性地结合白蛋白的部分与该api5蛋白或其片段或变体的c末端在遗传上融合或在化学上缀合。在一些实施方案中，特异性地结合白蛋白的部分经由接头(例如，肽基接头或非肽基接头)与该api5蛋白或其片段或变体在遗传上融合或在化学上缀合。

7、在一些实施方案中，该一个或多个异源部分包含人igg fc结构域。在一些实施方案中，该fc结构域被修饰以改变该结构域的效应子功能(effector function)。在一些实施方案中，该fc结构域被修饰以提高重组蛋白的半衰期。

8、在一些实施方案中，该一个或多个异源部分包含白蛋白。在一些实施方案中，该一个或多个异源部分包含聚乙二醇(peg)聚合物。在一些实施方案中，该重组蛋白被修饰以在该重组蛋白中引入一个或多个糖基化位点。

9、在另一个方面，本文提供了编码本文所述的重组蛋白的经分离的多核苷酸。在一些实施方案中，该经分离的多核苷酸是mrna。

10、在另一个方面，本文提供了包含本文描述的多核苷酸的载体。

11、在另一个方面，本文提供了包含本文描述的多核苷酸或载体的宿主细胞。

12、在另一个方面，本文提供了药物组合物，其包含本文描述的重组蛋白、多核苷酸或载体以及药学上可接受的载剂(carrier)或赋形剂。

13、在另一个方面，本文提供了产生本文所述的重组api5蛋白的方法，该方法包括使本文所述的宿主细胞在使由多核苷酸编码的api5蛋白表达的条件下生长。该方法可以进一步包括分离该蛋白质。

14、在另一个方面，本文提供了保护上皮细胞免于细胞死亡的方法，该方法包括使上皮细胞与治疗有效量的本文所述的重组蛋白、多核苷酸或载体，或其药物组合物接触。在一些实施方案中，该上皮细胞是肠上皮细胞。在一些实施方案中，该上皮细胞是潘氏(paneth)细胞。

15、在另一个方面，本文提供了恢复有此需要的受试者的肠上皮屏障的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的重组蛋白、多核苷酸、载体，或它们的药物组合物。在一些实施方案中，该受试者患有胃肠疾病。在一些实施方案中，该胃肠疾病是炎症性肠病、移植物抗宿主病、结肠袋炎、免疫检查点抑制剂相关结肠炎、放射诱导的胃肠道毒性、肠易激综合征、短肠综合征、感染性胃肠炎或乳糜泻。在一些实施方案中，该炎症性肠病是克罗恩病。在一些实施方案中，该炎症性肠病是溃疡性结肠炎。

16、在另一个方面，本文提供了治疗有此需要的受试者的胃肠疾病的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的重组蛋白、多核苷酸，或载体，或它们的药物组合物。在一些实施方案中，该胃肠疾病是炎症性肠病、移植物抗宿主病、结肠袋炎、免疫检查点抑制剂相关结肠炎、放射诱导的胃肠道毒性、肠易激综合征、短肠综合征、感染性胃肠炎或乳糜泻。在一些实施方案中，该炎症性肠病是克罗恩病。在一些实施方案中，该炎症性肠病是溃疡性结肠炎。

17、在本文所述方法的各种实施方案中，该重组蛋白、多核苷酸、载体或药物组合物是通过静脉内、经口、直肠内施用或者经由通过内窥镜的递送来施用。

18、在一些实施方案中，本文描述的方法进一步包括施用一种或多种另外的剂。该一种或多种另外的剂可以抑制tnfα和/或淋巴细胞迁移。在一些实施方案中，该一种或多种另外的剂包括整联蛋白抑制剂或鞘氨醇-1-磷酸酯(s1p)受体调节剂。在一些实施方案中，该整联蛋白抑制剂是维得利珠单抗(安吉优(entyvio))、依曲利组单抗(etrolizumab)、pn-943、zp10000或morf-057。在一些实施方案中，该s1p受体调节剂是芬戈莫德、奥扎莫德、依曲莫德或阿米莫德。

19、在本文描述的方法的各种实施方案中，该受试者是人。