一种烟草气孔开度调控因子及其应用的制作方法

文档序号:34392913发布日期:2023-06-08 10:52阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种气孔开度调控因子ntmyb184,其特征在于,所述气孔开度调控因子ntmyb184的氨基酸序列为seq id no:1。

2.一种气孔开度调控因子ntmyb184,其特征在于,所述气孔开度调控因子ntmyb184的基因序列为seq id no:2。

3.根据权利要求1或2所述的气孔开度调控因子ntmyb184,其特征在于,所述气孔开度调控因子ntmyb184为烟草nicotiana tabacum l.的气孔开度调控因子ntmyb184。

4.根据权利要求2所述的气孔开度调控因子ntmyb184,其特征在于,所述气孔开度调控因子ntmyb184的基因序列的扩增引物包括:

5.根据权利要求2所述的气孔开度调控因子ntmyb184,其特征在于,所述气孔开度调控因子ntmyb184的基因序列的pcr扩增体系包括:4ng/μl植物的cdna,5×phusion hf反应缓冲液0.2μl/μl,0.2mm dntp,0.04u/μl的high-fidelity dna polymerase,0.2μm的正反向引物,水。

6.根据权利要求5所述的气孔开度调控因子ntmyb184,其特征在于,所述pcr扩增程序包括:98℃,30秒;以98℃,7秒;62℃,30秒;72℃,45秒为1个循环,共35个循环;72℃延伸7分钟。

7.根据权利要2所述的气孔开度调控因子ntmyb184,其特征在于,所述气孔开度调控因子ntmyb184的基因序列的表达载体pentrtmntmyb184通过lr反应进一步连接得到可调控气孔开度的表达载体pk2gw7-ntmyb184。

8.根据权利要求7所述的气孔开度调控因子ntmyb184,其特征在于,所述lr反应的体系包括:6.25ng/μl-18.75ng/μl的pentrtmntmyb184,0.0625μl/μl的连接载体,其余为tebuffer。

9.根据权利要求8所述的气孔开度调控因子ntmyb184,其特征在于,所述lr反应的步骤包括:连接反应体系混匀,冰浴2min,混匀;加入0.2μl/μllr cloneasetmⅱ enzyme mix,混匀,离心,25℃水浴1h;然后加入0.9μl/μl proteinase k,混匀,37℃水浴10min。

10.一种气孔开度调控因子ntmyb184的应用,其特征在于,所述应用为调控烟草的气孔开度。


技术总结
本发明涉及一种烟草气孔开度调控因子及其应用,属于遗传工程技术领域。所述一种气孔开度调控因子NtMYB184的氨基酸序列中包含:R2重复序列、R3重复序列、SG7结构域[K/R][R/x][R/K]xGRT[S/x][R/G]xx[M/x]K。所述一种气孔开度调控因子NtMYB184的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。野生型烟草气孔开度为0.3992,基于过表达气孔开度调控因子NtMYB184基因的转基因植株(OE)气孔开度为0.4673,转基因植株与野生型相比气孔开度增加17%左右,表明过表达气孔开度调控因子NtMYB184基因能够增加气孔开度。因此,烟草气孔开度调控因子NtMYB184在调控烟草气孔开度方面具有较大的应用前景。

技术研发人员:宋中邦,赵璐,王丙武,隋学艺,高玉龙,师君丽
受保护的技术使用者:云南省烟草农业科学研究院
技术研发日:
技术公布日:2024/1/13
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