用于增加蛋白质分泌的信号肽的制作方法

文档序号:36241456发布日期:2023-12-02 03:25阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种编码融合蛋白的核酸分子,所述融合蛋白从n-端到c-端包含

2.根据权利要求1所述的核酸分子,其中与表达权利要求1中定义的核酸分子,但该核酸分子包含野生型酿酒酵母α-交配因子分泌信号(比如seq id no:4)而非权利要求1中定义的分泌信号,的所述真核宿主细胞相比,所述分泌信号增加所述目的蛋白自真核宿主细胞中的分泌。

3.根据权利要求1或2所述的核酸分子,其中所述源自kre1蛋白的信号肽序列包含seqid no:1或其功能同系物。

4.根据权利要求1或2所述的核酸分子,其中所述源自swp1蛋白的信号肽序列包含seqid no:2或52或其功能同系物。

5.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子,其中所述mfα前导序列包含seq idno:3、53或74-80中的任一个或其功能同系物,优选地包含seq id no:3或53或其功能同系物。

6.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子,其中所述mfα前导序列在对应于seqid no:53的位置23的位置处包含ser和/或在对应于seq id no:53的位置64的位置处包含glu。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的核酸分子,其中所述目的蛋白选自抗体,比如嵌合抗体、人源化抗体或人抗体,或双特异性抗体,或诸如fab或f(ab)2的抗原结合抗体片段,诸如scfv的单链抗体,诸如骆驼的vhh片段的单结构域抗体或重链抗体或结构域抗体(dabs),人工抗原结合分子,比如darpin、ibody、affibody、humabody或基于脂质运载蛋白家族多肽的突变蛋白,酶,比如加工酶,细胞因子,生长因子,激素,蛋白抗生素,诸如毒素融合蛋白的融合蛋白,结构蛋白,调节蛋白和疫苗抗原,优选其中所述目的蛋白为治疗性蛋白、食品添加剂或饲料添加剂。

8.根据权利要求1至7中任一项所定义的分泌信号。

9.一种表达盒或载体,其包含权利要求1至7中任一项所述的核酸分子和与其可操作地连接的启动子。

10.一种重组真核宿主细胞,其包含权利要求1至7中任一项所述的核酸分子,或权利要求9所述的表达盒或权利要求9所述的载体。

11.根据权利要求10所述的重组真核宿主细胞,其中所述宿主细胞是真菌或酵母宿主细胞。

12.根据权利要求11所述的重组真核宿主细胞,其中所述酵母宿主细胞选自komagataella phaffii(巴斯德毕赤酵母)、多形汉森酵母、酿酒酵母、奇异酵母、真贝酵母、库德里阿兹威酵母、克鲁维酵母、葡萄汁酵母、乳酸克鲁维酵母、解脂耶氏酵母、甲醇毕赤酵母、博伊丁假丝酵母、komagataella spp.和粟酒裂殖酵母,或其中所述真菌宿主细胞选自里氏木霉或黑曲霉。

13.根据权利要求10至12中任一项所述的重组真核宿主细胞,其中所述宿主细胞被工程化以过表达信号识别颗粒(srp)的一种或多种组分。

14.一种在真核宿主细胞中制备目的蛋白的方法,所述方法包括

15.一种增加目的蛋白自真核宿主细胞中的分泌的方法,所述方法包括在所述真核宿主细胞中表达权利要求1至7中任一项所定义的核酸分子,和任选地工程化所述真核宿主细胞以过表达信号识别颗粒(srp)的一种或多种组分,从而与表达包含野生型酿酒酵母α-交配因子分泌信号(比如seq id no:4)而非权利要求1至7中任一项所定义的所述分泌信号的权利要求1至7中任一项所述的核酸分子的所述宿主细胞相比增加所述目的蛋白的分泌。

16.根据权利要求14或15所述的方法,其包括

17.根据权利要求14至16中任一项所述的方法,其中将所述核酸分子整合在所述宿主细胞的染色体中或包含在未整合到所述宿主细胞的基因组中的表达盒、载体或质粒中。

18.根据权利要求14至17中任一项所述的方法,其中所述真核宿主细胞是真菌或酵母宿主细胞。

19.根据权利要求14至18中任一项所述的方法,其中所述酵母宿主细胞选自komagataella phaffii(巴斯德毕赤酵母)、多形汉森酵母、酿酒酵母、乳酸克鲁维酵母、解脂耶氏酵母、甲醇毕赤酵母、博伊丁假丝酵母、komagataella spp.和粟酒裂殖酵母,或其中所述真菌宿主细胞选自里氏木霉或黑曲霉。

20.根据权利要求14至19中任一项所述的方法,其中所述目的蛋白选自抗体,比如嵌合抗体、人源化抗体或人抗体,或双特异性抗体,或诸如fab或f(ab)2的抗原结合抗体片段,诸如scfv的单链抗体,诸如骆驼的vhh片段的单结构域抗体或重链抗体或结构域抗体(dabs),人工抗原结合分子,比如darpin、ibody、affibody、humabody或基于脂质运载蛋白家族多肽的突变蛋白,酶,比如加工酶,细胞因子,生长因子,激素,蛋白抗生素,诸如毒素融合蛋白的融合蛋白,结构蛋白,调节蛋白和疫苗抗原,优选其中所述目的蛋白为治疗性蛋白、食品添加剂或饲料添加剂。

21.如权利要求1至8中任一项所定义的分泌信号用于增加目的蛋白自真核宿主细胞中的分泌的用途。

22.根据权利要求21所述的用途,其中与表达包含野生型酿酒酵母α-交配因子分泌信号(比如seq id no:4)而非权利要求1中所定义的分泌信号的权利要求1中定义的融合蛋白的所述真核宿主细胞相比,所述分泌信号增加所述目的蛋白自真核宿主细胞中的分泌。

23.权利要求10至13中任一项所述的重组真核宿主细胞用于制备目的蛋白的用途。

24.根据权利要求1至7中任一项所述的融合蛋白,其中所述信号肽序列源自kre1蛋白。

25.根据权利要求1至7中任一项所述的融合蛋白,其中所述信号肽序列源自swp1蛋白。

26.一种分泌信号,所述分泌信号包含

27.一种分泌信号,所述分泌信号包括

28.一种通过在表达权利要求1至7中任一项所述的核酸分子和在切割分泌信号后分泌目的蛋白的条件下培养权利要求10至13中任一项所述的重组真核宿主细胞,并自宿主细胞培养物中分离目的蛋白,并任选地纯化和任选地修饰和任选地配制所述目的蛋白来生产目的蛋白的方法。


技术总结
本发明涉及一种编码融合蛋白的核酸分子,所述融合蛋白包含分泌信号和目的蛋白,所述分泌信号包含(i)源自KRE1蛋白的信号肽序列或源自SWP1蛋白的信号肽序列;和任选地(ii)α‑交配因子(MFα)前导序列。本发明进一步涉及一种如本文定义的分泌信号、包含所述核酸分子的表达盒以及包含所述核酸分子或表达盒的重组真核宿主细胞。还包括一种在真核宿主细胞中制备目的蛋白的方法和一种增加目的蛋白自真核宿主细胞中的分泌的方法。还提供了所述分泌信号用于增加重组目的蛋白自真核宿主细胞中的分泌的用途和重组宿主细胞用于制备重组目的蛋白的用途。

技术研发人员:R·扎赫尔,O·阿塔·阿依库,D·马塔诺维奇,B·伽瑟
受保护的技术使用者:勃林格殷格翰 RCV 两合公司
技术研发日:
技术公布日:2024/1/16
当前第2页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1